JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

وتقدم (PAGE) نظام طريقة لتحقيق الاستقرار وفصل بروتين المجمعات الأم من المحللة أنسجة معدلة باستخدام بروتين عبر رابط-أمين رد الفعل مضافا إلى رواية اثنين من الأبعاد هلام بولي أكريلاميد الكهربائي.

Abstract

هناك العديد من وسائل متطورة لتنقية ودراسة البروتينات واحدة والببتيدات. ومع ذلك، يتم تنفيذ معظم الوظائف الخلوية من قبل شبكات مجمعات البروتين التفاعل، والتي غالبا ما تكون صعبة للتحقيق بسبب تجليدها هو غير التساهمية ومضطرب بسهولة عن طريق تقنيات تنقية. يصف هذا العمل وسيلة لتحقيق الاستقرار وفصل بروتين المجمعات الأم من أنسجة معدلة باستخدام ثنائي الأبعاد بولكرلميد الكهربائي للهلام. يتم تحميل الأنسجة المحللة على غير تغيير طبيعة جل بولي أكريلاميد الأزرق الأصلي، ثم يتم تطبيق تيار كهربائي حتى يهاجر البروتين على بعد مسافة قصيرة في هلام. قطاع هلام يحتوي على بروتين ترحيلها ثم يتم رفعه وحضنت مع dithiobis-أمين رد الفعل عبر ربط الكاشف (succinimidyl بروبيونات)، والتي تستقر تساهميا مجمعات البروتين. قطاع هلام يحتوي على مجمعات عبر ربط ثم يتم صبها في دوديسيل الصوديوم هلام كبريتات بولي أكريلاميد، وريتم فصل انه المجمعات تماما. ويعتمد هذا الأسلوب على التقنيات والمواد مألوفة لمعظم علماء الأحياء الجزيئية، وهذا يعني أنها غير مكلفة وسهلة التعلم. بينما هي محدودة في قدرتها على فصل كاف مجمعات كبيرة للغاية، ولم تكن ناجحة عالميا، كانت الطريقة قادرة على التقاط مجموعة واسعة من المجمعات مدروسة، وينطبق المرجح أن العديد من الأنظمة المثيرة للاهتمام.

Introduction

وظيفة الخلوية العادية تعتمد على تفاعلات البروتين البروتين 1 و 2. ونتيجة لذلك، وغالبا ما يتم وضع علامة الأمراض التي تصيب الإنسان من الاضطرابات في التجمع وسلوك مختلف المجمعات البروتين 3. القدرة على تميز هذه التفاعلات هي بالتالي حرجة. تتطلب الوسائل الحالية للكشف عن هذه التفاعلات تنقية البروتينات المستهدفة، وغالبا ما تليها المنسدلة من شركاء التفاعل بهم. ويتم إنجاز تنقية التقليدية عن طريق الطرد المركزي التفاضلي، وهطول الأمطار، و / أو اللوني 4. هذه الأساليب هي مضيعة للوقت، ويجب تغييرها لكل بروتين الهدف، وغالبا ما تؤدي إلى عوائد منخفضة. وتشمل أساليب تنقية الحديثة انصهار علامات الببتيد لاستهداف البروتينات، تليها مناعي أو استخراج على أعمدة محملة الخرز بد أن جزيء القبض على 5،"> 6. ولئن كان هذا للمد إلى العديد من البروتينات، فإنه يتطلب تسلسل تعديل الهدف، ما قد يؤدي في التركيبات التي تختلف في تقارب للشركاء ملزم المعتادة، والطبيعة الحساسة لبعض تفاعلات البروتين البروتين يعني هذا الأسلوب قد لا تكون قابلة للتطبيق في العديد من المواقف. بالإضافة إلى ذلك، المقايسات المنسدلة استخدامه لتعيين تفاعلات البروتين البروتين قد لا التقاط صورة الخلوية دقيقة، نظرا لدرجة المقيدة للحرية ومستويات غير الأصلية من البروتين الطعم.

من الناحية المثالية، يمكن أن يتم الكشف عن بروتين المجمعات في دولهم الأم، دون الحاجة إلى تنقية أو المنسدلة. وقد وضعت الأزرق الأصلي الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد (BN-PAGE) كبديل أقل تغيير طبيعة لالصوديوم دوديسيل الكهربائي كبريتات بولي أكريلاميد هلام (SDS-PAGE)، ويسمح لفصل بعض البروتينات والمجمعات من العينات البيولوجية 7. ومع ذلك، والبروتينات في BN-صفحة منفصلة على أساس لارعدد جنرال الكتريك من المتغيرات، بما في ذلك حجم، تهمة، هيكل ثلاثي الأبعاد، وبالتعاون مع جزيئات أخرى. تفاعلات هذه العوامل كثيرا ما يؤدي إلى شارك في فصل البروتينات، وتشكيل الكلي، وضعف القرار الفرقة البروتين. ثنائي الأبعاد الأصلي-إس دي إس بايج حل بعض، ولكن ليس كل شيء، من هذه المشاكل 8.

للالتفاف على التعقيدات المرتبطة بفصل الأصلي، واستخدام بعض الكتاب الكواشف أمين التفاعلي عبر ربط، مثل dithiobis (succinimidyl بروبيونات) (DSP)، لالتقاط مجمعات البروتين في الأنسجة لست] (4). ويمكن بعد هذه لست] يعامل أن التشويه والتحريف ومفصولة SDS-PAGE، مع الحفاظ على حجم الأصلي وماكياج المجمعات البروتين. ومع ذلك، منذ الكواشف عبر ربط تتفاعل على أساس القرب من جزيء واحد إلى آخر، والبروتينات في أنسجة لست] ديك العديد من درجات الحرية ويمكن أن تتفاعل عشوائيا، عبر خلفية غير محدد-linking يمكن أن تكون عالية، وخاصة في عينات المركزة. وهذا يمكن أن يؤدي إلى نتائج صعبة إلى تفسير.

هنا، علينا أن نظهر استخدام الأسلوب الهجين BN-PAGE / SDS-PAGE، ووصف متعدد القسيمات-بولي أكريلاميد الكهربائي للهلام (متعدد القسيمات-PAGE)، لفصل وكشف المجالس البروتين في الخلائط المعقدة. في البداية، يتم تعليق المحللة خلية في هلام بولي أكريلاميد عبر BN-PAGE. هلام التي تحتوي على المحللة بعد ذلك كان رد فعل مع كاشف DSP عبر ربط. ويفصل على هلام قليلا-يجمد الزائفة، والبروتينات هي أقل عرضة للرد nonspecifically الكثير، وهذا يعني تقليل الخلفية عبر رابط التفاعل. بعد عبر ربط، يتم استئصال العصابات جل وفصلها عن طريق SDS-PAGE. ثم يمكن تحليلها هلام الناتجة بأي وسيلة ترتبط عادة مع الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد. وتسمح هذه الطريقة لفصل والكشف عن بروتين المجمعات المحلية في المحللة أنسجة معدلة، دون الحاجة لتنقية إضافية أو سحب-داون.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. إعداد الأنسجة

  1. إعداد 10 مل من 4X عينة العازلة BN-PAGE (200 ملي مكرر (2-هيدروكسي) الأمينية تريس (hydroxymethyl) الميثان (مكرر تريس)، 200 مم كلوريد الصوديوم، و 40٪ ث / ت الجلسرين، 0.004٪ الشقائقية S، ودرجة الحموضة 7.2 ).
    ملاحظة: قد يتم هذا الحل الأسهم في وقت مبكر وتخزينها في 4 ° C.
  2. تمييع 250 ميكرولتر من عينة العازلة 4x وفي 750 ميكرولتر درهم 2 O تحتوي على 1X التجاري الكوكتيل مثبط البروتياز. دوامة والبرد على الجليد.
  3. التجانس 20 ملغ من النسيج المستهدف في المخزن المؤقت عينة 1 مل 1X الجليد الباردة BN-PAGE مع 30 السكتات الدماغية من الخالط dounce نظيفة.
    ملاحظة: للحصول على هذه التجربة مظاهرة، والأنسجة المستهدفة هي كلها نسيج دماغ الفئران. بعد التجانس، يمكن معالجة العينات مع منظف معتدل مثل 2٪ ديجيتونين لإذابة والسماح الكهربائي للبروتينات الغشاء.
  4. نقل جناسة لأنبوب microcentrifuge 1.5 مل، وأجهزة الطرد المركزي في 14000 x ج لمدة 30 دقيقة لتكوير محتويات الخلوية غير قابلة للذوبان. بعد عملية الشراءص الطرد المركزي، صب وطاف في أنبوب نظيفة على الجليد.
  5. اتبع تعليمات الشركة المصنعة لقياس تركيز البروتين طاف باستخدام حمض bicinchoninic (BCA) أو ما شابه ذلك فحص البروتين الكميات.
  6. إذا كانت العينة جناسة (ق) تحتوي المنظفات، إضافة كمية من 5٪ Coomassie الأزرق G-250 في محلول مائي يكفي لتحقيق الحل جناسة إلى 0.25٪ Coomassie.

2. BN-PAGE

  1. تمييع 25 مل 20x ومواطن الأزرق (BN) الكهربائي المخزونات الاحتياطية (1.0 M مكرر تريس، 1.0 M tricine، ودرجة الحموضة 6.8) إلى 475 مل درهم 2 O تحتوي على 0.002٪ Coomassie الأزرق لجعل 500 مل من 1X العازلة على التوالي.
    1. إذا عينات تحتوي على المنظفات وبدلا من ذلك جعل 250 مل من 1X تشغيل العازلة التي تحتوي على 0.02٪ Coomassie و 250 مل أخرى تحتوي على لا شيء.
  2. عازلة البرد (ق) إلى 4 درجات مئوية.
  3. تنظيف وتجميع هلام بولي أكريلاميد صب كاسيت وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  4. صب بن بولي أكريلاميد هلام (3٪ T التراص طبقة، 6٪ T حل طبقة) وفقا لصفة القياسية 7 ، ووضع مشط جيدا.
  5. بعد أن بلمرة المواد الهلامية، وشطف كاسيت مع د 2 O وتجميع جهاز الكهربائي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  6. إزالة مشط جيدا وملء الآبار مع 1x بن-بادج تشغيل العازلة. تجنب ملء الغرفة الداخلية بأكملها مع العازلة حتى يتم تحميل العينات.
    1. إذا العينات تحتوي على المنظفات، وملء الآبار مع العازلة تحتوي على 0.02٪ كوماسي الأزرق.
      ملاحظة: تنفيذ الخطوات 2.7-2.9 في 4 درجات مئوية.
  7. باستخدام نصائح هلام التحميل، ماصة حجم التجانس التي تحتوي على 20 ميكروغرام من البروتين في الآبار المطلوبة. ماصة حجم يعادل من 1X بن-بادج العازلة عينة في أي الآبار غير المستخدمة.
    ملاحظة: استخدام تركيز البروتين يحدد من مقايسة بكا لحساب الحجم المناسب من جناسة لإضافة إلىالآبار.
  8. بعد تحميل عينات، وملء الغرفة الداخلية العازلة مع 1X BN-PAGE التوالي. مما لا شك فيه هو مغمورة هلام تماما في المخزن. المقبل، وملء الغرفة الخارجية مع العازلة 1X تشغيل إلى المستوى المشار إليه من قبل الشركة المصنعة.
    1. إذا عينات تحتوي على مواد التنظيف، وملء الغرفة الداخلية مع العازلة 1X تحتوي على 0.02٪ Coomassie الأزرق، وغرفة خارجية مع صبغة خالية 1X عازلة على التوالي.
  9. قم بتوصيل أقطاب كهربائية لإمدادات الطاقة، وelectrophorese البروتينات في هلام في 150 V حتى تقدم الفرقة صبغ ~ 2 سم إلى حل طبقة. وقف وقطع التيار الكهربائي.

3. عبر ربط

ملاحظة: تنفيذ خطوات 3،1-3،6 في 4 درجات مئوية.

  1. تفكيك الجهاز الكهربائي، والفصل بين الألواح الزجاجية من كاسيت هلام. إزالة والتخلص من طبقة التراص.
  2. قطع بعناية جل أسفل الحافة السفلية من الجبهة صبغ. يأخذالحرص على جعل هذا الخفض على نحو سلس ومستقيم ممكن، ومن ثم التخلص من قطعة غير المستخدمة من هلام. وهذا ترك ~ 2 سم واسعة، والشريط الأفقي من هلام بولي أكريلاميد، والتي سوف تحتوي على جميع البروتينات في عينة جناسة.
  3. تقليم بعيدا أي أجزاء غير المستخدمة على طول حواف شريط الجل.
  4. المكان بعناية الشريط في 10 مل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في وعاء صغير، وتخلط بلطف الإيماءة لمدة 30 دقيقة لكي تتوازن.
  5. بعد موازنة، ونبذ واستبدال PBS مع 10 مل أخرى. ماصة 500 ميكرولتر من 25 ملي DSP الذائبة في سلفوكسيد ثنائي ميثيل في برنامج تلفزيوني، ومواصلة الخلط على النحو الوارد أعلاه (الخطوة 3.4) لمدة 30 دقيقة.
  6. تخلصي من حل DSP. إضافة 10 مل من 0.375 M تريس (hydroxymethyl) هيدروكلوريد aminomethane (تريس، حمض الهيدروكلوريك)، ودرجة الحموضة 8.8، التي تحتوي على 2٪ دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS) لإخماد DSP المتفاعل. تواصل الإيماءة لمدة 15 دقيقة.

4. SDS-PAGE

  1. بينما قطاع هلام تروي، وإعداد SDS-PAحلول هلام GE وفقا للأساليب القياسية 9. لا تقم بإضافة الكواشف البلمرة.
  2. بعد التبريد، وعودة قطاع هلام ΒΝ إلى درجة حرارة الغرفة، ويلقي الشريط في شريط كاسيت هلام جديد.
    1. للقيام بذلك، واختيار بعناية الجل ووضعه على طبق من ذهب هل جل كاسيت نظيفة.
    2. الشرق الشريط حتى الجزء السفلي من الجبهة صبغ هو أقرب إلى الجزء العلوي من الكاسيت الجديد (أي الجانب الذي سافر أبعد خلال BN-PAGE يجب أن يكون الأقرب إلى الجزء العلوي من كاسيت جديد، ويجب أن انقلبت قطاع هلام من قبل لها اتجاه). انظر الشكل 3.
    3. ضع الشريط بحيث حافته العليا تكمن حتى مع حيث الحافة العلوية للوحة الغلاف سيكون (أي أنه سيكون في الجزء العلوي من هلام جديد). تأكد من الجبهة صبغ موازية للحواف الأفقية للوحة من الزجاج.
    4. دفع جانب واحد من قطاع رفعه ضد أحد الجدران الفاصل، مما يترك مجالا على ركان الجانب الآخر للهلام أن سكب ومستوى البروتين أو سلم لتحميلها.
    5. إذا كانت الحافة السفلية للشريط الجل تحتوي على أي مناطق خشنة أو غير مستوية، وقطع بعناية بها بعيدا. إذا كان موجودا، وسوف فقاعات فخ خلال هلام تتدفق.
    6. مرة واحدة يتم وضع شريط الجل بشكل صحيح، ووضع لوحة غطاء على لوحة الفاصل. تطبيق ضغط لطيف على طرد أي فقاعات الهواء المحبوس.
    7. الاستمرار في تجميع الجهاز، صب جل وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  3. إضافة الكواشف البلمرة إلى المخزن المؤقت هلام حل، وسكبه في كاسيت جل استعداد، وذلك باستخدام ماصة المصلية. ملء كاسيت هلام إلى ~ 2 سم تحت رفعه BN-PAGE شريط الجل، ليترك مجالا للطبقة التراص.
  4. إضافة 100 ميكرولتر بيوتانول فوق الجزء العلوي من هلام سكب، والسماح 30 دقيقة لبلمرة طبقة حل. تخلصي من بيوتانول.
  5. إضافة الكواشف البلمرة إلى حل هلام التراص. باستخدام serologماصة كال، صب طبقة التراص لملء كل المساحة الفارغة المتبقية في كاسيت هلام.
    1. إمالة كاسيت جل كما هو سكب طبقة التراص بحيث يملأ المساحة الموجودة أسفل الشريط هلام، وليس محاصرون فقاعات الهواء.
    2. كما العازلة هلام التراص يملأ المساحة الفارغة تحت الشريط هلام، والعودة تدريجيا كاسيت هلام لقدم مستوى.
    3. مواصلة لملء المساحة الفارغة بالقرب من الشريط هلام المستأصل مع العازلة هلام التراص، حتى امتدت تقريبا.
  6. السماح للطبقة التراص لتتبلمر لمدة 30 دقيقة.
    ملاحظة: جعل 10X SDS-PAGE العازلة تشغيل (250 ملي تريس (hydroxymethyl) aminomethane (تريس)، 1.9 M الجلايسين، 1٪ SDS) في حين أن جل والبلمرة. وهذا يمكن أيضا أن تكون مصنوعة مسبقا وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.
  7. تمييع 50 مل 10X SDS-PAGE مخزون احتياطي التشغيل إلى 450 مل درهم 2 O لجعل عازلة العمل 1X.
  8. بعد بلمرة طبقة التراص، وإزالة كاسيت جل من صبالجهاز، شطف مع DH 2 O، وتجميع الأجهزة الكهربائي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  9. ملء الغرفة الداخلية تماما مع العازلة تشغيل SDS-PAGE 1X، ثم ملء الغرفة الخارجية إلى المستوى المشار إليه من قبل الشركة المصنعة.
  10. تحميل الفضاء المجاور للشريط الجل المستأصل مع سلم الوزن الجزيئي أو مستوى البروتين المناسب.
  11. نعلق الأقطاب إلى إمدادات الطاقة، وelectrophorese العينات في 120 V. عند تشغيل صبغ Coomassie قبالة هلام، والتوقف عن قطع التيار الكهربائي.
  12. تحليل الجل باستخدام الطرق المعيارية electroblotting وكشف عن البروتين عن طريق الأجسام المضادة ملزمة 10.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

في هذه التجربة مظاهرة، تم تنفيذ مولتيمر-بادج على المحللة الفئران الدماغ كله. تم مسح البروتينات المنفصلة الناتجة على غشاء بولي فينيلين ديفلوريد (بفدف)، ثم بحث مع الأجسام المضادة ضد البروتينات التي من المعروف أنها تشكل المجمعات. ويبين الشكل 1

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

تفاعلات البروتين البروتين مهم لكل مهمة الكائنات الحية تنفذ. وبسبب هذا، فهي موضوع تدقيق مكثف والبحوث. متعدد القسيمات-PAGE هي طريقة جديدة لالتقاط وفصل، وتحليل مجموعة واسعة من المجمعات البروتين. لقد أثبتنا سابقا تطبيقه لدراسة oligimerization من الأمراض المرتبطة البروتين α-synuclei...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgements

بدعم من DA034783 NIH / النداء. نشكر بريان A. كيلينجر للحصول على المساعدة الفنية مع متعدد القسيمات-PAGE.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Chemicals
ε-Aminocaproic acidSigmaA2504
AcrylamideAcros Organics164855000Toxic.
Acrylamide/bisacrilamide 37.5:1 (40%T stock solution)BioRad161-0148Toxic.
Ammonium persulfateSigmaA3678
Anti rabbit IgG-HRP from goatSanta Cruz Biotechnologysc-2004
Bicinchoninic acid assay kitThermofisher23225
Bis-trisSigmaB9754
Bovine serum albuminSigmaA9647
ButanolFisher ScientificA399-1
Chemiluminescence substrate kitThermoFisher24078
Coomassie blue G-250Sigma-AldrichB0770
DigitoninSigmaD141Toxic.
Dimethyl sulfoxideFisher ScientificD128-1
Dithiobis(succinimidylpropionate)Thermo Scientific22585
Dry nonfat milkLabScientificM0841
GlycerolSigmaG9012
GlycineFisher ScientificBP381-5
Halt Protease Inhibitor CocktailThermofisher78430
Hydrochloric acidFisher ScientificA144SI-212For titration. Caustic.
MethanolFisher ScientificA412-4For PVDF membrane activation. Toxic.
Monoclonal anti α-synuclein IgG from rabbitSanta Cruz Biotechnologysc-7011-R
N,N,N',N'-tetramethylethylenediamineSigmaT9281
N,N'-methylenebisacrylamideAcros Organics16479Toxic.
NP40Boston BioproductsP-872
Polysorbate 20 (tween-20)Fisher ScientificBP337-500
Polyvinylidene fluoride transfer membranesThermo Scientific88518
Ponceau SSigmaP3504
Potassium chlorideFisher ScientificP217-3
Potassium phosphate monobasicSigmaP9791
Protease inhibitor cocktailThermo Scientific88265
SDS solution (10% w/v)BioRad161-0416
Sodium chlorideFisher ScientificBP358-212
Sodium dodecyl sulfateSigmaL37771
Sodium phosphate monobasicFisher ScientificBP329-1
TricineSigmaT0377
Tris baseFisher ScientificBP152-500
Tris-HCl (0.5 M buffer, pH 6.8)BioRad161-0799
Tris-HCl (1.5 M buffer, pH 8.8)BioRad161-0798
NameCompanyCatalog NumberComments
Instruments
GE Imagequant LAS 4000GE Healthcare28-9558-10
ImageJ softwareNIH
Synergy H1 microplate readerBioTek
Gel Former + StandBiorad
Microfuge 22R centrifugeBeckman Coulter
2 mL dounce homogenizer
Vortex mixerFisher Scientific
Ultrasonic tissue homogenizerFisher ScientificFB120220

References

  1. Alberts, B. The cell as a collection of protein machines: preparing the next generation of molecular biologists. Cell. 92 (3), 291-294 (1998).
  2. Pawson, T., Nash, P. Protein-protein interactions define specificity in signal transduction. Genes Dev. 14 (9), 1027-1047 (2000).
  3. Rual, J. F., et al. Towards a proteome-scale map of the human protein-protein interaction network. Nature. 437 (7062), 1173-1178 (2005).
  4. Phizicky, E. M., Fields, S. Protein-protein interactions: methods for detection and analysis. Microbiol Rev. 59 (1), 94-123 (1995).
  5. Ho, Y., et al. Systematic identification of protein complexes in Saccharomyces cerevisiae by mass spectrometry. Nature. 415 (6868), 180-183 (2002).
  6. Krogan, N. J., et al. Global landscape of protein complexes in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Nature. 440 (7084), 637-643 (2006).
  7. Wittig, I., Braun, H. P., Schagger, H. Blue native PAGE. Nat Protoc. 1 (1), 418-428 (2006).
  8. Schagger, H., Cramer, W. A., von Jagow, G. Analysis of molecular masses and oligomeric states of protein complexes by blue native electrophoresis and isolation of membrane protein complexes by two-dimensional native electrophoresis. Anal Biochem. 217 (2), 220-230 (1994).
  9. Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).
  10. Beisiegel, U. Protein Blotting. Electrophoresis. 7 (1), 1-18 (1986).
  11. Killinger, B. A., Moszczynska, A. Characterization of alpha-Synuclein Multimer Stoichiometry in Complex Biological Samples by Electrophoresis. Anal Chem. 88 (7), 4071-4084 (2016).
  12. Newman, A. J., Selkoe, D., Dettmer, U. A new method for quantitative immunoblotting of endogenous alpha-synuclein. PLoS One. 8 (11), e81314(2013).
  13. Wong, S. S. Chemistry of protein conjugation and cross-linking. , CRC Press. Boca Raton. (1991).
  14. Seddon, A. M., Curnow, P., Booth, P. J. Membrane proteins, lipids and detergents: not just a soap opera. Biochim Biophys Acta. 1666 (1-2), 105-117 (2004).
  15. Tanford, C., Reynolds, J. A. Characterization of membrane proteins in detergent solutions. Biochim Biophys Acta. 457 (2), 133-170 (1976).
  16. Peters, K., Richards, F. M. Chemical cross-linking: reagents and problems in studies of membrane structure. Annu Rev Biochem. 46, 523-551 (1977).
  17. Lomant, A. J., Fairbanks, G. Chemical probes of extended biological structures: synthesis and properties of the cleavable protein cross-linking reagent [35S]dithiobis(succinimidyl propionate). J Mol Biol. 104 (1), 243-261 (1976).
  18. Sun, F., et al. Crystal structure of mitochondrial respiratory membrane protein complex II. Cell. 121 (7), 1043-1057 (2005).
  19. Wittig, I., Schagger, H. Native electrophoretic techniques to identify protein-protein interactions. Proteomics. 9 (23), 5214-5223 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

123 multimers PAGE

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved