إنشاء عضويات الورم المشتقة من سرطان البنكرياس والخلايا الليفية من الأنسجة الطازجة

Summary

أحدثت عضويات الورم ثورة في أبحاث السرطان ونهج الطب الشخصي. إنها تمثل نموذجا للورم ذا صلة سريريا يسمح للباحثين بالبقاء متقدما بخطوة على الورم في العيادة. يحدد هذا البروتوكول عضويات الورم من عينات أنسجة ورم البنكرياس الطازجة والطعوم الخارجية المشتقة من المريض من أصل سرطان البنكرياس الغدي.

Abstract

عضويات الورم هي نماذج ورم ثلاثية الأبعاد (3D) خارج الجسم الحي تلخص السمات البيولوجية الرئيسية لأنسجة الورم الأولية الأصلية. تم استخدام عضويات الورم المشتقة من المريض في أبحاث السرطان الانتقالية ويمكن تطبيقها لتقييم حساسية العلاج ومقاومته ، وتفاعلات الخلايا الخلوية ، وتفاعلات الخلايا السرطانية مع البيئة المكروية للورم. عضويات الورم هي أنظمة زراعة معقدة تتطلب تقنيات زراعة الخلايا المتقدمة ووسائط الاستزراع مع كوكتيلات عامل نمو محددة وغشاء قاعدي بيولوجي يحاكي البيئة خارج الخلية. تعتمد القدرة على إنشاء ثقافات الورم الأولية بشكل كبير على نسيج المنشأ والخلوية والسمات السريرية للورم ، مثل درجة الورم. علاوة على ذلك ، فإن جمع عينات الأنسجة ، وجودة المواد وكميتها ، بالإضافة إلى البنوك الحيوية الصحيحة والتخزين هي عناصر حاسمة في هذا الإجراء. كما أن القدرات التقنية للمختبر هي أيضا عوامل حاسمة يجب مراعاتها. هنا ، نبلغ عن إجراء تشغيلي موحد / بروتوكول تم التحقق من صحته وهو مجدي تقنيا واقتصاديا لثقافة عضويات الورم خارج الجسم الحي من عينات الأنسجة الطازجة من أصل غدية البنكرياس ، إما من أنسجة المتبرعين بالمرضى الأولية الجديدة أو الطعوم الخارجية المشتقة من المريض (PDX). يمكن إجراء التقنية الموصوفة هنا في المختبرات ذات زراعة الأنسجة الأساسية ومرافق الفئران وهي مصممة للتطبيق على نطاق واسع في مجال الأورام الانتقالي.

Introduction

عضويات الورم هي ثقافات منظمة ثلاثية الأبعاد (3D) خارج الجسم الحي مشتقة من أنسجة الورم الطازجة وتوفر نماذج سرطانية. تلخص عضويات الورم السمات البيولوجية الرئيسية للورم الأولي الأصلي¹،^2،3،⁴ ويمكن توسيعها لمدة تصل إلى عدة أشهر وحفظها بالتبريد ^، على غرار خطوط الخلايا الخالدة التقليدية. توفر عضويات الورم بنكا حيويا لنماذج الورم المشتقة من المريض للطب الانتقالي / الشخصي⁵ وتمثل تقدما مهما في أنظمة / نماذج بيولوجيا الخلايا السرطانية. يمكن استخدام عضويات الورم المشتقة من المريض كنماذج خارج الجسم الحي للتنبؤ بف....

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية لرعاية التجارب التي وافقت عليها لجنة الأخلاقيات بجامعة مدريد المستقلة (CEI 103-1958-A337) و La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19) ووفقا للمبادئ التوجيهية للسلوك الأخلاقي في رعاية واستخدام على النحو المنصوص عليه في المبادئ التوجيهية الدولية للبحوث الطبية الحيوية التي تشمل ، تم تطويره من قبل مجلس المنظمات الدولية للعلوم الطبية (CIOMS). اتبع البروتوكول المبادئ الأخلاقية للبحوث الطبية الحيوية بموافقة خطية مستنيرة. تم الحصول على موافقة أخلاقية مسبقة لاستخدام الأنسجة الطازجة لإنشاء مزارع الورم العضوية. تم تقديم العينات من قبل مستشفى البنك الحيوي Ramón y Cajal-IRYCIS (السجل الوطني للبنوك الحيوية B.0000678) ، وتم دمجها ....

النتائج

من المهم توثيق كيفية تقدم ثقافة الورم العضوي بمرور الوقت ، خاصة في الأسابيع القليلة الأولى ، من أجل تقدير كيفية تصرف الثقافة في فحوصات المصب. يوضح الشكل 2 مثالا على العزل الأمثل للخلايا السرطانية وتكوين الورم العضوي من الأنسجة الطازجة على مدار 15 يوما. في بعض الأحيان، يوجد ح.......

Discussion

تمثل التطورات الرئيسية في علاجات السرطان الدوائية تحديا ، حيث أن احتمال الموافقة على الأدوية في المرحلة الأولى من التجارب السريرية للأورام هو 5.1٪ ، وهو أدنى مستوى بين جميع أنواع الأمراض²³. السبب الرئيسي هو أن السرطان غير متجانس للغاية ، وبالتالي ، فإن مجموعات المرضى لا تستجيب .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
6 well Costar Ultra-low Attachment plates	Biofil	TCP011006
70 μm pore strainer	VWR	732-2758
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis Buffer	Gibco	A10492-01
Amphotericin B	Gibco	15290018
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC)	Nuaire	NU-4750E
Cell recovery solution	Corning	354253
Collagenase IV	Gibco	17104019
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPES	Gibco	31330-038
DNase	Roche	10104159001
Fetal Bovine Serum (FBS)	Corning	35-079-CV
Freezing container, Nalgene	Merck	C1562
gentleMACS Octo Dissociator	Milteny Biotec	130-096-427
HEPES	Gibco	15630056
Human Placenta Growth Factor (PlGF)	enQuireBio	QP6485-EC-100UG
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude mice	Janvier, France
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1)	Invitrogen	RP10931
L-Glutamine	Corning	354235
Matrigel Basement Membrane Matrix	Corning	356234
Normocin	InvivoGen	ant-nr-2
Pasteur pipettes	Deltalab	200007
Penicillin Streptomycin Solution (100x)	Corning	30-002-CI
Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Corning	21-040-CV
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)	Gibco	PHG0026
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF)	Gibco	PHG0311
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride)	STEMCELL	72304
StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent	Gibco	A1110501
Surgical Blades	Nahita	FMB018
Trypsin	Gibco	25300054