膵臓癌由来腫瘍オルガノイドおよび線維芽細胞の新鮮組織からの樹立

要約

腫瘍オルガノイドは、がん研究と個別化医療へのアプローチに革命をもたらしました。これらは、臨床的に関連性のある腫瘍モデルであり、研究者は診療所で腫瘍の一歩先を行くことができます。このプロトコルは、新鮮な膵臓腫瘍組織サンプルおよび膵臓腺癌起源の患者由来の異種移植片から腫瘍オルガノイドを確立します。

要約

腫瘍オルガノイドは、元の原発腫瘍組織の生物学的重要な特徴を再現する3次元(3D) ex vivo 腫瘍モデルです。患者由来の腫瘍オルガノイドは、トランスレーショナルがん研究で使用されており、治療の感受性と抵抗性、細胞間相互作用、および腫瘍微小環境との腫瘍細胞相互作用の評価に適用できます。腫瘍オルガノイドは複雑な培養系であり、高度な細胞培養技術と、特定の成長因子カクテルを用いた培地、および細胞外環境を模倣した生物学的基底膜が必要です。原発腫瘍培養を確立する能力は、起源組織、細胞性、および腫瘍の悪性度などの腫瘍の臨床的特徴に大きく依存します。さらに、組織サンプルの収集、材料の質と量、および正しいバイオバンクと保管は、この手順の重要な要素です。また、研究所の技術力も重要な要素です。ここでは、膵臓腺癌由来の新鮮な組織サンプルからの ex vivo 腫瘍オルガノイドの培養に技術的および経済的に実行可能な検証済みのSOP/プロトコルを報告します。本明細書に記載の技術は、基本的な組織培養およびマウス設備を有する実験室で実施することができ、トランスレーショナル腫瘍学分野における幅広い応用のために調整される。

概要

腫瘍オルガノイドは、新鮮な腫瘍組織に由来するex vivoの3次元(3D)組織化培養物であり、がんモデルを提供します。腫瘍オルガノイドは、元の原発腫瘍の生物学的重要な特徴を再現しており1,2,3,4、従来の不死化細胞株と同様に、最大数ヶ月間増殖して凍結保存することができます。腫瘍オルガノイドは、トランスレー^{ショナル/個別}化医療5のための患者由来腫瘍モデルのバイオバンクを提供し、がん細胞生物学システム/モデルにおける重要な進歩を表しています。患者由来の腫瘍オルガノイドは、新鮮な腫瘍組織から培養を確立し、その後の治療ラインに有効な薬剤を特定するために患者固有のベースで薬物感受性アッセイまたは薬物型決定が実施される(ネオ)アジュバント腫瘍学的/薬理学的治療の有効性を予測するためのex vivoモデルとして使用できます^1,4.さらに、腫瘍オルガノイドは、原発腫瘍組織の利用可能性の限界を克服し、さらに重要なことに、患者由来異種移植片(PDX^)などの

プロトコル

すべての手順は、マドリッド自治大学倫理委員会(CEI 103-1958-A337)およびマドリッド市議会(PROEX 294/19)によって承認された実験動物の福祉に関する制度的ガイドラインに準拠し、動物を含む生物医学研究のための国際指導原則に記載されている動物の世話と使用における倫理的行動に関するガイドラインに従って実施されました。 国際医学機関評議会(CIOMS)によって開発されました。プロトコルは、書面によるインフォームドコンセントによる生物医学研究の倫理原則に従った。腫瘍オルガノイド培養の確立のための新鮮組織の使用については、事前の倫理的承認が得られました。サンプルは、BioBank Hospital Ramón y Cajal-IRYCIS(National Registry of Biobanks B.0000678)から提供され、ISCIII(PT20/00045)のバイオバンクおよびバイオモデルプラットフォームに統合され、適切な倫理的承認を得て、標準操作手順に従って処理されました。腫瘍は、前述のように²²、免疫不全の6週齢の雌のNU-Foxn1nuヌードマウス( 資料表参照)に皮下移植され、 in vivo で継代されてPDAC PDXが確立されました。

1. 実験準備

1. クラスIIのバイオセーフティキャビネッ....

ディスカッション

がん第I相臨床試験で薬剤が承認される可能性は5.1%であり、全疾患タイプ²³の中で最も低いため、薬物療法の大きな進歩は困難である。主な理由は、がんは非常に不均一であるため、患者コホートは特定の治療に対して期待どおりに均一に反応せず、より個別化されたアプローチが必要であることを浮き彫りにしています。2次元(2D)培養は、トランスレーショナルがん研究で?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
6 well Costar Ultra-low Attachment plates	Biofil	TCP011006
70 μm pore strainer	VWR	732-2758
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis Buffer	Gibco	A10492-01
Amphotericin B	Gibco	15290018
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC)	Nuaire	NU-4750E
Cell recovery solution	Corning	354253
Collagenase IV	Gibco	17104019
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPES	Gibco	31330-038
DNase	Roche	10104159001
Fetal Bovine Serum (FBS)	Corning	35-079-CV
Freezing container, Nalgene	Merck	C1562
gentleMACS Octo Dissociator	Milteny Biotec	130-096-427
HEPES	Gibco	15630056
Human Placenta Growth Factor (PlGF)	enQuireBio	QP6485-EC-100UG
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude mice	Janvier, France
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1)	Invitrogen	RP10931
L-Glutamine	Corning	354235
Matrigel Basement Membrane Matrix	Corning	356234
Normocin	InvivoGen	ant-nr-2
Pasteur pipettes	Deltalab	200007
Penicillin Streptomycin Solution (100x)	Corning	30-002-CI
Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Corning	21-040-CV
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)	Gibco	PHG0026
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF)	Gibco	PHG0311
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride)	STEMCELL	72304
StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent	Gibco	A1110501
Surgical Blades	Nahita	FMB018
Trypsin	Gibco	25300054