Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Özet

Tümör organoidleri, kanser araştırmalarında ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımında devrim yarattı. Araştırmacıların klinikte tümörden bir adım önde olmalarını sağlayan klinik olarak ilgili bir tümör modelini temsil ederler. Bu protokol, taze pankreas tümör dokusu örneklerinden ve pankreas adenokarsinomu kökenli hasta kaynaklı ksenogreftlerden tümör organoidlerini oluşturur.

Özet

Tümör organoidleri, orijinal primer tümör dokularının biyolojik temel özelliklerini özetleyen üç boyutlu (3D) ex vivo tümör modelleridir. Hasta kaynaklı tümör organoidleri, translasyonel kanser araştırmalarında kullanılmıştır ve tedavi duyarlılığını ve direncini, hücre-hücre etkileşimlerini ve tümör mikroçevresi ile tümör hücresi etkileşimlerini değerlendirmek için uygulanabilir. Tümör organoidleri, gelişmiş hücre kültürü teknikleri ve spesifik büyüme faktörü kokteylleri ve hücre dışı ortamı taklit eden biyolojik bir bazal membran içeren kültür ortamı gerektiren karmaşık kültür sistemleridir. Primer tümör kültürlerini oluşturma yeteneği büyük ölçüde orijin dokusuna, hücreselliğe ve tümörün tümör derecesi gibi klinik özelliklerine bağlıdır. Ayrıca, doku örneği toplama, malzeme kalitesi ve miktarının yanı sıra doğru biyobankacılık ve depolama bu prosedürün çok önemli unsurlarıdır. Laboratuvarın teknik özellikleri de dikkate alınması gereken çok önemli faktörlerdir. Burada, pankreas adenokarsinomu orijinli taze doku örneklerinden, taze primer rezeke edilmiş hasta donör dokusundan veya hasta kaynaklı ksenogreftlerden (PDX) ex vivo tümör organoidlerinin kültürü için teknik ve ekonomik olarak uygulanabilir olan doğrulanmış bir SOP/protokol sunuyoruz. Burada açıklanan teknik, temel doku kültürü ve fare olanaklarına sahip laboratuvarlarda gerçekleştirilebilir ve translasyonel onkoloji alanında geniş uygulama için uyarlanmıştır.

Giriş

Tümör organoidleri, taze tümör dokusundan türetilen ve kanser modelleri sağlayan ex vivo üç boyutlu (3D) organize kültürlerdir. Tümör organoidleri, orijinal primer tümörün 1,2,3,4 biyolojik temel özelliklerini özetler ve geleneksel ölümsüzleştirilmiş hücre hatlarına benzer şekilde birkaç aya kadar genişletilebilir ve dondurularak saklanabilir. Tümör organoidleri, translasyonel/kişiselleştirilmiş tıp5 için hasta kaynaklı tümör modellerinin bir biyobankasını sağlar ve kanser hücresi biyolojisi sistemlerinde/mod....

Protokol

Tüm prosedürler, Universidad Autónoma de Madrid Etik Komitesi (CEI 103-1958-A337) ve La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19) tarafından onaylanan deney hayvanlarının refahı için kurumsal yönergelere ve Hayvanları İçeren Biyomedikal Araştırmalar için Uluslararası Yol Gösterici İlkeler'de belirtildiği gibi Hayvanların Bakımı ve Kullanımında Etik Davranış yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Uluslararası Tıp Bilimleri Örgütleri Konseyi (CIOMS) tarafından geliştirilmiştir. Protokol, yazılı bilgilendirilmiş onam ile biyomedikal araştırmalar için etik ilkeleri takip etti. Tümör organoid kültürlerinin oluşturulması için taze doku kullanımı için önceden etik onay a....

Temsili Sonuçlar

Kültürün aşağı akış tahlillerinde nasıl davranacağını tahmin etmek için, tümör organoid kültürünün zaman içinde, özellikle ilk birkaç hafta içinde nasıl ilerlediğini belgelemek önemlidir. Şekil 2, 15 günlük bir süre boyunca taze dokudan optimal tümör hücresi izolasyonu ve tümör organoid oluşumunun bir örneğini göstermektedir. Bazen, numunede büyük miktarda hücre kalıntısı vardır ve Şekil 3'te gösterildiği gibi gel.......

Tartışmalar

Farmakolojik kanser tedavilerindeki büyük ilerlemeler zordur, çünkü faz I onkoloji klinik çalışmalarında ilaçların onaylanma olasılığı tüm hastalık türleri arasında en düşük olan %5.1'dir23. Bunun ana nedeni, kanserin çok heterojen olması ve bu nedenle hasta kohortlarının verilen tedaviye beklendiği gibi tek tip yanıt vermemesidir, bu da daha kişiselleştirilmiş bir yaklaşıma ihtiyaç olduğunu vurgulamaktadır. İki boyutlu (2D) kültürler, translasyonel kanser ar.......

Açıklamalar

Hiç kimse.

Teşekkürler

Bu çalışma, Avrupa Birliği'nin Horizon 2020 Araştırma ve İnovasyon Programı olan Plataforma biobancos y biomodelos - Unidades de las Plataformas ISCIII de apoyo ala I+D+i en Biomedicina y Ciencias de la Salud (PT20/00045), 857381 No'lu hibe sözleşmesi kapsamında Horizon 2020 Araştırma ve İnovasyon Programı, VISION (Gastrointestinal kanserlerin erken teşhisi için bilimsel mükemmellik ve inovasyon kapasitesini güçlendirme stratejileri) tarafından finanse edilerek desteklenmiştir. Klinik araştırmacılar ve gelişmekte olan araştırma grupları için yeni araştırma projeleri için intramural çağrı IRYCIS (2021/0446), Hasta Kaynaklı Organoidler 2.0 Projesi (CIBERONC) ve TRANSCA....

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
6 well Costar Ultra-low Attachment platesBiofilTCP011006
70 μm pore strainerVWR732-2758
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis BufferGibcoA10492-01
Amphotericin BGibco15290018
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC)NuaireNU-4750E
Cell recovery solutionCorning 354253
Collagenase IVGibco17104019
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPESGibco31330-038
DNaseRoche10104159001
Fetal Bovine Serum (FBS)Corning35-079-CV
Freezing container, NalgeneMerckC1562
gentleMACS Octo DissociatorMilteny Biotec130-096-427
HEPESGibco15630056
Human Placenta Growth Factor (PlGF)enQuireBioQP6485-EC-100UG
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude miceJanvier, France 
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1)InvitrogenRP10931
L-GlutamineCorning354235
Matrigel Basement Membrane Matrix Corning356234
NormocinInvivoGenant-nr-2
Pasteur pipettesDeltalab200007
Penicillin Streptomycin Solution (100x)Corning30-002-CI
Phosphate-Buffered Saline (PBS)Corning21-040-CV
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)GibcoPHG0026
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF)GibcoPHG0311
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride)STEMCELL72304
StemPro Accutase Cell Dissociation ReagentGibcoA1110501
Surgical BladesNahitaFMB018
TrypsinGibco25300054

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

This article has been published

Video Coming Soon

Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz

Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.