Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Tümör organoidleri, kanser araştırmalarında ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımında devrim yarattı. Araştırmacıların klinikte tümörden bir adım önde olmalarını sağlayan klinik olarak ilgili bir tümör modelini temsil ederler. Bu protokol, taze pankreas tümör dokusu örneklerinden ve pankreas adenokarsinomu kökenli hasta kaynaklı ksenogreftlerden tümör organoidlerini oluşturur.
Tümör organoidleri, orijinal primer tümör dokularının biyolojik temel özelliklerini özetleyen üç boyutlu (3D) ex vivo tümör modelleridir. Hasta kaynaklı tümör organoidleri, translasyonel kanser araştırmalarında kullanılmıştır ve tedavi duyarlılığını ve direncini, hücre-hücre etkileşimlerini ve tümör mikroçevresi ile tümör hücresi etkileşimlerini değerlendirmek için uygulanabilir. Tümör organoidleri, gelişmiş hücre kültürü teknikleri ve spesifik büyüme faktörü kokteylleri ve hücre dışı ortamı taklit eden biyolojik bir bazal membran içeren kültür ortamı gerektiren karmaşık kültür sistemleridir. Primer tümör kültürlerini oluşturma yeteneği büyük ölçüde orijin dokusuna, hücreselliğe ve tümörün tümör derecesi gibi klinik özelliklerine bağlıdır. Ayrıca, doku örneği toplama, malzeme kalitesi ve miktarının yanı sıra doğru biyobankacılık ve depolama bu prosedürün çok önemli unsurlarıdır. Laboratuvarın teknik özellikleri de dikkate alınması gereken çok önemli faktörlerdir. Burada, pankreas adenokarsinomu orijinli taze doku örneklerinden, taze primer rezeke edilmiş hasta donör dokusundan veya hasta kaynaklı ksenogreftlerden (PDX) ex vivo tümör organoidlerinin kültürü için teknik ve ekonomik olarak uygulanabilir olan doğrulanmış bir SOP/protokol sunuyoruz. Burada açıklanan teknik, temel doku kültürü ve fare olanaklarına sahip laboratuvarlarda gerçekleştirilebilir ve translasyonel onkoloji alanında geniş uygulama için uyarlanmıştır.
Tümör organoidleri, taze tümör dokusundan türetilen ve kanser modelleri sağlayan ex vivo üç boyutlu (3D) organize kültürlerdir. Tümör organoidleri, orijinal primer tümörün 1,2,3,4 biyolojik temel özelliklerini özetler ve geleneksel ölümsüzleştirilmiş hücre hatlarına benzer şekilde birkaç aya kadar genişletilebilir ve dondurularak saklanabilir. Tümör organoidleri, translasyonel/kişiselleştirilmiş tıp5 için hasta kaynaklı tümör modellerinin bir biyobankasını sağlar ve kanser hücresi biyolojisi sistemlerinde/mod....
Tüm prosedürler, Universidad Autónoma de Madrid Etik Komitesi (CEI 103-1958-A337) ve La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19) tarafından onaylanan deney hayvanlarının refahı için kurumsal yönergelere ve Hayvanları İçeren Biyomedikal Araştırmalar için Uluslararası Yol Gösterici İlkeler'de belirtildiği gibi Hayvanların Bakımı ve Kullanımında Etik Davranış yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Uluslararası Tıp Bilimleri Örgütleri Konseyi (CIOMS) tarafından geliştirilmiştir. Protokol, yazılı bilgilendirilmiş onam ile biyomedikal araştırmalar için etik ilkeleri takip etti. Tümör organoid kültürlerinin oluşturulması için taze doku kullanımı için önceden etik onay a....
Kültürün aşağı akış tahlillerinde nasıl davranacağını tahmin etmek için, tümör organoid kültürünün zaman içinde, özellikle ilk birkaç hafta içinde nasıl ilerlediğini belgelemek önemlidir. Şekil 2, 15 günlük bir süre boyunca taze dokudan optimal tümör hücresi izolasyonu ve tümör organoid oluşumunun bir örneğini göstermektedir. Bazen, numunede büyük miktarda hücre kalıntısı vardır ve Şekil 3'te gösterildiği gibi gel.......
Farmakolojik kanser tedavilerindeki büyük ilerlemeler zordur, çünkü faz I onkoloji klinik çalışmalarında ilaçların onaylanma olasılığı tüm hastalık türleri arasında en düşük olan %5.1'dir23. Bunun ana nedeni, kanserin çok heterojen olması ve bu nedenle hasta kohortlarının verilen tedaviye beklendiği gibi tek tip yanıt vermemesidir, bu da daha kişiselleştirilmiş bir yaklaşıma ihtiyaç olduğunu vurgulamaktadır. İki boyutlu (2D) kültürler, translasyonel kanser ar.......
Hiç kimse.
Bu çalışma, Avrupa Birliği'nin Horizon 2020 Araştırma ve İnovasyon Programı olan Plataforma biobancos y biomodelos - Unidades de las Plataformas ISCIII de apoyo ala I+D+i en Biomedicina y Ciencias de la Salud (PT20/00045), 857381 No'lu hibe sözleşmesi kapsamında Horizon 2020 Araştırma ve İnovasyon Programı, VISION (Gastrointestinal kanserlerin erken teşhisi için bilimsel mükemmellik ve inovasyon kapasitesini güçlendirme stratejileri) tarafından finanse edilerek desteklenmiştir. Klinik araştırmacılar ve gelişmekte olan araştırma grupları için yeni araştırma projeleri için intramural çağrı IRYCIS (2021/0446), Hasta Kaynaklı Organoidler 2.0 Projesi (CIBERONC) ve TRANSCA....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
6 well Costar Ultra-low Attachment plates | Biofil | TCP011006 | |
70 μm pore strainer | VWR | 732-2758 | |
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
Amphotericin B | Gibco | 15290018 | |
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC) | Nuaire | NU-4750E | |
Cell recovery solution | Corning | 354253 | |
Collagenase IV | Gibco | 17104019 | |
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPES | Gibco | 31330-038 | |
DNase | Roche | 10104159001 | |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-079-CV | |
Freezing container, Nalgene | Merck | C1562 | |
gentleMACS Octo Dissociator | Milteny Biotec | 130-096-427 | |
HEPES | Gibco | 15630056 | |
Human Placenta Growth Factor (PlGF) | enQuireBio | QP6485-EC-100UG | |
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude mice | Janvier, France | ||
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1) | Invitrogen | RP10931 | |
L-Glutamine | Corning | 354235 | |
Matrigel Basement Membrane Matrix | Corning | 356234 | |
Normocin | InvivoGen | ant-nr-2 | |
Pasteur pipettes | Deltalab | 200007 | |
Penicillin Streptomycin Solution (100x) | Corning | 30-002-CI | |
Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Corning | 21-040-CV | |
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) | Gibco | PHG0026 | |
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF) | Gibco | PHG0311 | |
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride) | STEMCELL | 72304 | |
StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent | Gibco | A1110501 | |
Surgical Blades | Nahita | FMB018 | |
Trypsin | Gibco | 25300054 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiDaha Fazla Makale Keşfet
This article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır
Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz
Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.