A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يتم تقديم العديد من الطرق الشائعة الاستخدام هنا لدراسة أحداث الاتجار بالغشاء لمستقبلات غشاء البلازما كيناز. تصف هذه المخطوطة البروتوكولات التفصيلية بما في ذلك تحضير المواد النباتية والمعالجة الدوائية وإعداد التصوير متحد البؤر.
في الخلايا حقيقية النواة، تنقل مكونات الغشاء، بما في ذلك البروتينات والليبيدات، زمانيا مكانيا إلى وجهتها داخل نظام الغشاء الداخلي. وهذا يشمل النقل الإفرازي للبروتينات المركبة حديثا إلى سطح الخلية أو خارج الخلية ، والنقل الداخلي للشحنات خارج الخلية أو مكونات غشاء البلازما إلى الخلية ، وإعادة تدوير أو نقل البضائع بين العضيات تحت الخلوية ، إلخ. تعتبر أحداث الاتجار بالأغشية حاسمة في التطور والنمو والتكيف البيئي لجميع الخلايا حقيقية النواة ، وبالتالي فهي تخضع لتنظيم صارم. تخضع كينازات مستقبلات سطح الخلية ، التي تدرك إشارات الرباط من الفضاء خارج الخلية ، لكل من النقل الإفرازي والداخلي. يتم وصف الأساليب الشائعة الاستخدام لدراسة أحداث الاتجار بالغشاء باستخدام كيناز مستقبلات الليوسين الغنية بالتكرار الموضعي بغشاء البلازما ، ERL1. تشمل الأساليب إعداد المواد النباتية ، والعلاج الدوائي ، وإعداد التصوير متحد البؤر. لمراقبة التنظيم الزماني المكاني ل ERL1 ، تصف هذه الدراسة تحليل التوطين المشترك بين ERL1 وبروتين علامة الجسم متعدد الحويصلات ، RFP-Ara7 ، وتحليل السلاسل الزمنية لهذين البروتينين ، وتحليل z-stack ل ERL1-YFP المعالج بمثبطات الاتجار بالغشاء brefeldin A و wortmannin.
حركة مرور الغشاء هي عملية خلوية محفوظة توزع مكونات الغشاء (المعروفة أيضا باسم الشحنات) ، بما في ذلك البروتينات والدهون والمنتجات البيولوجية الأخرى ، بين عضيات مختلفة داخل خلية حقيقية النواة أو عبر غشاء البلازما من وإلى الفضاء خارج الخلية1. يتم تسهيل هذه العملية من خلال مجموعة من الأغشية والعضيات تسمى نظام الغشاء الداخلي ، والذي يتكون من الغشاء النووي ، والشبكة الإندوبلازمية ، وجهاز جولجي ، والفجوة / الجسيمات الحالة ، وغشاء البلازما ، وإندوسوماتمتعددة 1. يتيح نظام الغشاء الداخلي تعديل مكونات الغشاء وتعبئتها ونقلها باستخدام حويصلات ديناميكية تنتقل بين هذه العضيات. تعتبر أحداث الاتجار بالأغشية حاسمة لتطور الخلايا ونموها وال....
1. إعداد الحلول
2. بذر البذور
أشارت دراسة سابقة إلى أن ERL1 هو كيناز مستقبلات نشط يخضع لأحداث الاتجار بالغشاءالديناميكي 20. ERL1 هو كيناز مستقبلات LRR عبر الغشاء على غشاء البلازما. تتم معالجة ERL1 المركبة حديثا في الشبكة الإندوبلازمية في أجسام جولجي ويتم نقلها إلى غشاء البلازما. يمكن لجزيئات ERL1 الموجودة على غشاء ?.......
يفصل نظام الغشاء الداخلي سيتوبلازم الخلية الحقيقية النواة إلى مقصورات مختلفة ، مما يتيح الوظيفة الحيوية المتخصصة لهذه العضيات. لتوصيل بروتينات البضائع والجزيئات الكبيرة إلى وجهتها النهائية في الوقت المناسب ، يتم توجيه العديد من الحويصلات للتنقل بين هذه العضيات. تلعب أحداث الاتجار بالأ?.......
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم (IOS-2217757) (X.Q.) وجائزة مؤسسة برونسون بجامعة أركنساس للعلوم الطبية (UAMS).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10 mL syringes | VWR | BD309695 | Vacuum samples |
Brefeldin A (BFA) | Sigma | B7651 | membrane trafficking drug |
Confocal Microscope | Leica | Lecia SP8 TCS with LAS-X software package | Imaging |
Dissecting Forceps | VWR | 82027-402 | Genetic cross |
Fiji | NIH | https://imagej.net/Fiji | Image processing |
Leica LAS AF software | Leica | http://www.leica-microsystems.com | Image processing |
transgenic seeds of ERL1-YFP | Qi, X. et al. The manifold actions of signaling peptides on subcellular dynamics of a receptor specify stomatal cell fate. Elife. 9, doi:10.7554/eLife.58097, (2020). | ||
transgenic seeds of RFP-Ara7 | Ebine, K. et al. A membrane trafficking pathway regulated by the plant-specific RAB GTPase ARA6. Nat Cell Biol. 13 (7), 853-859, doi:10.1038/ncb2270, (2011). | ||
Wortmannin (Wm) | Sigma | W1628 | membrane trafficking drug |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved