A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
تصف هذه الورقة طريقة للعزل المغناطيسي القائم على الخرزة للخلايا البطانية للفأر من الشعيرات الدموية اللمفاوية الجلدية. يمكن استخدام الخلايا البطانية اللمفاوية المعزولة في التجارب المختبرية وتحليل التعبير البروتيني.
يشارك الجهاز اللمفاوي في تنظيم المراقبة المناعية وامتصاص الدهون وتوازن سوائل الأنسجة. يعد عزل الخلايا البطانية اللمفاوية للفئران عملية مهمة للبحث اللمفاوي ، لأنه يسمح بإجراء التجارب المختبرية والكيميائية الحيوية على الخلايا المعزولة. علاوة على ذلك ، مكن تطوير تقنية Cre-lox من نقص الجينات الخاصة بالأنسجة التي لا يمكن استهدافها عالميا ، مما أدى إلى التحديد الدقيق لدورها في الأنسجة المدروسة. يتطلب تشريح دور جينات معينة في علم وظائف الأعضاء اللمفاوية والفيزيولوجيا المرضية استخدام محفزات خاصة بالغدد الليمفاوية ، وبالتالي التحقق التجريبي من مستويات التعبير عن الجينات المستهدفة.
تمكن طرق العزل الفعال للخلايا البطانية اللمفاوية من الفئران البرية أو المعدلة وراثيا من استخدام المقايسات خارج الجسم الحي وفي المختبر لدراسة الآليات التي تنظم الوظائف اللمفاوية وتحديد مستويات التعبير للبروتينات المدروسة. لقد قمنا بتطوير وتوحيد وتقديم بروتوكول للعزل الفعال للخلايا البطانية اللمفاوية الجلدية (DLECs) عبر تنقية الخرزة المغناطيسية بناء على تعبير LYVE-1. يهدف البروتوكول المحدد إلى تزويد الباحثين بأداة لزيادة فهم وتوضيح اللاعبين المهمين في وظائف الخلايا البطانية اللمفاوية ، خاصة في المرافق التي لا تتوفر فيها معدات فرز الخلايا المنشطة بالفلورة.
يلعب الجهاز اللمفاوي دورا محوريا في علم وظائف الأعضاء البشرية. يعتبر عاملا استتبابيا حيويا ، يسهل الوظائف المهمة ، مثل الحفاظ على توازن سائل الأنسجة والبلازما ، والمراقبة المناعية ، وامتصاص الدهون1 ، بالإضافة إلى الوظائف التي تم تحديدها مؤخرا ، مثل قدرة إصلاح القلب2 والقدرة على التجدد للعظام وتكون الدم3. على الرغم من الدور الهام للجهاز اللمفاوي ، إلا أن العديد من جوانب دور الجهاز اللمفاوي ، وكذلك الآليات الجزيئية التي تحكم بعض المعلمات والاستجابات الفسيولوجية لا تزال بعيدة المنال. علاوة على ذلك ، فإن عيوب الأوعية الدموية اللمفاوية تؤدي إلى عوامل أو تتدهور في بعض الحالات الفيزيولوجية المرضية. ومن ا....
تم إجراء الدراسات على وفقا للبروتوكولات المعتمدة من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) التابعة لمركز العلوم الصحية بجامعة تكساس للتكنولوجيا (TTUHSC) للتجارب في TTUHSC والإدارة البيطرية لمحافظة غرب اليونان وفقا للتوجيه 2010/63 للتجارب في جامعة باتراس. اتبع بعناية لوائح التخلص من النفايات عند التخلص من النفايات الحيوانية.
1. عزل الأدمة الماوس
تم تطوير الطريقة لتحديد التعبير البروتيني ل GTPase صغير ، RhoA ، تم تخبط الجين المشفر في كلا الأليلات وحذفه تحت تأثير المروج البطاني اللمفاوي المستحث لعقار تاموكسيفين Prox1-CreERT2 18. يمكن استزراع LECs المعزولة لمدة تصل إلى أربعة أجيال ، وبعد ذلك تصبح شيخوخة. لقد تم تجميدها وإذا.......
الجهاز اللمفاوي هو منظم مهم لوظيفة الاستتباب في الجسم ، مع أهم الوظائف هي الحفاظ على بلازما السوائل ، وإزالة المنتجات الثانوية الأيضية الخلوية والجزيئات السامة ، وامتصاص الدهون ، والاتجار بالخلايا المناعية1،19. أثار تحديد العلامات المناسبة انفجارا في البي.......
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة اليونانية للبحث والابتكار (00376) ، والمعاهد الوطنية للصحة ، والمعهد الوطني للسرطان (NCI) [منحة R15CA231339] ، ومركز العلوم الصحية بجامعة تكساس للتكنولوجيا (TTUHSC) كلية الصيدلة مكتب منحة العلوم (إلى CMM) ، ومن قبل كلية الصيدلة ، تمويل بدء جامعة لويزيانا مونرو ، المعاهد الوطنية للصحة (NIH) من خلال المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة [Grant P20 GM103424-21] والبرنامج الفرعي للتنافسية البحثية (RCS) التابع لمجلس حكام لويزيانا من خلال صندوق دعم مجلس الحكام (LEQSF (2021-24) -RD-A-23) (إلى GM.). تم الحصول على معدات TTUHSC الشائعة المستخدمة من خلال منح معهد أبحاث الوقاية من السرطان في تكساس (CPRIT) RP190524 و RP200572. لم يكن للممولين أي دور ف....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.2 μm Syringe Filters | Fisher Scientific | 09-719C | |
100 mm Tissue Culture Dishes | Fisher Scientific | FB012924 | |
60 mm Tissue Culture Dishes | Fisher Scientific | FB012921 | |
Animal Hair Clipper | Wahl | ||
Antibiotic-Antimycotic Solution 100x | Fisher Scientific | 15240-062 | |
Blunt Forceps | Fine Science Tools | 11992-20 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A4919 | |
Cell Strainer 40 μm | Fisher Scientific | 542040 | |
Cell Strainer 70 μm | Fisher Scientific | 542070 | |
CO2 Incubator | |||
Collagen I, High Concentration Rat Tail | Corning | 354249 | dilute in 0.02 M Acetic Acid in H2O |
Collagenase Type II | Life Technologies | 17101-015 | |
Dispase | Life Technologies | 17105-041 | |
DMEM | Fisher Scientific | 11-995-073 | |
DNAse I Solution (2,500 U/mL) | Thermo Scientific | 90083 | |
Dynal MPC-L Magnetic Particle Concentrator | Invitrogen | 120-21D | |
EDTA | Sigma-Aldrich | 3690 | |
Endothelial Cell Growth Base Medium & Supplement (LEC medium) | R&D Systems | CCM027 | |
Euthanasia chamber | Euthanex Corporation | ||
Fine Forceps | Fine Science Tools | 11255-20 | |
Fine Scissors-Sharp | Fine Science Tools | 14060-10 | |
FITC anti-mouse F4/80 Antibody | Biolegend | 123107 | |
Goat Anti-Rabbit IgG Magnetic Beads | New England Biolabs | S1432S | |
LARC-A E-Z Anesthesia Induction Chamber | Euthanex Corporation | ||
MagnaBind Goat Anti-Rabbit IgG Beads | Thermo Scientific | 21356 | |
Paraformaldehyde Solution 4% in PBS | Fisher Scientific | AAJ19943K2 | |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Fisher Scientific | SH30256FS | |
Rabbit Anti-Mouse LYVE-1 | ReliaTech GmbH | 103-PA50 | |
Rotating/Shaking Incubator | |||
Round-Bottom Polypropylene Tubes | Corning | 352063 | |
Syringe Filters w 0.2 μm Pores | Fisher Scientific | 09-719C | |
Trypsin-EDTA | Fisher Scientific | 25-300-120 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved