نافذة مستقرة للتصوير داخل الجسم للبنكرياس الفئران

Summary

نقدم بروتوكولا للزرع الجراحي لنافذة بصرية مستقرة للتصوير بدقة تحت الخلوية لبنكرياس الفئران ، مما يسمح بإجراء دراسات تسلسلية وطولية للبنكرياس السليم والمريض.

Abstract

علم وظائف الأعضاء والفيزيولوجيا المرضية للبنكرياس معقدة. أمراض البنكرياس ، مثل التهاب البنكرياس وسرطان البنكرياس الغدي (PDAC) لها معدلات مراضة ووفيات عالية. التصوير داخل الجسم (IVI) هو تقنية قوية تمكن من التصوير عالي الدقة للأنسجة في كل من الحالات الصحية والمريضة ، مما يسمح بمراقبة ديناميكيات الخلية في الوقت الفعلي. يمثل IVI لبنكرياس الفئران تحديات كبيرة بسبب الطبيعة الحشوية العميقة والمتوافقة للعضو ، مما يجعله عرضة بشدة للتلف والتحف المتحركة.

الموصوفة هنا هي عملية زرع Stabilized Window للتصوير Intravital للفأر Pancreas (SWIP). يسمح SWIP ب IVI لبنكرياس الفئران في الحالات الصحية الطبيعية ، أثناء التحول من البنكرياس السليم إلى التهاب البنكرياس الحاد الناجم عن السيرولين ، وفي الحالات الخبيثة مثل أورام البنكرياس. بالاقتران مع الخلايا الموسومة وراثيا أو إعطاء الأصباغ الفلورية ، يتيح SWIP قياس ديناميكيات الخلية الواحدة وتحت الخلوية (بما في ذلك الخلية المفردة والهجرة الجماعية) بالإضافة إلى التصوير التسلسلي لنفس المنطقة ذات الاهتمام على مدار عدة أيام.

تعتبر القدرة على التقاط هجرة الخلايا السرطانية ذات أهمية خاصة لأن السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان في PDAC هو العبء النقيلي الهائل. يعد فهم الديناميات الفسيولوجية للورم الخبيث في PDAC حاجة حرجة لم تتم تلبيتها وحاسمة لتحسين تشخيص المريض. بشكل عام ، يوفر SWIP استقرارا محسنا للتصوير ويوسع تطبيق IVI في البنكرياس السليم وأمراض البنكرياس الخبيثة.

Introduction

من المحتمل أن تكون أمراض البنكرياس الحميدة والخبيثة مهددة للحياة ، مع وجود فجوات كبيرة في فهم الفيزيولوجيا المرضية الخاصة بها. التهاب البنكرياس - التهاب البنكرياس - هو السبب الرئيسي الثالث لدخول المستشفيات وإعادة الدخول إلى المستشفى المرتبط بأمراض الجهاز الهضمي في الولايات المتحدة ويرتبط بالمراضة الكبيرة والوفيات والعبء الاجتماعي والاقتصادي¹. يحتل سرطان البنكرياس الغدي القنوي (PDAC) المرتبة الثالثة كسبب رئيسي للوفاة المرتبطة بالسرطان 2 ، ويمثل معظم الأورام الخبيثة في البنكرياس³ وينذر بمعدل بقاء ضعيف لمدة 5 سنوات يبلغ 11٪ ^{فقط 2}. السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان في PDAC هو العبء النقيلي الساحق. لسوء الحظ ، فإن معظم المرضى يعانون من مرض النقيلي. لذلك ، فإن فهم ديناميكيات ورم خبيث في PDAC هو حاجة ماسة لم تتم تلبيتها في مجال أبحاث السرطان.

الآليات التي يقوم عليها الالتهاب والشلال النقيلي للبنكرياس غير مفهومة بشكل جيد. أحد المساهمين الرئيسيين في هذه الفجوة في المعرفة هو عدم القدرة على مراقبة ديناميكيات خلايا البنكرياس في الجسم الحي. تعد المراقبة المباشرة لهذه الديناميات الخلوية بالكشف عن أهداف مهمة للاستفادة من تشخيص وعلاج المصابين بأمراض البنكرياس وتحسينها.

التصوير داخل الجسم (IVI) هو تقنية مجهرية تسمح للباحثين بتصور ودراسة العمليات البيولوجية في الحية في الوقت الفعلي. يسمح IVI بالتصور المباشر عالي الدقة لديناميكيات داخل الخلايا والبيئة الدقيقة في الجسم الحي وداخل البيئة الأصلية للعملية البيولوجية المعنية. لذلك ، يسمح IVI في الجسم الحي بمراقبة العمليات الصحية والمرضية.

توفر طرق التصوير المعاصرة لكامل الجسم مثل التصوير بالرنين المغناطيسي والتصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني والتصوير المقطعي المحوسب مناظر ممتازة للأعضاء بأكملها ويمكن أن تكشف عن الأمراض ، حتى قبل ظهور الأعراض السريرية⁴. ومع ذلك ، فهي غير قادرة على تحقيق حل خلية واحدة أو الكشف عن المراحل المبكرة من مرض التهاب البنكرياس أو الورم الخبيث.

استخدمت الأبحاث السابقة دقة IVI أحادية الخلية لمراقبة الأمراض الحميدة والخبيثة للجلد ^5,6 ، والثدي⁷ ، والرئة⁸ ، والكبد⁹ ، والدماغ 10 ، وأورام البنكرياس 11 ، مما أدى إلى رؤى حول آليات تطور المرض ¹². ومع ذلك ، فإن بنكرياس الفئران يشكل عقبات كبيرة أمام تحقيق دقة الخلية الواحدة باستخدام IVI ، ويرجع ذلك أساسا إلى موقعه الحشوي العميق والامتثال العالي. علاوة على ذلك ، فهو عضو متفرع وموزع بشكل منتشر داخل المساريق يتصل بالطحال والأمعاء الدقيقة والمعدة ، مما يجعل الوصول إليه صعبا. كما أن الأنسجة حساسة للغاية للحركة الناتجة عن التمعج والتنفس المجاورين. يعد تقليل حركة البنكرياس أمرا ضروريا للفحص المجهري أحادي الخلية ، حيث يمكن للقطع الأثرية الحركية حتى بضعة ميكرونات أن تطمس الصور وتشوهها ، مما يجعل تتبع ديناميكيات الخلايا الفردية^{مستحيلا 13}.

لإجراء IVI ، يجب زرع نافذة تصوير البطن (AIW) جراحيا ^9,11. لزرع AIW جراحيا ، يتم خياطة إطار نافذة معدني في جدار البطن. بعد ذلك ، يتم توصيل العضو محل الاهتمام بالإطار باستخدام لاصق cyanoacrylate. في حين أن هذا يكفي لبعض الأعضاء الداخلية الصلبة (مثل الكبد والطحال والأورام الصلبة) ، فإن محاولات تصوير بنكرياس الفئران السليم تتعرض للخطر بسبب الاستقرار الجانبي والمحوري دون المستوى الأمثل بسبب نسيج الأنسجة المتوافق والبنية المعقدة¹⁴. لمعالجة هذا القيد ، طور Park et ^al.14 نافذة تصوير مصممة خصيصا للبنكرياس الصحي. تقلل نافذة تصوير البنكرياس (PIW) من تأثير حركة الأمعاء والتنفس من خلال دمج رف معدني أفقي داخل إطار النافذة ، أسفل غطاء الغطاء مباشرة ، مما يؤدي إلى استقرار الأنسجة والحفاظ على ملامستها لزجاج الغطاء. بينما يوفر PIW ثباتا جانبيا متزايدا ، وجدنا أن هذه النافذة لا تزال توضح الانجراف المحوري وتمنع بالإضافة إلى ذلك تصوير الأورام الصلبة الكبيرة بسبب الفجوة الضيقة بين الرف المعدني وغطاء^{الغطاء 15}.

لمعالجة هذه القيود ، قمنا بتطوير Stabilized Window للتصوير Intravital للفأر Pancreas (SWIP) ، وهي نافذة تصوير قابلة للزرع قادرة على تحقيق تصوير مستقر طويل الأمد لكل من البنكرياس السليم والمريض (الشكل 1) ¹⁵. هنا ، نقدم بروتوكولا شاملا للإجراء الجراحي المستخدم لزرع SWIP. على الرغم من أن الهدف الأساسي كان دراسة الآليات الديناميكية التي ينطوي عليها ورم خبيث ، إلا أنه يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة لاستكشاف جوانب مختلفة من بيولوجيا البنكرياس وعلم الأمراض.

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح الخاصة باستخدام الفقارية ، بما في ذلك الموافقة المسبقة من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام في كلية ألبرت أينشتاين للطب (IACUC).

1. تخميل النوافذ

ملاحظة: تخميل الفولاذ المقاوم للصدأ ينظف المعدن من الملوثات ويخلق طبقة أكسيد رقيقة تزيد بشكل كبير من التوافق الحيوي للمعدن مع الأنسجة الرخوة ، حتى بعد التيتانيوم¹⁶.

1. ابدأ عملية التخميل عن طريق غسل إطارات النوافذ البصرية بمحلول منظف نشط إنزيميا بنسبة 1٪ (وزن / حجم).
2. اغمر الإطارات في محلول هيدروكسيد الصوديوم 5٪ (وزن / حجم) عند 70 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة داخل وعاء زجاجي.
3. أخرج الإطارات واشطفها بالماء منزوع الأيونات.
4. اغمر الإطارات في محلول حامض الستريك بنسبة 7٪ (وزن / حجم) عند 55 درجة مئوية لمدة 10 دقائق داخل وعاء زجاجي جديد.
5. قم بإزالة الإطارات وشطفها بالماء منزوع الأيونات مرة أخرى.
6. كرر الخطوة 1.2 ، وأخيرا ، اشطف إطارات النوافذ بالماء منزوع الأيونات مرة أخيرة.

2. التحضير لزرع الورم أو جراحة النافذة

ملاحظة: لدراسات أورام البنكرياس ، يجب زرع الخلايا السرطانية والسماح لها بالنمو إلى أورام علنية. لتصور الخلايا السرطانية في الجسم الحي ، يوصى باستخدام الخلايا التي تم تغييرها وراثيا للتعبير عن البروتينات الفلورية مثل Dendra2. سيؤدي استخدام ملصقات البروتين الفلوري الساطعة إلى التخفيف من المشكلات المحتملة المتعلقة بالتألق الذاتي للأنسجة. تمت مناقشة البروتينات الفلورية المحتملة الأخرى والأصباغ ونماذج الفئران الفلورية المشفرة وراثيا التي يمكن استخدامها في مكان آخر^17،18. لمنع تلوث مجال الجراحة ، قم بإجراء العملية الجراحية في غطاء محرك السيارة أو خزانة التدفق الصفحي وتأكد من استخدام مناطق مميزة للتحضير والجراحة والتعافي.

1. قبل الجراحة ، قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية في الأوتوكلاف ، وإذا لزم الأمر ، استخدم معقم حبة ساخنة للإجراءات اللاحقة. تأكد من أن الجراحة تستخدم تقنية النصائح فقط.
2. قم بتشغيل الوسادة الجراحية الساخنة ومعقم الخرزة وانتظر حتى تصل إلى درجة حرارة التشغيل المناسبة. يجب مراقبة درجة حرارة وسادة التسخين باستخدام مقياس حرارة سطحي لتجنب الحروق المحتملة. ضع قطعة قماش معقمة فوق وسادة التدفئة إذا كان لا يمكن التحكم في درجة الحرارة بشكل كاف.
   ملاحظة: تتأثر درجة حرارة الجسم أثناء الإجراءات القصيرة (≤20 دقيقة) ، مثل الورم وزرع النافذة ، بشكل ضئيل أثناء استخدام وسادة جراحية ساخنة. ومع ذلك ، تتطلب فترات التخدير الأطول ، مثل التصوير بفاصل زمني ممتد ، وضع الماوس في غرفة ساخنة للحفاظ على درجة حرارة الجسم.
3. تخدير الماوس مع 5 ٪ isoflurane في غرفة التخدير.
4. خطوة حاسمة: خفض التخدير إلى 2٪ بمجرد أن يكون الفأر فاقدا للوعي. راقب بعناية مستوى التخدير والعناصر الحيوية للفأر (على سبيل المثال، باستخدام مقياس التأكسج النبضي)¹⁹.
5. ضع قطرة صغيرة من مزلق العين على كل عين من عيون الفأر لمنع جفاف القرنية.
6. قبل الجراحة ، ضع كريم مزيل الشعر بسخاء على الجزء العلوي الأيسر من البطن لإزالة الشعر. بعد 20 ثانية ، استخدم المناديل الورقية المبللة لمسح الشعر وكريم إزالة الشعر بإحكام. كرر العملية حسب الحاجة حتى تتم إزالة كل الشعر من منطقة الجراحة.
7. حقن 10 ميكرولتر من البوبرينورفين (0.1 ملغ / كغ) مخفف في 90 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني تحت الجلد لضمان تسكين ما قبل الجراحة.

3. زرع ورم البنكرياس

1. تحضير حصص الخلايا السرطانية بالتركيز المطلوب (بناء على وقت مضاعفة الخلايا السرطانية). ضع معلق الخلية في حقنة الأنسولين واحتفظ بها على الجليد. لاتباع هذا البروتوكول ، استخدم 10⁶ خلايا سرطانية متزامنة ل KPC 20 معلقة بحد أقصى 50 ميكرولتر من PBS ، باتباع بروتوكول الحقن التقويمي المقتبس من Erstad et^al.21
   ملاحظة: هذا الخط الخلوي الذي يتم حقنه بهذا التركيز ينتج بشكل روتيني أوراما واضحة أو كبيرة بشكل مناسب لمدة 10-14 يوما. يجب تقييم النسخ الفرعية لهذا الخط الخلوي وخطوط خلايا البنكرياس الأخرى للحصول على التركيزات والجداول الزمنية المناسبة لإنتاج أورام ذات حجم مناسب).
2. اغسل يديك باستخدام صابون مطهر.
3. قبل كل عملية جراحية جديدة ، ارتد قفازات معقمة جديدة.
4. نقل الماوس إلى غطاء جراحي معقم ووضعه في وضع الاستلقاء الجانبي الأيمن الجزئي.
5. تأمين الأطراف مع شريط ورقي.
   ملاحظة: الاستخدام السليم للأدوات مهم طوال الإجراء. يتم عرض أمثلة على كيفية حمل الملقط ومقص Castroviejo وأداة التقاط الفراغ في الشكل 2A-C.
6. تعقيم البطن بمطهر (الشكل 2 د).
7. تأكد من تخدير بالكامل عن طريق إجراء اختبار قرصة إصبع القدم.
8. قم بعمل شق تحت الضلع الأيسر 10-15 مم في الجلد باستخدام ملقط ومقص Castroviejo (الشكل 2E).
9. السيطرة على الإرقاء باستخدام مسحات القطن أو قلم الكي عند / عند الضرورة.
10. قسم العضلات الأساسية بعناية بالملقط ومقص Castroviejo لدخول الصفاق (الشكل 2F).
11. باستخدام مسحات القطن المعقمة ، قم بإخراج البنكرياس والطحال بشكل غير مؤلم.
12. قم بتحريك البنكرياس للخارج حتى لا تكون هناك طيات (الشكل 2G).
13. تحديد موقع حقن الورم المطلوب في الجسم أو ذيل البنكرياس (بعيدا عن الأوعية الدموية).
14. الخطوة الحاسمة: بعد تحديد موضع البنكرياس بعناية ، استخدم الملقط لتوفير التوتر للأنسجة وأدخل طرف حقنة الأنسولين ، مع توجيه الشطبة لأعلى ، في الموقع المطلوب للبنكرياس على عمق 4-5 مم (الشكل 2H).
15. حقن ببطء محلول الخلايا السرطانية. ابحث عن فقاعة صغيرة تؤكد الحقن الناجح (الشكل 2I).
16. أعد البنكرياس بعناية إلى البطن دون إزعاج فقاعة حقن الخلايا السرطانية (الشكل 2J).
17. باستخدام خيوط بوليديوكسانون قابلة للامتصاص 5-0 ، أغلق طبقة العضلات أولا ثم الجلد بخيوط متقطعة (الشكل 2K-N).
18. قم بتغطية الشق بغراء cyanoacrylate (الشكل 2O) ، ثم أعد الماوس إلى قفص نظيف أسفل مصباح تسخين للتعافي. تطبيق المضادات الحيوية في مياه الشرب لمنع العدوى. مراقبة الفئران والسماح لهم بالشفاء التام من الجراحة.
    ملاحظة: تدار المضادات الحيوية كما هو مطلوب بموجب بروتوكول IACUC. يتم إيواء جميع بشكل فردي.
19. اسمح للورم بالتطور لمدة 10-14 يوما حتى يصبح واضحا من خلال جدار البطن.

4. جراحة نافذة البنكرياس

1. عندما تكون جاهزة للتصوير ، ابدأ جراحة زرع النافذة. للبدء ، اغسل يديك بالصابون المطهر.
2. قبل كل عملية جراحية جديدة ، ارتد قفازات معقمة جديدة.
3. على الحامل الجراحي الساخن ، ضع الماوس في وضع الاستلقاء الجانبي الأيمن لفضح البطن الأيسر.
4. ثبت الأطراف الأمامية والخلفية للفأرة على المرحلة الجراحية الساخنة بشكل قحفي وذيلي باستخدام شريط ورقي. تأكد من أن الطحال (تحت الجلد) مرئي داخل المجال الجراحي (الشكل 3 أ).
5. للحفاظ على العقم ، قم بفك جميع الأدوات الجراحية في الغطاء.
6. تطهير موقع الجراحة عن طريق مسح جلد الماوس مع تطبيق سخي من مطهر.
7. تأكد من تخدير بالكامل عن طريق إجراء اختبار قرصة إصبع القدم.
8. خطوة حاسمة: ارفع جلد الربع العلوي الأيسر من البطن بالملقط وقم بعمل شق دائري ~ 10 مم في الجلد والعضلات باستخدام مقص Castroviejo (الشكل 3B ، C).
9. السيطرة على النزيف والحفاظ على الارقاء باستخدام مسحات القطن أو قلم الكي، عند الحاجة.
10. حدد موقع البنكرياس ، المتصل بالطحال ، وحدد الاتجاه الذي يضعه البنكرياس داخل الشق لتحديد مكان وضع الغرزة المتقاطعة الداعمة.
11. باستخدام خياطة الحرير 5-0 ، ضع الغرزة الأولى في الموقع المطلوب في طبقة العضلات. اربط هذه النهاية ب 3-5 عقدة. (الشكل 3D ، E)
12. استمر في الغرز مباشرة عبر الشق. قطع وترك ذيل ~ 5 سم (الشكل 3F).
13. كرر الخطوتين 4.11 و 4.12 عموديا على الغرزة الأولى (الشكل 3G ، H).
14. الخطوة الحاسمة: ارفع البنكرياس وضعه برفق فوق الغرزة المتقاطعة (الشكل 3I ، J). احرص على عدم إتلاف البنكرياس أثناء التلاعب.
15. خطوة حاسمة: باستخدام خياطة الحرير 5-0 ، قم بإجراء غرزة سلسلة المحفظة ~ 1 مم من الحفرة ، محيطيا ، متشابكة الجلد وطبقة العضلات (الشكل 3K).
16. ضع إطار النافذة بحيث تستقر حواف الشق الدائري داخل أخدود النافذة (الشكل 3L).
17. اربط النافذة المزروعة عن طريق ربط الحرير 5-0 بإحكام.
18. قم بتحميل 100 ميكرولتر من لاصق cyanoacrylate السائل في حقنة 1 مل.
19. تجفيف الأنسجة عن طريق تطبيق تدفق دقيق من الهواء المضغوط لمدة ~ 10 ثوان.
20. اربط إطار النافذة من حافته الخارجية بالملقط وارفعه برفق لضمان فصل البنكرياس عن السطح السفلي لإطار النافذة.
21. الخطوة الحاسمة: قم بتوزيع طبقة رقيقة من لاصق cyanoacrylate السائل على طول تجويف النافذة (الشكل 3M). تأكد من عدم الحصول على أي من المادة اللاصقة على أنسجة البنكرياس.
22. باستخدام الشاحنات المفرغة من الهواء ، ارفع غطاء الغطاء مقاس 5 مم.
23. ضع غطاء الغطاء بعناية داخل التجويف في وسط إطار النافذة البصري. امسك بضغط خفيف ، مما يسمح للمادة اللاصقة cyanoacrylate بالتثبيت (~ 25 ثانية).
24. افصل غطاء الغطاء عن الشاحنات المفرغة باستخدام الملقط.
25. شد الغرز المتقاطعة لتثبيت البنكرياس بإحكام على غطاء الغطاء (الشكل 3N ، O). ملاحظة: لا تفرط في شد الغرزة المتقاطعة لأنها يمكن أن تسبب تلفا ونقص تروية البنكرياس.
26. قطع نهايات خياطة.
27. قم بإزالة الشريط من الماوس.
28. قم بإيقاف تشغيل مبخر الأيزوفلوران.
29. نقل الماوس إلى قفص نظيف أو مباشرة إلى المجهر داخل الجسم.
30. إيواء بشكل فردي بعد جراحة النافذة ومراقبتها حتى الشفاء التام.
31. ثم يتم إجراء التصوير على مجهر متعدد الفوتونات ثنائي الليزر كما وصفنا سابقا ²²،²³،²⁴ بالنسبة لجلسات التصوير الطويلة ^، يتم وضع الماوس في غرفة ساخنة للحفاظ على درجة حرارة الجسم وتزويده بالسوائل الداعمة وفقا لمعايير IACUC.

5. علاج Cerulein لتحريض التهاب البنكرياس

1. للتحقيق في بداية التهاب البنكرياس ، علاج الفئران السليمة مع cerulein بعد زرع SWIP. تأكد من صيام الفئران لمدة 14-18 ساعة وإعطائها الماء قبل إعطاء السيرولين.
2. حقن 50 ميكروغرام/كغ من السيرولين في 100 ميكرولتر من 1x DPBS المعقم داخل الصفاق على فترات 1 ساعة لمدة تصل إلى ثماني حقن. إدارة حجم مكافئ من 1x DPBS وحده ، عن طريق الحقن داخل الصفاق ، إلى الفئران السيطرة.
3. بعد التصوير ، التضحية بالفئران بعد 24 ساعة من الحقن الأول عن طريق خلع عنق الرحم وفقا لمعايير IACUC.
4. قم بإجراء التصوير على مجهر متعدد الفوتونات ثنائي الليزر كما هو موضح سابقا²²،^23،24. لجلسات التصوير الطويلة ، ضع الماوس في غرفة ساخنة للحفاظ على درجة حرارة الجسم وتزويده بالسوائل الداعمة وفقا لمعايير IACUC.

النتائج

يوضح الشكل 1 ، المقتبس من Du et ^al.15 ، صورا ثابتة من فيلم IVI بفاصل زمني لبنكرياس الفئران. يمكن ملاحظة بعض حركة الأنسجة خلال فترة الاستقرار الأولية (الساعة الأولى من التصوير ، الشكل 1 أ). ومع ذلك ، مع التصوير المستمر بعد فترة الاستقرار هذه (>75 دقيقة) ، لا...

Discussion

يوفر بروتوكول SWIP الموصوف هنا طريقة محسنة لتثبيت أنسجة البنكرياس من خلال استخدام تقنية سلة الغرزة المتقاطعة. مكنت نوافذ تصوير البطن المبكرة (AIWs) من التصوير داخل الجسم (IVI) للأعضاء الداخلية للبطن ولكنها لم تحد بشكل كاف من حركة الأنسجة الرخوة مثل البنكرياس. استجابة لذلك ، طور Park et al. نافذة تصوي...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1% (w/v) solution of enzyme-active detergent	Alconox Inc	NA	Concentrated, anionic detergent with protease enzymes for manual and ultrasonic cleaning
5% (w/v) solution of sodium hydroxide	Sigma-Aldrich	S8045	Passivation reagent
5 mm cover glass	Electron Microscopy Sciences	72296-05	Round Glass Coverslips
7% (w/v) solution of citric acid	Sigma-Aldrich	251275	Passivation reagent
28G 1 mL BD Insulin Syringe	BD	329410	Syringe for cell injection
Baytril 100 (enrofloxacin)	Bayer (Santa Cruz Biotechnology)	sc-362890Rx	Antibiotic
Bench Mount Heat Lamp	McMaster-Carr	3349K51	Heat lamp
Buprenorphine 0.3 mg/mL	Covetrus North America	059122	Buprenorphine Analgesia
Castroviejo Curved Scissors	World Precision Instruments	WP2220	Scissor for cutting tissue
C57BL/6J Mouse	Jackson Laboratory	000664	C57BL/6J Mouse
Chlorhexidine solution	Durvet	7-45801-10258-3	Chlorhexidine Disinfectant Solution
Compressed air canister	Falcon	DPSJB-12	Compressed air for drying tissue
Cyano acrylate - Gel Superglue	Staples	234790-6	Skin Glue
Cyano acrylate - Liquid Superglue	Staples	LOC1647358	Coverslip Glue
DPBS 1x	Corning	21-031-CV	DPBS for cerulein/cell injections
Gemini Cautery Kit	Harvard Apparatus	726067	Cautery Pen
Germinator 500	CellPoint Scientific	GER 5287-120V	Bead Sterilizer
Graefe Micro Dissecting Forceps; Serrated; Slight Curve; 0.8 mm Tip Width; 4" Length	Roboz Surgical	RS-5135	Graefe Micro Dissecting Forceps
Imaging microscope	NA	NA	See Entenberg et al. 2011 [27]
Imaging software	NA	NA	See Entenberg et al. 2011 [27]
Isoethesia (isoflurane)	Henry Schein Animal Health	50033	Isoflurane Anesthesia
Kim Wipes	Fisher Scientific	06-666-A	Kim Wipes
Laboratory tape	Fisher Scientific	159015R	Laboratory Tape
Mouse Dissecting Kit	World Precision Instruments	MOUSEKIT	Surgical Instruments
Mouse Paw Pulse Oximeter Sensor	Kent Scientific Corpo	MSTAT Sensor-MSE	Pulse Oximeter
Mouse Surgisuite	Kent Scientific	SURGI-M04	Heated platform
Nair Hair Removal Lotion	Amazon	B001RVMR7K	Depilatory Lotion
Oxygen	TechAir	OX TM	Oxygen
PERMA-HAND Black Braided Silk Sutures, ETHICON Size 5-0	VWR	95056-872	Silk Suture
Phosphate Buffered Saline 1x	Life Technologies	10010-023	PBS
PhysioSuite System	Kent Scientific	PhysioSuite	Heated Platform Controller
Puralube	Henry Schein Animal Health	008897	Eye Lubricant
Puritan Nonsterile Cotton-Tipped Swabs	Fisher Scientific	867WCNOGLUE	Cotton Swabs
SHARP Precision Barrier Tips, For P-100, 100 µL	Denville Scientific Inc.	P1125	100 µL Pipet Tips
Tetramethylrhodamine isothiocyanate–Dextran	Sigma-Aldrich	T1287-500MG	Vascular Label
Window-fixturing plate	NA	NA	Custom made plate for window placement on microscope stage. Plate is made of 0.008 in stainless steel shim stock. For dimensions of plate see Entenberg et al., 2018 [8].
Window Frame	NA	NA	The window is composed of a steel frame with a central aperture that accepts a 5 mm coverslip. A groove of 1.75 mm around the circumference of the frame provides space for the peritoneal muscle and skin layers to adhere to. See Entenberg et al., 2018 [8].