Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Представлен протокол хирургической имплантации стабилизированного постоянного оптического окна для субклеточной визуализации поджелудочной железы мышей, позволяющий проводить серийные и лонгитюдные исследования здоровой и больной поджелудочной железы.

Аннотация

Физиология и патофизиология поджелудочной железы сложны. Заболевания поджелудочной железы, такие как панкреатит и аденокарцинома поджелудочной железы (PDAC), характеризуются высокой заболеваемостью и смертностью. Прижизненная визуализация (ВВИ) — это мощный метод, позволяющий получать изображения тканей с высоким разрешением как в здоровом, так и в больном состоянии, что позволяет наблюдать за динамикой клеток в режиме реального времени. ИВИ поджелудочной железы мышей представляет собой серьезную проблему из-за глубокой висцеральной и податливой природы органа, что делает его очень подверженным повреждениям и артефактам движения.

Здесь описан процесс имплантации S-табилизированного W-индудля визуализациимышиного P-ancreas(SWIP). SWIP позволяет проводить внутривенное введение поджелудочной железы мышей в нормальном здоровом состоянии, во время трансформации здоровой поджелудочной железы в острый панкреатит, индуцированный церулеином, и при злокачественных состояниях, таких как опухоли поджелудочной железы. В сочетании с генетически мечеными клетками или введением флуоресцентных красителей, SWIP позволяет измерять динамику одиночных клеток и субклеток (включая одноклеточную и коллективную миграцию), а также получать последовательные изображения одной и той же области интереса в течение нескольких дней.

Способность улавливать миграцию опухолевых клеток имеет особое значение, поскольку основной причиной смертности, связанной с раком, при PDAC является подавляющее метастатическое бремя. Понимание физиологической динамики метастазирования при ОАК является критической неудовлетворенной потребностью и имеет решающее значение для улучшения прогноза пациента. В целом, SWIP обеспечивает улучшенную стабильность визуализации и расширяет область применения IVI при здоровых заболеваниях поджелудочной железы и злокачественных заболеваниях поджелудочной железы.

Введение

Доброкачественные и злокачественные заболевания поджелудочной железы потенциально опасны для жизни, при этом существуют значительные пробелы в понимании их патофизиологии. Панкреатит – воспаление поджелудочной железы – является третьей по значимости причиной госпитализаций и повторных госпитализаций в связи с желудочно-кишечными заболеваниями в США и связан со значительной заболеваемостью, смертностью и социально-экономическим бременем. Протоковая аденокарцинома поджелудочной железы (PDAC), занимающая третье место среди основныхпричин смертности, связанной с раком, является причиной большинства злокачественных новообразо....

протокол

Все процедуры, описанные в этом протоколе, были выполнены в соответствии с руководящими принципами и правилами использования позвоночных животных, включая предварительное одобрение Институционального комитета по уходу за животными и использованию животных Медицинского колледжа Альберта Эйнштейна (IACUC).

1. Пассивация окон

ПРИМЕЧАНИЕ: Пассивация нержавеющей стали очищает металл от загрязнений и создает тонкий оксидный слой, который значительно повышает биосовместимость металла с мягкими тканями, даже по сравнению с титаном16.

  1. Начните процесс пассивации, промыв оп....

Результаты

На рисунке 1, адаптированном из Du et al.15, показаны кадры из покадрового видеоролика IVI мышиной поджелудочной железы. Некоторое движение тканей можно наблюдать в течение начального периода успокоения (первый час визуализации, рис. 1А). Однако пр?.......

Обсуждение

Протокол SWIP, описанный здесь, обеспечивает улучшенный метод стабилизации тканей поджелудочной железы с использованием техники вышивки корзиной крестиком. Ранние окна визуализации брюшной полости (AIW) позволяли проводить прижизненную визуализацию (IVI) внутренних органов брюшной полос.......

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Благотворительный фонд Эвелин Липпер, Центр биофотоники Грусса-Липпера, Программа комплексной визуализации для исследования рака, стипендия NIH T-32 (CA200561) и грант Программы исследования рака поджелудочной железы Министерства обороны США (PCARP) PA210223P1.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1% (w/v) solution of enzyme-active detergentAlconox IncNAConcentrated, anionic detergent with protease enzymes for manual and ultrasonic cleaning
5% (w/v) solution of sodium hydroxideSigma-AldrichS8045Passivation reagent
5 mm cover glassElectron Microscopy Sciences72296-05Round Glass Coverslips 
7% (w/v) solution of citric acidSigma-Aldrich 251275Passivation reagent
28G 1 mL BD Insulin SyringeBD329410Syringe for cell injection
Baytril 100 (enrofloxacin)Bayer (Santa Cruz Biotechnology)sc-362890RxAntibiotic
Bench Mount Heat LampMcMaster-Carr3349K51Heat lamp
Buprenorphine 0.3 mg/mLCovetrus North America059122Buprenorphine Analgesia
Castroviejo Curved ScissorsWorld Precision InstrumentsWP2220Scissor for cutting tissue
C57BL/6J MouseJackson Laboratory000664 C57BL/6J Mouse
Chlorhexidine solutionDurvet7-45801-10258-3Chlorhexidine Disinfectant Solution
Compressed air canisterFalconDPSJB-12Compressed air for drying tissue
Cyano acrylate - Gel SuperglueStaples234790-6Skin Glue
Cyano acrylate - Liquid SuperglueStaplesLOC1647358Coverslip Glue
DPBS 1xCorning21-031-CVDPBS for cerulein/cell injections
Gemini Cautery KitHarvard Apparatus726067Cautery Pen
Germinator 500CellPoint ScientificGER 5287-120VBead Sterilizer
Graefe Micro Dissecting Forceps; Serrated; Slight Curve; 0.8 mm Tip Width; 4" LengthRoboz SurgicalRS-5135 Graefe Micro Dissecting Forceps
Imaging microscopeNANASee Entenberg et al. 2011 [27]
Imaging softwareNANASee Entenberg et al. 2011 [27]
Isoethesia (isoflurane)Henry Schein Animal Health50033Isoflurane Anesthesia
Kim WipesFisher Scientific06-666-A Kim Wipes
Laboratory tapeFisher Scientific159015RLaboratory Tape
Mouse Dissecting KitWorld Precision InstrumentsMOUSEKITSurgical Instruments
Mouse Paw Pulse Oximeter SensorKent Scientific CorpoMSTAT Sensor-MSEPulse Oximeter
Mouse SurgisuiteKent ScientificSURGI-M04Heated platform
Nair Hair Removal LotionAmazonB001RVMR7KDepilatory Lotion
OxygenTechAirOX TMOxygen
PERMA-HAND Black Braided Silk Sutures, ETHICON Size 5-0VWR95056-872Silk Suture
Phosphate Buffered Saline 1xLife Technologies10010-023PBS
PhysioSuite SystemKent ScientificPhysioSuiteHeated Platform Controller
PuralubeHenry Schein Animal Health008897Eye Lubricant
Puritan Nonsterile Cotton-Tipped Swabs Fisher Scientific867WCNOGLUECotton Swabs
SHARP Precision Barrier Tips, For P-100, 100 µLDenville Scientific Inc.P1125100 µL Pipet Tips
Tetramethylrhodamine isothiocyanate–DextranSigma-AldrichT1287-500MGVascular Label
Window-fixturing plateNANACustom made plate for window placement on microscope stage. Plate is made of 0.008 in stainless steel shim stock. For dimensions of plate see Entenberg et al., 2018 [8].
Window FrameNANAThe window is composed of a steel frame with a central aperture that accepts a 5 mm coverslip. A groove of 1.75 mm around the circumference of the frame provides space for the peritoneal muscle and skin layers to adhere to. See Entenberg et al., 2018 [8].

Ссылки

  1. Peery, A. F., et al. Burden and cost of gastrointestinal, liver, and pancreatic diseases in the United States: Update 2021. Gastroenterology. 162 (2), 621-644 (2022).
  2. Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A. Cancer....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

SWIPPDAC

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены