A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول تحضير اللقاح ، والقياس الكمي للغشاء الحيوي على ألواح العيار الدقيق باستخدام صبغة البنفسج البلوري ، والعدد القابل للتطبيق في الأغشية الحيوية ، وتصور الأغشية الحيوية للراكدة.
تسبب الراكدة عدوى المستشفيات ويمكن أن يساهم تكوين الأغشية الحيوية في البقاء على الأسطح الجافة مثل بيئات المستشفيات. وبالتالي ، فإن القياس الكمي والأغشية الحيوية والتصور هما طريقتان مهمتان لتقييم إمكانات سلالات الراكدة للتسبب في عدوى المستشفيات. يمكن قياس الأغشية الحيوية المتكونة على سطح الصفيحة الدقيقة من حيث الحجم وأعداد الخلايا. يمكن قياس أحجام الأغشية الحيوية عن طريق تلطيخها باستخدام البنفسج البلوري ، والغسيل ، وإزالة البقع باستخدام الإيثانول ، ثم قياس الصبغة القابلة للذوبان باستخدام قارئ الصفائح الدقيقة. لتحديد عدد الخلايا المضمنة في الأغشية الحيوية ، يتم التخلص من الأغشية الحيوية باستخدام كاشطات الخلايا ، ويتم حصادها في المياه المالحة ، وتحريكها بقوة في وجود حبات زجاجية ، وتنتشر على أجار Acinetobacter. بعد ذلك ، يتم تحضين الألواح عند 30 درجة مئوية لمدة 24-42 ساعة. بعد الحضانة ، يتم تعداد المستعمرات الحمراء لتقدير عدد الخلايا في الأغشية الحيوية. يمكن أن تكون طريقة العد القابلة للتطبيق هذه مفيدة أيضا لحساب خلايا Acinetobacter في الأغشية الحيوية المختلطة الأنواع. يمكن تصور الأغشية الحيوية الراكدة باستخدام أصباغ الفلورسنت. يتم استخدام صفيحة مجهرية متاحة تجاريا مصممة للتحليل المجهري لتشكيل الأغشية الحيوية. بعد ذلك ، يتم تلطيخ الأغشية الحيوية المرفقة بالسطح السفلي بأصباغ SYTO9 و propidium iodide ، وغسلها ، ثم تصورها باستخدام مجهر المسح بالليزر متحد البؤر.
من المعروف أن الراكدة تسبب عدوى المستشفيات ، ويتم الإبلاغ عن عدواها البشرية ، خاصة في مرافق الرعاية الصحية ، بشكل متزايد1. ينتشر على نطاق واسع في المستشفيات ومرافق الرعاية الصحية والبيئات المرتبطة بالغذاء2،3،4. يمكن أن يعيش لفترة طويلة في البيئات بما في ذلك أسطح المستشفيات مثل قضبان السرير وطاولات السرير وسطح أجهزة التهوية والأحواض4. قد يكون هذا الثبات على الأسطح البيئية أحد العوامل المهمة التي تساهم في عدوى المستشفيات من Acinetobacter4.
الأغشية الحيوية هي شكل....
1. إعداد اللقاح البكتيري
وفقا للبروتوكول ، تم تشكيل الأغشية الحيوية لعزلات Acinetobacter ، المعزولة أصلا من أسطح المطبخ ، على صفيحة من البوليسترين 96 بئرا ، ملطخة بالبنفسج البلوري ، وتم إذابة الأصباغ في الإيثانول وقياسها لكتلة الأغشية الحيوية (الشكل 1). ويختلف عدد الأغشية الحيوية تفاوتا كبيرا تبعا ل?.......
باستخدام البروتوكول الموصوف ، تم قياس تكوين الأغشية الحيوية لعزلات Acinetobacter بدرجات متفاوتة ، وتصورها ، وتم تقدير الخلايا القابلة للحياة في الأغشية الحيوية (الشكل 1 والشكل 2 والشكل 3).
في هذا البروتوكول ، تم استخدام درجتي ح?.......
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا البحث من قبل برنامج البحث الرئيسي (E0210702-03) التابع للمعهد الكوري لبحوث الأغذية (KFRI) ، بتمويل من وزارة العلوم وتكنولوجيا المعلومات والاتصالات.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
96-well cell culture plate | SPL | 30096 | Polystyrene 96-well plate |
BHI (Brain Heart Infusion) broth | Merck KGaA | 1.10493.0500 | |
Blood Agar Base Plate | KisanBio | MB-B1005-P50 | Growth media for Acinetobacter |
CHROMagar Acinetobacter | CHROMagar | AC092 | Selective plate for Acinetobacter |
Crystal violet solution | Sigma-Aldrich | V5265 | |
Filmtracer LIVE/DEAD biofilm viability kit | Invitrogen | L10316 | SYTO9 and propidium iodide |
Microplate reader | Tecan | Infinite M200 PRO NanoQuant | Biofilm measurement |
RBC Glass Plating Beads | RBC | RG001 | Glass beads |
μ-Plate 96 Well Black | ibidi | 89621 | Microplate intended for CLSM |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved