A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تقدم هذه الدراسة مجموعة سهلة الاستخدام وكاملة وبسيطة من الطرق لتسمية وتحليل الكبيبات من كليتي الفئران التي تم تطهيرها من CUBIC. يمكن الحصول على بيانات مثل رقم الكبيبة وحجمها بسهولة وموثوقية باستخدام إيزوثيوسيانات الفلوريسئين (FITC) -Dextran ، أو الفحص المجهري الفلوري للصفائح الضوئية (LSFM) ، أو الفحص المجهري البؤري المشترك والبرامج مثل Imaris.

Abstract

الكبيبات هي وحدات أساسية في الكلى. ومن ثم ، فإن دراسة الكبيبات أمر محوري لفهم وظائف الكلى وعلم الأمراض. يوفر التصوير البيولوجي معلومات بديهية. وبالتالي ، من الأهمية بمكان تسمية الكبيبات ومراقبتها. ومع ذلك ، فإن طرق مراقبة الكبيبات المستخدمة حاليا تتطلب عمليات معقدة ، وقد تفقد النتائج تفاصيل التسمية أو المعلومات ثلاثية الأبعاد (3D). تم استخدام كوكتيلات تصوير الدماغ الواضحة والخالية من العوائق وتقنية مسح الأنسجة بالتحليل الحسابي (CUBIC) على نطاق واسع في أبحاث الكلى ، مما يسمح باكتشاف أكثر دقة وعمق اكتشاف أعمق. وجدنا أنه يمكن تمييز كبيبات الفئران بسرعة وفعالية عن طريق حقن الوريد الذيل للوزن الجزيئي المتوسط FITC-Dextran متبوعا بطريقة المقاصة المكعبة. يمكن مسح كلية الفأر التي تم تطهيرها بواسطة مجهر ضوئي (أو مجهر متحد البؤر عند تقطيعها) للحصول على أكوام صور ثلاثية الأبعاد لجميع الكبيبات في الكلية بأكملها. يمكن بسهولة رقمنة إشارات الكبيبات وتحليلها لقياس عدد الكبيبات وحجمها وتواترها.

Introduction

عدد وحجم الكبيبات مهمة جدا لتشخيص وعلاج أمراض الكلى المختلفة1،2،3،4،5. المعيار الذهبي لتقدير عدد الكبيبات هو تركيبة التشريح المادي / المجزأ. ومع ذلك ، تتطلب هذه الطريقة كواشف ومعدات خاصة ، مما يجعلها بطيئة ومكلفة6،7،8،9. توفر الخزعة ثروة من المعلومات ، ولكن من الواضح أن هذه الطريقة مناسبة فقط للتقديرات التقريبية10,11. كما ....

Protocol

تم استخدام الفئران البالغة C57BL / 6 (6 أسابيع من العمر ، 25-30 جم) في هذه الدراسة. تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للوائح المحلية لرعاية وأخلاقيات التجارب. تمت الموافقة على الدراسة من قبل مستشفى غرب الصين التابع للجنة أخلاقيات البحوث الطبية الحيوية بجامعة سيتشوان.

1. وضع العلامات الكبيبات وإعداد الأنسجة

  1. وضع العلامات الكبيبات
    1. قم بإذابة FITC-dextran (10 مجم) في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) بنسبة 1: 1 (1 مجم: 1 مل) لتحضير محلول مسبار العمل.
      ملاحظة: يمكن تخزين حل العمل في 4 °C لمدة 1 شهر.
    2. ضع الماوس C57 في مثبت وريد ذيل الماوس. بلل الشاش بالماء الساخن ، لف الشاش حول الجزء الأوسط من ذيل الماوس ، وق....

النتائج

توفر هذه الدراسة طريقة بسيطة وفعالة لوضع العلامات وتحليل الكبيبات في كلى الفئران.

يمكن تمييز الكبيبات (الأوعية الدموية) بشكل جيد عن طريق حقن FITC-Dextran داخل الأوعية الدموية. بعد عملية المقاصة ، أصبحت الكلية شفافة (الشكل 1 أ) ، ويمكن ملاحظة الكبيبات بوضوح باستخدا?.......

Discussion

يمكن تصنيف تقنيات إزالة الأنسجة إلى 3 أو 4 مجموعات29،30،31. تم تطبيق إزالة الأنسجة القائمة على المذيبات العضوية (على سبيل المثال ، DISCO و PEGASOS) ، وتنظيف الأنسجة المائية (على سبيل المثال ، CUBIC) ، وتطهير الأنسجة بتضمين الهيدروجيل (على سبيل المثال ، .......

Disclosures

يعلن جميع المؤلفين عدم وجود تضارب في المصالح.

Acknowledgements

تم دعم هذه الدراسة بمنح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82204951) وبرنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا (2020JDRC0102).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
4% PFABiosharp7007171800Fixation reaagen
502 Glue Deli7146For fixing the kidney to the sample fixing adapter 
AntipyrineAladdinA110660Clearing reagent
Brain MatrixRWD Life Science1mm 40-75Tissue slicing
Confocal microscopyNikonA1plusImage acquisition
FITC-DextranSigma-AldrichFD150SLabeling reagent
Light sheet fluorescence microscopy ZeissLight sheet 7 Image acquisition
MiceEnsiweierAdult C57BL/6 mice (6 weeks of age, 25–30 g) 
N-ButyldiethanolamineAladdinB299095Clearing reagent
NicotinamideAladdinN105042Clearing reagent
Pentobarbital NatriumsalzSigma-AldrichP3761
Tail vein fixatorJINUOTAIJNT-FS35Fix the mouse for vail injection
Triton X-100Sigma-AldrichT8787Clearing reagent

References

  1. Hoy, W. E., et al. Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).
  2. Bertram, J. F., Douglas-Denton, R. N., Diouf, B., Hughson, M. D., Hoy, W. E.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 204

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved