A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول إجراء معدلا لعزل بويضات المرحلة الأولى النظيفة بسرعة في الزرد الخالي من الخلايا الحبيبية ، وبالتالي توفير طريقة ملائمة للبحث الخاص بالبويضات.
دراسة تطور البويضة لها آثار كبيرة في علم الأحياء التنموي. تم استخدام الزرد (Danio rerio) على نطاق واسع ككائن نموذجي للتحقيق في عمليات النمو المبكرة من البويضة إلى الجنين. في الزرد ، تحاط البويضات بطبقة واحدة من الخلايا الحبيبية الجسدية. ومع ذلك ، فإن فصل الخلايا الحبيبية عن البويضات يشكل تحديا ، حيث أن تحقيق البويضات النقية أمر بالغ الأهمية للتحليل الدقيق. على الرغم من اقتراح طرق مختلفة لعزل بويضات الزرد في مراحل نمو مختلفة ، إلا أن التقنيات الحالية تقصر في إزالة الخلايا الحبيبية تماما ، مما يحد من دقة تحليل الجينوم الذي يركز فقط على البويضات. في هذه الدراسة ، نجحنا في تطوير عملية سريعة وفعالة لعزل البويضات النقية في المرحلة الأولى في الزرد مع القضاء على تلوث الخلايا الحبيبية. تسهل هذه التقنية التحليل الكيميائي الحيوي والجزيئي ، لا سيما في استكشاف جوانب البنية اللاجينية والجينوم الخاصة بالبويضات. والجدير بالذكر أن الطريقة سهلة الاستخدام ، وتقلل من تلف البويضات ، وتوفر حلا عمليا للبحث والتحليل اللاحق.
الزرد هو من بين أهم النظم النموذجية في علم الأحياء التنموي. في السنوات الأخيرة ، استخدمت العديد من الدراسات الزرد كنموذج لدراسة الأحداث البيولوجية الهامة والعمليات التنظيمية من البويضة إلى الجنين. وتشمل هذه العمليات المعقدة لتطور البويضةونضجها 1 ، ووظائف جينات الأم2 ، وتنظيم التحولات بين الأم والزيجوت3 ، وتحليلات omics الشاملة4.
تلعب الخلايا الحبيبية ، وهي الخلايا الجسدية التي تغلف وتغذي البويضة النامية داخل جريب المبيض 5,6 ، دورا محوريا في هذه العملية ال....
تم التعامل مع جميع أسماك الزرد باتباع إرشادات صارمة لرعاية حددتها هيئات رعاية الوطنية و / أو المحلية ذات الصلة. حصلت صيانة الأسماك ومناولتها على موافقة كل من السلطات المحلية ولجنة أخلاقيات في مستشفى غرب الصين بجامعة سيتشوان (الموافقة رقم 20220422003). تحتوي مبيض الزرد على خليط من البويضات متعددة المراحل ، مع وجود كل مرحلة من مراحل النمو في مبيض الزرد البالغ. ومع ذلك ، تم اختيار الزرد اليافع لهذه الدراسة بسبب هيمنة البويضات في المرحلة المتأخرة (المرحلة الثانية والثالثة) في مبيض الأسماك البالغة ، وهي كبيرة وغير شفافة. في المقابل ، لدى الأحداث مبايض مسطحة وممدودة تتكون بشكل أساسي من بويضات المرحلة الأولى (الشكل 1 ب
يوضح الشكل 1 مورفولوجيا المبيض التي لوحظت في كل من أسماك الزرد البالغة واليافعة، ويعرض البويضات في مراحل النمو المختلفة لتكون بمثابة مرجع. يقدم الشكل 1 أ تمثيلا بيانيا لمورفولوجيا البويضة وحجمها في كل مرحلة من مراحل النمو ، بدءا من مرحلة ?.......
في هذه الدراسة ، طورنا طريقة لعزل بويضات المرحلة الأولى النقية والنظيفة ، باستثناء الخلايا الحبيبية ، لتحليل المصب (خاصة التحليلات الجينومية). بمقارنة هذه الطريقة المعدلة مع الطريقةالمشار إليها 13 ، فإن بويضات المرحلة الأولى التي تم الحصول عليها باستخدام ه?.......
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32170813 و 31871449) وقسم العلوم والتكنولوجيا في سيتشوان (2024NSFSC0651) ، ومشروع 1 · 3 · 5 لتخصصات التميز - صندوق البحوث السريرية ، مستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان (2024HXFH035). يود المؤلفون أن يشكروا Zhao Wang و Yanqiu Gao من مختبر جراحة الأطفال على تربية الزرد المرتبط بهذا العمل. يود المؤلفون أيضا أن يشكروا جميع المراجعين الذين شاركوا في المراجعة ، وكذلك MJEditor (www.mjeditor.com) لتقديم خدمات تحرير اللغة الإنجليزية أثناء إعداد هذه المخطوطة.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Kinger's cell dissociation solution | PlantChemMed | PC-33689 | Kinger's cell dissociation solution can be stored stably at -20 °C after packaging and can be used after thawing at low temperature (4 °C). It can be used directly for dissociating zebrafish ovaries. The optimal temperature is 28.5 °C, for approximately 2-3 hours. The duration can be adjusted according to the specific dissociation conditions, either shortened or extended (https://www.plantchemmed.com/chanpin?productNo=PC-33689). |
Cell strainers (100 μm ) | Falcon | 352360 | |
Fluorescence microscope | Zeiss | Axio Zoom.V16 | |
Forceps | Dumont | #5 | |
Glass capillary needle | / | / | Blunted by burning with lighter |
Hoechst | Yesen | 40732ES03 | |
Low adsorption pipette tips (10 μl ) | Labsellect | T-0010-LR-R-S | |
Leibovitz’s L-15 medium medium (with L-glutamine) | Hyclone | SH30525.01 | |
Ice bucket | / | / | Ice-cold water is used to euthanize zebrafish |
Incubator | WIGGENS | WH-01 | |
Juvenile fish | / | / | 5–6 weeks post-fertilization, standard length [SL] of 10–15 mm |
Plastic dish (35 mm ) | SORFA | 230101 | |
Stereomicroscope | Motic | SMZ-161 | |
Tissue Culture Plate (6-wells) | SORFA | 0110006 | |
Vannas spring scissors | Fine Science Toosl | #15000-00 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved