إنشاء نموذج فأر Xenograft مشتق من المريض مع أنسجة الساركوما العظمية البشرية

Summary

يصف البروتوكول الحالي طريقة إنشاء نموذج فأر xenograft (PDX) مشتق من المريض باستخدام أنسجة الساركوما العظمية البشرية.

Abstract

الساركوما العظمية هي أكثر أورام العظام الخبيثة الأولية شيوعا لدى الأطفال والمراهقين. على الرغم من وضع خطط علاجية جديدة في السنوات الأخيرة ، إلا أن تشخيص مرضى الساركوما العظمية لم يتحسن بشكل ملحوظ. لذلك ، من الأهمية بمكان إنشاء نموذج قوي قبل السريري بدقة عالية. يحافظ نموذج xenograft المشتق من المريض (PDX) بأمانة على الخصائص الجينية واللاجينية وغير المتجانسة للأورام الخبيثة البشرية لكل مريض. وبالتالي ، تعتبر نماذج PDX أصلية في نماذج الجسم الحي لدراسة أنواع السرطان المختلفة في دراسات التحول. تقدم هذه المقالة بروتوكولا شاملا لإنشاء وصيانة نموذج ماوس PDX يعكس بدقة السمات المورفولوجية للساركوما العظمية البشرية. وهذا ينطوي على الزرع الفوري لأنسجة الساركوما العظمية البشرية التي تم استئصالها حديثا في الفئران التي تعاني من نقص المناعة ، تليها عمليات تمرير متتالية. يعمل النموذج الموصوف كمنصة لدراسة نمو الساركوما العظمية ومقاومتها للأدوية والانتكاس وورم خبيث. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يساعد في فحص العلاجات المستهدفة وإنشاء خطط علاج شخصية.

Introduction

الساركوما العظمية هي ورم خبيث عظمي أولي مشتق من خلايا الفص بين العظام وهو أكثر شيوعا عند المراهقين وكذلك الأطفال. غالبا ما يحدث في المشاش للحاجز الطويل ويتميز بورم خبيث مرتفع ، ورم خبيث مبكر ، وسوء التشخيص ^1,2. ورم خبيث في الرئة هو السبب الرئيسي للوفاة في مرضى الساركوما العظمية. معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات للمرضى الذين يعانون من الساركوما العظمية غير النقيلي هو 65٪ -70٪ ³. ومع ذلك ، على مدى السنوات ال 40 الماضية ، لم يتحسن معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات (20 ٪ فقط) من المرضى الذين يعانون من الساركوما العظمية النقيلي بشكل ملحوظ ، و 25....

Protocol

تمت الموافقة على جميع الدراسات التي تنطوي على الأنسجة البشرية من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات المؤسسية لمستشفى لونغهوا ، التابعة لجامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (شنغهاي ، الصين) (2013LC52) ، وتم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من المرضى وفقا لإعلان هلسنكي. رقم IACUC لهذه الدراسة على هو PZSHUTCM221017013. تم تزويد ذكور الفئران البالغة من العمر أربعة أسابيع CAnN.Cg-Foxn1nu / Crl بأسد مزدوج حمية القوارض المشععة GB 14924.3 ومياه معقمة ، وتم إيواؤها في قفص الفئران IVCs مع خمسة فئران لكل قفص ، في ظل ظروف SPF مع دورة ضوء / مظلمة لمدة 12 ساعة. يتضمن جدول المواد معلومات مفصلة حول جميع المواد والكواشف والأدوات المستخدم....

النتائج

يصف هذا البروتوكول الإجراء التفصيلي لإنشاء نموذج فأر PDX ، مع الحفاظ على السمات المورفولوجية للساركوما العظمية البشرية بعد الزرع الفوري لأنسجة الساركوما العظمية البشرية التي تم استئصالها حديثا والممرات المتتالية في الفئران. هنا ، تم إنشاء نموذج فأر PDX بنجاح باستخدام أن?.......

Discussion

يمكن لنماذج PDX محاكاة خصائص السرطانات البشرية والاحتفاظ بمزيد من التشابه مع الورم الرئيسي ، بما في ذلك التغيرات الجينية والجينومية ، والأنسجة ، وعدم التجانس ، وملف تعريف التعبير الجيني^{16،17،18،19}. لذلك ?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% formalin neutral solution	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	G1101-500ml	Fix the tissues
Autoclave	Japan Hiryama Company	HVE-50	Sterilization surgical instruments
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl	Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.	/	Animal
Caliper	Yantai Green Forest Tools Co., Ltd.	034180A	Measure the tumor volume
Dish (60mm)	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	430166, Corning	Sample placment during transplantation
Disinfectant cotton balls	Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.	20230627	Disinfect the skin of mice
Disposable sterile gloves	Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd.	YT21131	Sterile operation
Double lion Irradiated Rodent Diet	Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.	GB 14924.3	Animal feed
Electronic scale	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	1-2000	Weigh the weight of the tumor
Eosin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	E4009-25G	Hematoxylin eosin stain
Hematoxylin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	H3136-25G	Hematoxylin eosin stain
Isoflurane	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	VETEASY	Mouse anesthesia
IVCs mice cage	Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.	HH-MMB-2	Animal barrier
Mark pen	Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.	YYST5	Mark the surgical incision
Olympus Optical microscope	Japanese Olympus Company	BH20	Scan tissue slices
Ophthalmic ointment	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	SOICOEYEGRL	Avoid dry eyes of mice during anesthesia
Ophthalmic scissors	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	Y00030 JZ	Cut the skin
Ophthalmic tweezers	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	BS-ZER-S-100 Biosharp	Hold osteosarcoma tissues during transplantation
Paraffin	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.	80200-0015	Buried osteosarcoma tissue
Paraffin slicing machine	Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd.	RM2235	Osteosarcoma tissue section
physiological saline	Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd.	605-004057	Rinse and temporary storage of osteosarcoma tissue
Scalpels	Surgical Instrument Factory of Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd.	J11010-10# JZ	Separation of osteosarcoma tissue and making surgical incisions
Sterile hood	Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.	ECO0.9	Surgical operation table
sterile surgical drapes	Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.	20160090	Provide sterile surgery area
Straight needle holder	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	J31050 JZ	Suture the wound
Suture line	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Suture needle	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Tissue protective solution	Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD	BC-CFM-03	Maintain the activity of tissue cells
Tube (50 mL)	Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.	BLD-BL2002500	Install formalin fixation solution