Etablierung eines patienteneigenen Xenotransplantat-Mausmodells mit humanem Osteosarkomgewebe

Zusammenfassung

Das vorliegende Protokoll beschreibt das Verfahren zur Etablierung eines patientenabgeleiteten Xenotransplantat-Mausmodells (PDX) unter Verwendung von humanem Osteosarkomgewebe.

Zusammenfassung

Das Osteosarkom ist der häufigste primäre bösartige Knochentumor bei Kindern und Jugendlichen. Trotz der Entwicklung neuer Behandlungspläne in den letzten Jahren hat sich die Prognose für Osteosarkom-Patienten nicht wesentlich verbessert. Daher ist es entscheidend, ein robustes präklinisches Modell mit hoher Wiedergabetreue zu etablieren. Das patienteneigene Xenotransplantat-Modell (PDX) bewahrt die genetischen, epigenetischen und heterogenen Merkmale menschlicher Malignome für jeden Patienten originalgetreu. Folglich gelten PDX-Modelle als authentische in vivo-Modelle für die Untersuchung verschiedener Krebsarten in Transformationsstudien. In diesem Artikel wird ein umfassendes Protokoll für die Erstellung und Pflege eines PDX-Mausmodells vorgestellt, das die morphologischen Merkmale des menschlichen Osteosarkoms genau widerspiegelt. Dabei handelt es sich um die sofortige Transplantation von frisch reseziertem humanem Osteosarkomgewebe in immungeschwächte Mäuse, gefolgt von einer sukzessiven Passage. Das beschriebene Modell dient als Plattform für die Untersuchung des Wachstums, der Arzneimittelresistenz, des Rückfalls und der Metastasierung des Osteosarkoms. Darüber hinaus hilft es beim Screening der Zieltherapeutika und bei der Etablierung personalisierter Behandlungsschemata.

Einleitung

Das Osteosarkom ist eine primäre bösartige Knochenerkrankung, die von Zellen des interossären Lappens abgeleitet wird und sowohl bei Jugendlichen als auch bei Kindern am häufigsten auftritt. Sie tritt häufig in der Epiphyse der langen Diaphyse auf und ist gekennzeichnet durch hohe Malignität, frühe Metastasierung und schlechte Prognose ^1,2. Lungenmetastasen sind die Haupttodesursache bei Osteosarkompatienten. Die 5-Jahres-Überlebensrate von Patienten mit nicht-metastasiertem Osteosarkom beträgt 65 %-70 %³. In den letzten 40 Jahren hat sich die 5-Jahres-....

Protokoll

Alle Studien mit menschlichem Gewebe wurden vom Institutional Ethics Review Committee des Longhua Hospitals genehmigt, das der Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (Shanghai, China) angegliedert ist (2013LC52), und es wurde eine schriftliche Einverständniserklärung der Patienten in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki eingeholt. Die IACUC-Nummer für diese Tierstudie lautet PZSHUTCM221017013. Vier Wochen alte männliche CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl-Mäuse erhielten die Doppellöwen-Bestrahlungsdiät GB 14924.3 und steriles Wasser und wurden in einem IVC-Mäusekäfig mit fünf Mäusen pro Käfig unter Lichtschutzfaktor....

Diskussion

Die PDX-Modelle können die Merkmale menschlicher Krebserkrankungen simulieren und eine größere Ähnlichkeit mit dem Primärtumor beibehalten, einschließlich genetischer und genomischer Veränderungen, Histologie, Heterogenität und Genexpressionsprofil 16,17,18,19. Daher bewahren sie die molekularen Phänotypen und Genotypen von Krebspatienten und bieten in.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% formalin neutral solution	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	G1101-500ml	Fix the tissues
Autoclave	Japan Hiryama Company	HVE-50	Sterilization surgical instruments
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl	Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.	/	Animal
Caliper	Yantai Green Forest Tools Co., Ltd.	034180A	Measure the tumor volume
Dish (60mm)	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	430166, Corning	Sample placment during transplantation
Disinfectant cotton balls	Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.	20230627	Disinfect the skin of mice
Disposable sterile gloves	Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd.	YT21131	Sterile operation
Double lion Irradiated Rodent Diet	Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.	GB 14924.3	Animal feed
Electronic scale	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	1-2000	Weigh the weight of the tumor
Eosin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	E4009-25G	Hematoxylin eosin stain
Hematoxylin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	H3136-25G	Hematoxylin eosin stain
Isoflurane	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	VETEASY	Mouse anesthesia
IVCs mice cage	Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.	HH-MMB-2	Animal barrier
Mark pen	Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.	YYST5	Mark the surgical incision
Olympus Optical microscope	Japanese Olympus Company	BH20	Scan tissue slices
Ophthalmic ointment	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	SOICOEYEGRL	Avoid dry eyes of mice during anesthesia
Ophthalmic scissors	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	Y00030 JZ	Cut the skin
Ophthalmic tweezers	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	BS-ZER-S-100 Biosharp	Hold osteosarcoma tissues during transplantation
Paraffin	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.	80200-0015	Buried osteosarcoma tissue
Paraffin slicing machine	Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd.	RM2235	Osteosarcoma tissue section
physiological saline	Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd.	605-004057	Rinse and temporary storage of osteosarcoma tissue
Scalpels	Surgical Instrument Factory of Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd.	J11010-10# JZ	Separation of osteosarcoma tissue and making surgical incisions
Sterile hood	Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.	ECO0.9	Surgical operation table
sterile surgical drapes	Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.	20160090	Provide sterile surgery area
Straight needle holder	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	J31050 JZ	Suture the wound
Suture line	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Suture needle	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Tissue protective solution	Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD	BC-CFM-03	Maintain the activity of tissue cells
Tube (50 mL)	Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.	BLD-BL2002500	Install formalin fixation solution