הקמת מודל עכבר Xenograft שמקורו במטופל עם רקמות אוסטאוסרקומה אנושיות

Summary

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השיטה לביסוס מודל עכבר קסנוגרפט (PDX) הנגזר ממטופל באמצעות רקמת אוסטאוסרקומה אנושית.

Abstract

אוסטאוסרקומה היא גידול העצם הממאיר הראשוני השכיח ביותר בקרב ילדים ובני נוער. למרות פיתוח תוכניות טיפול חדשות בשנים האחרונות, הפרוגנוזה של חולי אוסטאוסרקומה לא השתפרה באופן משמעותי. לכן, חיוני לבסס מודל פרה-קליני חזק עם נאמנות גבוהה. מודל הקסנוגרפט הנגזר מהמטופל (PDX) משמר נאמנה את המאפיינים הגנטיים, האפיגנטיים וההטרוגניים של ממאירויות אנושיות עבור כל מטופל. כתוצאה מכך, מודלים של PDX נחשבים למודלים אותנטיים in vivo לחקר סוגי סרטן שונים במחקרי טרנספורמציה. מאמר זה מציג פרוטוקול מקיף ליצירה ותחזוקה של מודל עכבר PDX המשקף במדויק את התכונות המורפולוגיות של אוסטאוסרקומה אנושית. זה כרוך בהשתלה מיידית של רקמת אוסטאוסרקומה אנושית שזה עתה נכרתה בעכברים מדוכאי חיסון, ואחריה עוברים רצופים. המודל המתואר משמש פלטפורמה לחקר הגידול, העמידות לתרופות, הישנות וגרורות של אוסטאוסרקומה. בנוסף, הוא מסייע בסינון טיפולי היעד ובהקמת תוכניות טיפול מותאמות אישית.

Introduction

אוסטאוסרקומה היא ממאירות עצם ראשונית שמקורה בתאי אונה אינטרוסוסית והיא שכיחה ביותר בקרב מתבגרים כמו גם ילדים. זה קורה לעתים קרובות באפיפיזה של דיאפיזה ארוכה ומאופיין ממאירות גבוהה, גרורות מוקדמות, פרוגנוזה ירודה ^1,2. גרורות ריאה הן סיבת המוות העיקרית בחולי אוסטאוסרקומה. שיעור ההישרדות ל-5 שנים של חולים עם אוסטאוסרקומה לא גרורתית הוא 65%-70%³. עם זאת, במהלך 40 השנים האחרונות, שיעור ההישרדות של 5 שנים (רק 20%) מהחולים עם אוסטאוסרקומה גרורתית לא השתפר באופן משמעותי, ול -25% מחולי אוסטאוסרקומה יש גרורות בזמן האבחנה⁴. נכון לעכשיו, תרו....

Protocol

כל המחקרים המערבים רקמות אנושיות אושרו על ידי ועדת האתיקה המוסדית של בית החולים Longhua, המסונף לאוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית (שנחאי, סין) (2013LC52), והתקבלה הסכמה מדעת בכתב מהמטופלים בהתאם להצהרת הלסינקי. מספר IACUC עבור מחקר זה בבעלי חיים הוא PZSHUTCM221017013. עכברי CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl זכרים בני ארבעה שבועות קיבלו דיאטת מכרסמים מוקרנת כפולה GB 14924.3 ומים סטריליים, ושוכנו בכלוב עכברי IVC עם חמישה עכברים בכל כלוב, בתנאי SPF עם מחזור אור/חושך של 12 שעות. טבלת החומרים כוללת מידע מפורט על כל החומרים, הריאגנטים והמכשירים המשמשים בפרוטוקול זה.

1. הכנת רקמת אוסטאוסרקו....

תוצאות

פרוטוקול זה מתאר את ההליך המפורט לביסוס מודל עכבר PDX, המשמר את התכונות המורפולוגיות של אוסטאוסרקומה אנושית לאחר השתלה מיידית של רקמת אוסטאוסרקומה אנושית שזה עתה נכרתה ומעברים עוקבים בעכברים. כאן, מודל עכבר PDX הוקם בהצלחה באמצעות רקמת אוסטאוסרקומה אנושית.

.......

Discussion

מודלי PDX יכולים לדמות את המאפיינים של סרטן אנושי ולשמור על דמיון רב יותר עם הגידול הראשוני, כולל שינויים גנטיים וגנומיים, היסטולוגיה, הטרוגניות ופרופיל ביטוי גנים 16,17,18,19. לכן, הם משמרים את הפנוטיפים המ.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% formalin neutral solution	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	G1101-500ml	Fix the tissues
Autoclave	Japan Hiryama Company	HVE-50	Sterilization surgical instruments
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl	Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.	/	Animal
Caliper	Yantai Green Forest Tools Co., Ltd.	034180A	Measure the tumor volume
Dish (60mm)	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	430166, Corning	Sample placment during transplantation
Disinfectant cotton balls	Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.	20230627	Disinfect the skin of mice
Disposable sterile gloves	Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd.	YT21131	Sterile operation
Double lion Irradiated Rodent Diet	Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.	GB 14924.3	Animal feed
Electronic scale	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	1-2000	Weigh the weight of the tumor
Eosin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	E4009-25G	Hematoxylin eosin stain
Hematoxylin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	H3136-25G	Hematoxylin eosin stain
Isoflurane	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	VETEASY	Mouse anesthesia
IVCs mice cage	Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.	HH-MMB-2	Animal barrier
Mark pen	Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.	YYST5	Mark the surgical incision
Olympus Optical microscope	Japanese Olympus Company	BH20	Scan tissue slices
Ophthalmic ointment	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	SOICOEYEGRL	Avoid dry eyes of mice during anesthesia
Ophthalmic scissors	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	Y00030 JZ	Cut the skin
Ophthalmic tweezers	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	BS-ZER-S-100 Biosharp	Hold osteosarcoma tissues during transplantation
Paraffin	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.	80200-0015	Buried osteosarcoma tissue
Paraffin slicing machine	Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd.	RM2235	Osteosarcoma tissue section
physiological saline	Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd.	605-004057	Rinse and temporary storage of osteosarcoma tissue
Scalpels	Surgical Instrument Factory of Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd.	J11010-10# JZ	Separation of osteosarcoma tissue and making surgical incisions
Sterile hood	Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.	ECO0.9	Surgical operation table
sterile surgical drapes	Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.	20160090	Provide sterile surgery area
Straight needle holder	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	J31050 JZ	Suture the wound
Suture line	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Suture needle	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Tissue protective solution	Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD	BC-CFM-03	Maintain the activity of tissue cells
Tube (50 mL)	Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.	BLD-BL2002500	Install formalin fixation solution