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Resumo

O presente protocolo descreve o método para estabelecer um modelo de camundongo xenoenxerto derivado do paciente (PDX) usando tecido de osteossarcoma humano.

Resumo

O osteossarcoma é o tumor ósseo maligno primário mais comum em crianças e adolescentes. Apesar do desenvolvimento de novos planos de tratamento nos últimos anos, o prognóstico para pacientes com osteossarcoma não melhorou significativamente. Portanto, é crucial estabelecer um modelo pré-clínico robusto com alta fidelidade. O modelo de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) preserva fielmente as características genéticas, epigenéticas e heterogêneas das malignidades humanas para cada paciente. Consequentemente, os modelos PDX são considerados modelos in vivo autênticos para estudar vários tipos de câncer em estudos de transformação. Este artigo apresenta um protocolo abrangente para criar e manter um modelo de camundongo PDX que espelha com precisão as características morfológicas do osteossarcoma humano. Isso envolve o transplante imediato de tecido de osteossarcoma humano recém-ressecado em camundongos imunocomprometidos, seguido de passagem sucessiva. O modelo descrito serve como uma plataforma para estudar o crescimento, resistência a drogas, recidiva e metástase do osteossarcoma. Além disso, auxilia na triagem da terapêutica alvo e no estabelecimento de esquemas de tratamento personalizados.

Introdução

O osteossarcoma é uma malignidade óssea primária derivada de células do lobo interósseo e é mais comum em adolescentes e crianças. Ocorre frequentemente na epífise da diáfise longa e é caracterizada por alta malignidade, metástase precoce e mau prognóstico 1,2. A metástase pulmonar é a principal causa de morte em pacientes com osteossarcoma. A taxa de sobrevida em 5 anos de pacientes com osteossarcoma não metastático é de 65% a 70%3. No entanto, nos últimos 40 anos, a taxa de sobrevida em 5 anos (apenas 20%) dos pacientes com osteossarcoma metastático n....

Protocolo

Todos os estudos envolvendo tecidos humanos foram aprovados pelo Comitê de Revisão de Ética Institucional do Hospital Longhua, afiliado à Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (Xangai, China) (2013LC52), e o consentimento informado por escrito foi obtido dos pacientes de acordo com a Declaração de Helsinque. O número IACUC para este estudo em animais é PZSHUTCM221017013. Camundongos CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl machos com quatro semanas de idade receberam dieta para roedores irradiados com leão duplo GB 14924.3 e água estéril, e foram alojados em gaiolas de camundongos IVCs com cinco camundongos por gaiola, sob condiç....

Resultados Representativos

Este protocolo descreve o procedimento detalhado para estabelecer um modelo de camundongo PDX, preservando as características morfológicas do osteossarcoma humano após o transplante imediato de tecido de osteossarcoma humano recém-ressecado e passagens sucessivas em camundongos. Aqui, um modelo de camundongo PDX foi estabelecido com sucesso usando tecido de osteossarcoma humano.

A Figura 3A mostra um camundongo representativo .......

Discussão

Os modelos PDX podem simular as características dos cânceres humanos e manter mais semelhança com o tumor primário, incluindo alterações genéticas e genômicas, histologia, heterogeneidade e perfil de expressão gênica 16,17,18,19. Portanto, eles preservam os fenótipos moleculares e genótipos de pacientes com câncer, fornecendo abordagens inovadoras .......

Divulgações

Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Este trabalho é apoiado por doações de (1) National Nature Science Foundation (81973877 e 82174408); (2) Projeto de construção do Centro de Pesquisa de Alta Prioridade de Xangai (2022ZZ01009); (3) Programa Nacional de P&D da China (2020YFE0201600); (4) Centro de Inovação Colaborativa de Xangai de Transformação Industrial da Preparação da MTC Hospitalar e (5) Projetos de Pesquisa dentro do Orçamento da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (2021LK047).

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Materiais

NameCompanyCatalog NumberComments
10% formalin neutral solutionWuhan Saiweier Biotechnology Co., LtdG1101-500mlFix the tissues
AutoclaveJapan Hiryama CompanyHVE-50Sterilization surgical instruments
CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlShanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd./Animal
CaliperYantai Green Forest Tools Co., Ltd.034180AMeasure the tumor volume
Dish (60mm)Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd430166, CorningSample placment during transplantation
Disinfectant cotton ballsShanghai Honglong Industrial Co., Ltd.20230627Disinfect the skin of mice
Disposable sterile glovesGuilin Hengbao Health Protection Co., Ltd.YT21131Sterile operation
Double lion Irradiated Rodent DietSuzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.GB 14924.3Animal feed
Electronic scaleShanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd1-2000Weigh the weight of the tumor
EosinShanghai Gengyun Biotechnology Co., LtdE4009-25GHematoxylin eosin stain
HematoxylinShanghai Gengyun Biotechnology Co., LtdH3136-25GHematoxylin eosin stain
IsofluraneShenzhen RWD Life Technology Co., LtdVETEASYMouse anesthesia 
IVCs mice cageSuzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.HH-MMB-2Animal barrier
Mark penZebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.YYST5Mark the surgical incision
Olympus Optical microscopeJapanese Olympus CompanyBH20Scan tissue slices
Ophthalmic ointmentShanghai Gengyun Biotechnology Co., LtdSOICOEYEGRLAvoid dry eyes of mice during anesthesia
Ophthalmic scissorsShanghai NianYue Biotechnology Co., LtdY00030 JZCut the skin
Ophthalmic tweezersShanghai NianYue Biotechnology Co., LtdBS-ZER-S-100 BiosharpHold osteosarcoma tissues during transplantation
ParaffinJiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.80200-0015Buried osteosarcoma tissue
Paraffin slicing machineLyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd.RM2235Osteosarcoma tissue section
physiological salineGuangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd.605-004057Rinse and temporary storage of osteosarcoma tissue
ScalpelsSurgical Instrument Factory of Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd.J11010-10# JZSeparation of osteosarcoma tissue and making surgical incisions
Sterile hoodThermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.ECO0.9Surgical operation table
sterile surgical drapesHenan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.20160090Provide sterile surgery area
Straight needle holderShanghai Gengyun Biotechnology Co., LtdJ31050 JZSuture the wound
Suture lineShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LtdF3124Suture the wound
Suture needleShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LtdF3124Suture the wound
Tissue protective solutionNanjing Shenghang Biotechnology Co., LTDBC-CFM-03Maintain the activity of tissue cells
Tube (50 mL)Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.BLD-BL2002500Install formalin fixation solution

Referências

  1. Saraf, A. J., Fenger, J. M., Roberts, R. D. Osteosarcoma: accelerating progress makes for a hopeful future. Front Oncol. 8, 4 (2018).
  2. Ligon, J. A., et al. Pathways of immune exclusion in m....

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