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* Estes autores contribuíram igualmente
O presente protocolo descreve o método para estabelecer um modelo de camundongo xenoenxerto derivado do paciente (PDX) usando tecido de osteossarcoma humano.
O osteossarcoma é o tumor ósseo maligno primário mais comum em crianças e adolescentes. Apesar do desenvolvimento de novos planos de tratamento nos últimos anos, o prognóstico para pacientes com osteossarcoma não melhorou significativamente. Portanto, é crucial estabelecer um modelo pré-clínico robusto com alta fidelidade. O modelo de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) preserva fielmente as características genéticas, epigenéticas e heterogêneas das malignidades humanas para cada paciente. Consequentemente, os modelos PDX são considerados modelos in vivo autênticos para estudar vários tipos de câncer em estudos de transformação. Este artigo apresenta um protocolo abrangente para criar e manter um modelo de camundongo PDX que espelha com precisão as características morfológicas do osteossarcoma humano. Isso envolve o transplante imediato de tecido de osteossarcoma humano recém-ressecado em camundongos imunocomprometidos, seguido de passagem sucessiva. O modelo descrito serve como uma plataforma para estudar o crescimento, resistência a drogas, recidiva e metástase do osteossarcoma. Além disso, auxilia na triagem da terapêutica alvo e no estabelecimento de esquemas de tratamento personalizados.
O osteossarcoma é uma malignidade óssea primária derivada de células do lobo interósseo e é mais comum em adolescentes e crianças. Ocorre frequentemente na epífise da diáfise longa e é caracterizada por alta malignidade, metástase precoce e mau prognóstico 1,2. A metástase pulmonar é a principal causa de morte em pacientes com osteossarcoma. A taxa de sobrevida em 5 anos de pacientes com osteossarcoma não metastático é de 65% a 70%3. No entanto, nos últimos 40 anos, a taxa de sobrevida em 5 anos (apenas 20%) dos pacientes com osteossarcoma metastático n....
Todos os estudos envolvendo tecidos humanos foram aprovados pelo Comitê de Revisão de Ética Institucional do Hospital Longhua, afiliado à Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (Xangai, China) (2013LC52), e o consentimento informado por escrito foi obtido dos pacientes de acordo com a Declaração de Helsinque. O número IACUC para este estudo em animais é PZSHUTCM221017013. Camundongos CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl machos com quatro semanas de idade receberam dieta para roedores irradiados com leão duplo GB 14924.3 e água estéril, e foram alojados em gaiolas de camundongos IVCs com cinco camundongos por gaiola, sob condiç....
Este protocolo descreve o procedimento detalhado para estabelecer um modelo de camundongo PDX, preservando as características morfológicas do osteossarcoma humano após o transplante imediato de tecido de osteossarcoma humano recém-ressecado e passagens sucessivas em camundongos. Aqui, um modelo de camundongo PDX foi estabelecido com sucesso usando tecido de osteossarcoma humano.
A Figura 3A mostra um camundongo representativo .......
Os modelos PDX podem simular as características dos cânceres humanos e manter mais semelhança com o tumor primário, incluindo alterações genéticas e genômicas, histologia, heterogeneidade e perfil de expressão gênica 16,17,18,19. Portanto, eles preservam os fenótipos moleculares e genótipos de pacientes com câncer, fornecendo abordagens inovadoras .......
Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.
Este trabalho é apoiado por doações de (1) National Nature Science Foundation (81973877 e 82174408); (2) Projeto de construção do Centro de Pesquisa de Alta Prioridade de Xangai (2022ZZ01009); (3) Programa Nacional de P&D da China (2020YFE0201600); (4) Centro de Inovação Colaborativa de Xangai de Transformação Industrial da Preparação da MTC Hospitalar e (5) Projetos de Pesquisa dentro do Orçamento da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (2021LK047).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10% formalin neutral solution | Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd | G1101-500ml | Fix the tissues |
Autoclave | Japan Hiryama Company | HVE-50 | Sterilization surgical instruments |
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | / | Animal |
Caliper | Yantai Green Forest Tools Co., Ltd. | 034180A | Measure the tumor volume |
Dish (60mm) | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | 430166, Corning | Sample placment during transplantation |
Disinfectant cotton balls | Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd. | 20230627 | Disinfect the skin of mice |
Disposable sterile gloves | Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd. | YT21131 | Sterile operation |
Double lion Irradiated Rodent Diet | Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd. | GB 14924.3 | Animal feed |
Electronic scale | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | 1-2000 | Weigh the weight of the tumor |
Eosin | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | E4009-25G | Hematoxylin eosin stain |
Hematoxylin | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | H3136-25G | Hematoxylin eosin stain |
Isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Mouse anesthesia |
IVCs mice cage | Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd. | HH-MMB-2 | Animal barrier |
Mark pen | Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd. | YYST5 | Mark the surgical incision |
Olympus Optical microscope | Japanese Olympus Company | BH20 | Scan tissue slices |
Ophthalmic ointment | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | SOICOEYEGRL | Avoid dry eyes of mice during anesthesia |
Ophthalmic scissors | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | Y00030 JZ | Cut the skin |
Ophthalmic tweezers | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | BS-ZER-S-100 Biosharp | Hold osteosarcoma tissues during transplantation |
Paraffin | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd. | 80200-0015 | Buried osteosarcoma tissue |
Paraffin slicing machine | Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd. | RM2235 | Osteosarcoma tissue section |
physiological saline | Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd. | 605-004057 | Rinse and temporary storage of osteosarcoma tissue |
Scalpels | Surgical Instrument Factory of Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd. | J11010-10# JZ | Separation of osteosarcoma tissue and making surgical incisions |
Sterile hood | Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd. | ECO0.9 | Surgical operation table |
sterile surgical drapes | Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd. | 20160090 | Provide sterile surgery area |
Straight needle holder | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | J31050 JZ | Suture the wound |
Suture line | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | F3124 | Suture the wound |
Suture needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | F3124 | Suture the wound |
Tissue protective solution | Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD | BC-CFM-03 | Maintain the activity of tissue cells |
Tube (50 mL) | Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd. | BLD-BL2002500 | Install formalin fixation solution |
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