Istituzione di un modello murino di xenotrapianto derivato da paziente con tessuti di osteosarcoma umano

Riepilogo

Il presente protocollo descrive il metodo per stabilire un modello murino di xenotrapianto derivato da paziente (PDX) utilizzando tessuto di osteosarcoma umano.

Abstract

L'osteosarcoma è il tumore osseo maligno primario più comune nei bambini e negli adolescenti. Nonostante lo sviluppo di nuovi piani di trattamento negli ultimi anni, la prognosi per i pazienti con osteosarcoma non è migliorata in modo significativo. Pertanto, è fondamentale stabilire un modello preclinico robusto con un'elevata fedeltà. Il modello di xenotrapianto derivato dal paziente (PDX) preserva fedelmente le caratteristiche genetiche, epigenetiche ed eterogenee delle neoplasie maligne umane per ciascun paziente. Di conseguenza, i modelli PDX sono considerati autentici modelli in vivo per lo studio di vari tumori negli studi di trasformazione. Questo articolo presenta un protocollo completo per la creazione e il mantenimento di un modello murino PDX che rispecchia accuratamente le caratteristiche morfologiche dell'osteosarcoma umano. Ciò comporta il trapianto immediato di tessuto di osteosarcoma umano appena resecato in topi immunocompromessi, seguito da un successivo passaggio. Il modello descritto funge da piattaforma per studiare la crescita, la resistenza ai farmaci, la recidiva e le metastasi dell'osteosarcoma. Inoltre, aiuta a selezionare le terapie target e a stabilire schemi di trattamento personalizzati.

Introduzione

L'osteosarcoma è un tumore maligno osseo primario derivato dalle cellule del lobo interosseo ed è più comune negli adolescenti e nei bambini. Si verifica spesso nell'epifisi della diafisi lunga ed è caratterizzata da elevata malignità, metastasi precoci e prognosi infausta ^1,2. Le metastasi polmonari sono la principale causa di morte nei pazienti con osteosarcoma. Il tasso di sopravvivenza a 5 anni dei pazienti con osteosarcoma non metastatico è del 65%-70%³. Tuttavia, negli ultimi 40 anni, il tasso di sopravvivenza a 5 anni (solo il 20%) dei pazienti c....

Protocollo

Tutti gli studi che coinvolgono tessuti umani sono stati approvati dal Comitato di revisione etica istituzionale dell'ospedale Longhua, affiliato all'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Shanghai (Shanghai, Cina) (2013LC52), e il consenso informato scritto è stato ottenuto dai pazienti in conformità con la Dichiarazione di Helsinki. Il numero IACUC per questo studio sugli animali è PZSHUTCM221017013. Ai topi maschi di quattro settimane di CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl è stata fornita una dieta per roditori irradiata a doppio leone GB 14924.3 e acqua sterile, e sono stati alloggiati in una gabbia per topi IVC con cinque topi pe....

Discussione

I modelli PDX possono simulare le caratteristiche dei tumori umani e mantenere una maggiore somiglianza con il tumore primario, comprese le alterazioni genetiche e genomiche, l'istologia, l'eterogeneità e il profilo di espressione genica 16,17,18,19. Pertanto, preservano i fenotipi molecolari e i genotipi dei pazienti oncologici, fornendo approcci innovativi p.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% formalin neutral solution	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	G1101-500ml	Fix the tissues
Autoclave	Japan Hiryama Company	HVE-50	Sterilization surgical instruments
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl	Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.	/	Animal
Caliper	Yantai Green Forest Tools Co., Ltd.	034180A	Measure the tumor volume
Dish (60mm)	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	430166, Corning	Sample placment during transplantation
Disinfectant cotton balls	Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.	20230627	Disinfect the skin of mice
Disposable sterile gloves	Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd.	YT21131	Sterile operation
Double lion Irradiated Rodent Diet	Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.	GB 14924.3	Animal feed
Electronic scale	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	1-2000	Weigh the weight of the tumor
Eosin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	E4009-25G	Hematoxylin eosin stain
Hematoxylin	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	H3136-25G	Hematoxylin eosin stain
Isoflurane	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd	VETEASY	Mouse anesthesia
IVCs mice cage	Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.	HH-MMB-2	Animal barrier
Mark pen	Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd.	YYST5	Mark the surgical incision
Olympus Optical microscope	Japanese Olympus Company	BH20	Scan tissue slices
Ophthalmic ointment	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	SOICOEYEGRL	Avoid dry eyes of mice during anesthesia
Ophthalmic scissors	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	Y00030 JZ	Cut the skin
Ophthalmic tweezers	Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd	BS-ZER-S-100 Biosharp	Hold osteosarcoma tissues during transplantation
Paraffin	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.	80200-0015	Buried osteosarcoma tissue
Paraffin slicing machine	Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd.	RM2235	Osteosarcoma tissue section
physiological saline	Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd.	605-004057	Rinse and temporary storage of osteosarcoma tissue
Scalpels	Surgical Instrument Factory of Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd.	J11010-10# JZ	Separation of osteosarcoma tissue and making surgical incisions
Sterile hood	Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd.	ECO0.9	Surgical operation table
sterile surgical drapes	Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.	20160090	Provide sterile surgery area
Straight needle holder	Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd	J31050 JZ	Suture the wound
Suture line	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Suture needle	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd	F3124	Suture the wound
Tissue protective solution	Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD	BC-CFM-03	Maintain the activity of tissue cells
Tube (50 mL)	Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.	BLD-BL2002500	Install formalin fixation solution