تحريض المستعمرات الصغيرة في المبيضات عن طريق العلاج الضوئي الديناميكي بوساطة روز البنغال

Summary

لم يتم استكشاف أهمية المستعمرات الصغيرة في المبيضات spp. مقاومة الأدوية بشكل كامل. يقدم العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) استراتيجية واعدة ضد الالتهابات الفطرية المقاومة للأدوية. توضح هذه الدراسة أن aPDT بوساطة البنغال الوردية يعطل بشكل فعال المبيضات glabrata ويحفز المستعمرات الصغيرة ، مما يقدم إجراء فريدا.

Abstract

في مواجهة معدل وفيات بنسبة 40٪ في مرضى المبيضات ، لا تزال المبيضات المقاومة للأدوية ومحورها الصغير تمثل تحديا علاجيا كبيرا. يستهدف العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) هياكل فطرية متعددة ، على عكس المضادات الحيوية / مضادات الفطريات ، مما قد يحبط المقاومة. تعتمد الطرق التقليدية لتحفيز المستعمرات الصغيرة على بروميد الإيثيديوم أو الفلوكونازول ، مما قد يؤثر على قابلية الدواء واستجابات الإجهاد. بحثت هذه الدراسة في تطبيق الضوء الأخضر (ذروة 520 نانومتر) وحساس ضوئي لورد البنغال (RB) لمكافحة عزل المبيضات غلابراتا المقاوم للأدوية. كشفت النتائج أن علاج aPDT يثبط بشكل كبير نمو الخلايا (انخفاض بنسبة ≥ 99.9٪) ويحفز بشكل فعال تكوين مستعمرة صغيرة ، كما يتضح من انخفاض حجم وفقدان تلطيخ مؤشر الأكسدة والاختزال في الميتوكوندريا. تقدم هذه الدراسة دليلا أوليا على أن aPDT يمكن أن يحفز المستعمرات الصغيرة في سلالة C. glabrata المقاومة للأدوية المتعددة في المختبر ، مما يوفر نهجا تحويليا محتملا لمكافحة الالتهابات الفطرية المقاومة.

Introduction

تشكل الالتهابات الفطرية ، خاصة تلك التي تسببها المبيضات البيض والمبيضات جلابراتا المقاومة للأدوية بشكل متزايد ، تهديدا عالميا خطيرا¹. يمكن أن تكون هذه العدوى مميتة ، خاصة بالنسبة للمرضى في المستشفى وأولئك الذين يعانون من ضعف في جهاز المناعة. يهدد ارتفاع المقاومة المضادة للفطريات السيطرة على داء المبيضات الغازي ، وهو عدوى فطرية شديدة مع ارتفاع معدل الوفيات ، وخاصة من المبيضات البيض². تعيق السلالات المقاومة العلاج الفعال ، مما قد يزيد من التعقيد ومعدلات الوفيات. في مقاطعة ألاميدا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، أصبحت C. glabrata أكثر الأنواع الغازية انتشارا^3....

Protocol

1. زراعة C. glabrata

ملاحظة: يتم استخدام C. glabrata المقاوم للأدوية المتعددة (C2-1000907) المقاوم لمعظم العوامل المضادة للفطريات ، بما في ذلك الفلوكونازول ، في التجارب. قد تحتاج الظروف التجريبية إلى التكيف مع سلالة معينة ، حيث قد توجد اختلافات بين سلالات مختلفة. استخدمت جميع التجارب المبيضات اللوغاريتمية التي نمت عند 25 درجة مئوية (تحاكي العدوى الطبيعية) من أجل الاتساق. إن افتقار C. glabrata إلى الخيوط يبسط القياس الكمي مقارنة ب C. albicans ، التي تشكل خيوط عند 37 درجة مئوية¹⁰.

1. لتحضير استزراع لوغاريتمي الطور ل C. glabrata ، اختر مستعمرة واحدة من....

النتائج

تم تقديم البيانات كمتوسط مع ± الخطأ المعياري وتم الحصول عليها من ثلاث تجارب مستقلة ، مع ثلاث نسخ على الأقل في كل مجموعة. تم رسم البيانات التجريبية ، بما في ذلك عدد المستعمرات ، وقياسات OD₆₀₀ ، ونتائج تلطيخ TTC ، وتحليلها إحصائيا باستخدام الرسوم البيانية والبرامج الإحصائية (انظر جدول .......

Discussion

تكشف هذه الدراسة النقاب عن PDT كأول طريقة تم الإبلاغ عنها للحث على تكوين مستعمرة صغيرة في المبيضات ، متجاوزة التأثيرات الثابتة لبروميد الإيثيديوم والفلوكونازول. تتطلب هذه الملاحظة الجديدة مزيدا من الاستكشاف لكشف آثارها على كل من القضاء على الفطريات عن طريق تقليل الفوعة وظهور آليات المقاو.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 μm filter	Merck, Taipei, Taiwan	Millex, SLGVR33RS
1.5 mL microfuge tube	Neptune, San Diego, USA	#3745
20% Triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Sigma-Aldrich, MO, USA	T8877
5 mL polypropylene round bottom tube	Corning, AZ, USA	352059
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap	Corning, AZ, USA	Falcon, #352235
96-well plate	Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan	#16196
Agar	BRS, Tainan, Taiwan	AG012
Blank disk	Advantec, Tokyo, Japan	49005040
Centrifuge	Eppendorf, UK	5415R
Ethidium bromide solution	Sigma-Aldrich, MO, USA	E1510
Fluconazole, 2 mg/mL	Pfizer, NY, USA	BC18790248
GraphPad Prism	GraphPad Software	Version 7.0
Green light emitting diode (LED) strip	Nanyi electronics Co.,Ltd, Tainan, Taiwan	5050	Excitation wave: 500~550 nm
Low Temperature. shake Incubators	Yihder, Taipei, Taiwan	LM-570D (R)
Mouth care cotton swabs	Good Verita Enterprise, Taipei, Taiwan	161357
Muller Hinton II agar	BD biosciences, California, USA	211438
Multimode microplate reader	Molecular Devices	SpectraMax i3x
OD600 spectrophotometer	Biochrom, London, UK	Ultrospec 10
Rose Bengal	Sigma-Aldrich, USA	330000	stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube	Sunmei, Tainan, Taiwan	AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium	HIMEDIA, India	M1363