Induction de petites colonies chez Candida glabrate via la thérapie photodynamique médiée par Rose Bengal

Résumé

L’importance des petites colonies dans la résistance aux médicaments de Candida spp. n’a pas été pleinement explorée. La thérapie photodynamique antimicrobienne (aPDT) offre une stratégie prometteuse contre les infections fongiques résistantes aux médicaments. Cette étude démontre que l’aPDT médiée par le bengale de la rose désactive efficacement Candida glabrata et induit de petites colonies, présentant une procédure unique.

Résumé

Face à un taux de mortalité de 40 % chez les patients atteints de candidémie, le Candida résistant aux médicaments et ses petits mutants restent un défi thérapeutique majeur. La thérapie photodynamique antimicrobienne (aPDT) cible plusieurs structures fongiques, contrairement aux antibiotiques/antifongiques, ce qui peut contrecarrer la résistance. Les méthodes traditionnelles pour induire de petites colonies reposent sur le bromure d’éthidium ou le fluconazole, qui peuvent influencer la sensibilité aux médicaments et les réponses au stress. Cette étude a porté sur l’application d’un photosensibilisant à la lumière verte (pic de 520 nm) et au rose-bengale (RB) pour lutter contre un isolat de Candida glabrata résistant aux médicaments. Les résultats ont révélé que le traitement aPDT inhibait significativement la croissance cellulaire (réduction de ≥99,9 %) et induisait efficacement la formation de petites colonies, comme en témoigne la réduction de la taille et la perte de la coloration indicatrice redox mitochondriale. Cette étude fournit des preuves initiales que l’aPDT peut induire de petites colonies dans une souche de C. glabrata multirésistante in vitro, offrant une approche potentiellement transformatrice pour lutter contre les infections fongiques résistantes.

Introduction

Les infections fongiques, en particulier celles causées par Candida albicans et Candida glabrata, de plus en plus résistant aux médicaments, constituent une grave menace mondiale¹. Ces infections peuvent être mortelles, en particulier pour les patients hospitalisés et ceux dont le système immunitaire est affaibli. L’augmentation de la résistance aux antifongiques menace le contrôle de la candidose invasive, une infection fongique grave avec une mortalité élevée, en particulier de Candida albicans². Les souches résistantes entravent l’efficacité du traitement, ce qui peut augmenter à la fois la ....

Protocole

1. Élevage de C. glabrata

REMARQUE : Un C. glabrata multirésistant (C2-1000907) résistant à la plupart des agents antifongiques, y compris le fluconazole, est utilisé pour les expériences. Il peut être nécessaire d’adapter les conditions expérimentales à la souche spécifique, car il peut exister des variations entre les différentes souches. Toutes les expériences ont utilisé du Candida en phase logarithmique cultivé à 25 °C (imitant l’infection naturelle) pour plus de cohérence. L’absence d’hyphes de C. glabrata simplifie la quantification par rapport à C. albicans, qui forme des hyphes à 3....

Discussion

Cette étude révèle que la PDT est la première méthode rapportée pour induire la formation de petites colonies chez Candida, surpassant les effets établis du bromure d’éthidium et du fluconazole. Cette nouvelle observation nécessite une exploration plus approfondie pour démêler ses implications à la fois pour l’éradication fongique en diminuant la virulence et l’émergence de mécanismes de résistance.

La PDT médiée par RB inhibe efficacement la croissance de C. glabra.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 μm filter	Merck, Taipei, Taiwan	Millex, SLGVR33RS
1.5 mL microfuge tube	Neptune, San Diego, USA	#3745
20% Triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Sigma-Aldrich, MO, USA	T8877
5 mL polypropylene round bottom tube	Corning, AZ, USA	352059
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap	Corning, AZ, USA	Falcon, #352235
96-well plate	Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan	#16196
Agar	BRS, Tainan, Taiwan	AG012
Blank disk	Advantec, Tokyo, Japan	49005040
Centrifuge	Eppendorf, UK	5415R
Ethidium bromide solution	Sigma-Aldrich, MO, USA	E1510
Fluconazole, 2 mg/mL	Pfizer, NY, USA	BC18790248
GraphPad Prism	GraphPad Software	Version 7.0
Green light emitting diode (LED) strip	Nanyi electronics Co.,Ltd, Tainan, Taiwan	5050	Excitation wave: 500~550 nm
Low Temperature. shake Incubators	Yihder, Taipei, Taiwan	LM-570D (R)
Mouth care cotton swabs	Good Verita Enterprise, Taipei, Taiwan	161357
Muller Hinton II agar	BD biosciences, California, USA	211438
Multimode microplate reader	Molecular Devices	SpectraMax i3x
OD600 spectrophotometer	Biochrom, London, UK	Ultrospec 10
Rose Bengal	Sigma-Aldrich, USA	330000	stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube	Sunmei, Tainan, Taiwan	AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium	HIMEDIA, India	M1363