الكشف السريع عن مسببات الأمراض البكتيرية التي تسبب التهابات الجهاز التنفسي السفلي عن طريق التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة القائمة على رقائق الموائع الدقيقة

Summary

يمكن أن تسبب مسببات الأمراض البكتيرية المختلفة التهابات الجهاز التنفسي وتؤدي إلى مشاكل صحية خطيرة إذا لم يتم اكتشافها بدقة وعلاجها على الفور. يوفر الكشف السريع والدقيق عن هذه العوامل الممرضة عن طريق التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة إدارة فعالة ومكافحة التهابات الجهاز التنفسي في البيئات السريرية.

Abstract

تعد التهابات الجهاز التنفسي (RTIs) من بين أكثر المشكلات شيوعا في البيئات السريرية. سيوفر التحديد السريع والدقيق لمسببات الأمراض البكتيرية إرشادات عملية لإدارة وعلاج RTIs. تصف هذه الدراسة طريقة للكشف السريع عن مسببات الأمراض البكتيرية التي تسبب التهابات الجهاز التنفسي عن طريق التضخيم متساوي الحرارة بوساطة حلقة متعددة القنوات (LAMP). LAMP هي أداة تشخيصية حساسة ومحددة تكتشف بسرعة الأحماض النووية البكتيرية بدقة وموثوقية عالية. توفر الطريقة المقترحة ميزة كبيرة على طرق زراعة البكتيريا التقليدية ، والتي تستغرق وقتا طويلا وغالبا ما تتطلب حساسية أكبر للكشف عن المستويات المنخفضة من الأحماض النووية البكتيرية. تقدم هذه المقالة نتائج تمثيلية لعدوى K. pneumoniae والعدوى المشتركة المتعددة باستخدام LAMP للكشف عن العينات (البلغم ، سائل غسل الشعب الهوائية ، وسائل غسل السنخية) من الجهاز التنفسي السفلي. باختصار ، توفر طريقة LAMP متعددة القنوات وسيلة سريعة وفعالة لتحديد مسببات الأمراض البكتيرية المفردة والمتعددة في العينات السريرية ، والتي يمكن أن تساعد في منع انتشار مسببات الأمراض البكتيرية والمساعدة في العلاج المناسب ل RTIs.

Introduction

تساهم التهابات الجهاز التنفسي (RTIs) التي تسببها مسببات الأمراض البكتيرية في المقام الأول في المراضة والوفيات في جميع أنحاء العالم¹. يتم تعريفه على أنه أي أعراض تنفسية علوية أو سفلية مصحوبة بحمى تستمر 2-3 أيام. في حين أن عدوى الجهاز التنفسي العلوي أكثر شيوعا من عدوى الجهاز التنفسي السفلي ، فإن التهابات الجهاز التنفسي المزمنة والمتكررة هي أيضا حالات سريرية شائعة ، مما يشكل مخاطر كبيرة على الأفراد ويضع عبئا كبيرا على أنظمة الرعاية الصحية². تشمل مسببات الأمراض البكتيرية الشائعة ل RTIs العقدية الرئوية³ ، المستدمية النزلية⁴ ، المكورات العنقودية الذهبية....

Protocol

تم تقييم جميع عينات هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات في مستشفى مقاطعة قوانغدونغ الشعبي (رقم الموافقة: KY2023-1114-01). وقع جميع المشاركين على موافقة خطية مستنيرة قبل التجارب. يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة للدراسة في جدول المواد. الاختصارات المستخدمة في البروتوكول مدرجة في الجدول التكميلي 1.

1. جمع العينات السريرية من الجهاز التنفسي السفلي

1. جمع البلغم
   1. نظف تجويف الفم والأسنان بالماء النظيف ، مع ضمان إزالة طقم الأسنان إن أمكن. السعال بقوة لطرد البلغم التنفسي العميق في وعاء البلغم (الحد الأدنى 0.6 مل).
   2. تجنب التلوث باللعاب أو إفرازات الأنف....

النتائج

تستخدم هذه التجربة تقنية التضخيم متساوي الحرارة ، وإجراء تفاعلات على شريحة قرص الموائع الدقيقة. يحدث التفاعل على محلل الحمض النووي لرقاقة الموائع الدقيقة ، باستخدام طريقة إدخال صبغة مضانة. يتم إجراء التفاعل متساوي الحرارة عند درجة حرارة ثابتة تبلغ 65 درجة مئوية ، ويتم إجراء تحليل مضان في ?.......

Discussion

تنتشر التهابات الجهاز التنفسي في المستشفيات ، مما يفرض عواقب وخيمة على المرضى ويتصاعد معدلات الوفيات¹⁶. إن تحديد مسببات الأمراض المحتملة في الوقت المناسب وبدقة تليها المضادات الحيوية الفعالة هو مفتاح العلاج الناجح وتحسين التشخيص ، لا سيما بالنظر إلى القيود المتأصلة في طرق ا?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bath Incubator(MK2000-2)	ALLSHENG		Provide a constant temperature environment
Bronchial lavage fluid collector head	TIANPINGHUACHANG	SEDA 20172081375	Collecting bronchoalveolar lavage fluid
Fiberoptic bronchoscope	OLYMPUS	SEDA 20153062703	A flexible bronchoscope equipped with a fiberoptic light source and camera, to visually examine the airways and structures within the lungs. Assist in collecting bronchoalveolar lavage
HR1500-B2	Haier	SEDA 20183541642	Biosafety cabinet
NAOH	MACKLIN	S817977	Liquefy viscous lower respiratory tract sample
Nucleic acid detection kit for respiratory tract pathogens	Capitalbio Technology	SEDA 20173401346	Testing for bacteria infection
Nucleic acid extraction reagent	Capitalbio Technology	SEDA 20160034	For DNA extraction
RTisochip-W	Capitalbio Technology	SEDA 20193220539	Loop-mediated Isothermal Amplification
THERMO ST16R	Thermo Fisher Scientific	SEDA 20180585	Centrifuge the residual liquid off the wall of the tube.
Vortex mixer VM-5005	JOANLAB		For mixing reagent