A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يحدد هذا البروتوكول طرقا لاستخراج وقياس الاستجابات للفرمون الجنسي المتطاير في C. ايليجانس، مما يوفر أدوات لدراسة الاتصال الكيميائي ومسار الملاحة.
يعد الاتصال الكيميائي أمرا حيويا في صحة الكائنات الحية والتكاثر والرفاهية العامة. يظل فهم المسارات الجزيئية والعمليات العصبية والحسابات التي تحكم هذه الإشارات مجالا نشطا للبحث. توفر الديدان الخيطية Caenorhabditis elegans نموذجا قويا لدراسة هذه العمليات لأنها تنتج فرمون جنسي متطاير. يتم تصنيع هذا الفرمون بواسطة الإناث البكر أو الخنثى المستنفدة للحيوانات المنوية ويعمل كعامل جذب للذكور.
يصف هذا البروتوكول طريقة مفصلة لعزل الفرمون الجنسي المتطاير عن عدة C. ايليجانس سلالات (WT سلالة N2 و daf-22 و fog-2) و C. remanei. نقدم أيضا بروتوكولا لتحديد استجابة الانجذاب الكيميائي للذكور للفرمون الجنسي المتطاير. يستخدم تحليلنا قياسات مثل مؤشر الانجذاب الكيميائي (CI) ، ووقت الوصول (ATTA) ، ومخطط المسار لمقارنة استجابات الذكور في ظل ظروف مختلفة بدقة. تسمح هذه الطريقة بإجراء مقارنات قوية بين الذكور من خلفيات وراثية مختلفة أو مراحل النمو. علاوة على ذلك ، فإن الإعداد التجريبي الموضح هنا قابل للتكيف مع التحقيق في مواد كيميائية أخرى للجذب الكيميائي.
يعد التفاعل بين الاتصال الكيميائي والنجاح الإنجابي مبدأ أساسيا في جميع أنحاء مملكة1،2،3،4،5،6،7،8،9،10. تؤدي الفيرومونات الجنسية إلى مجموعة واسعة من السلوكيات ثنائية الشكل جنسيا الضرورية لتحديد مكان الأصدقاء ، وتنسيق الخطوات المتبعة في العثور على شريك وجذبه ، وفي النهاية تعزيز تكاثر الأنواع
1. استخراج الفرمون الجنسي الخام من الإناث والخنثى
تحليل المسار لإدراك الفرمون الجنسي المتطاير سلالة معيبة في مقايسة الجذب الكيميائي
يميز اختبار الجذب الكيميائي هذا بشكل موثوق بين السلالات البرية والمتحولة من C. ايليجانس في استجابتها للفيرومونات الجنسية المتطايرة. تظهر التجارب الناجحة معه - 5 ذكور ?.......
يوفر هذا البروتوكول منهجية قوية لاستخراج الفيرومونات الجنسية المتطايرة من C. ايليجانس، إلى جانب إنشاء مقايسة قوية للجذب الكيميائي لقياس استجابات الجذب الكيميائي للذكور. يمكن العثور على معلومات إضافية في دليل مستخدم WormLab (انظر جدول المواد) ؛ للحصول على رمز .......
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
نحن ممتنون للدكتور Tingtao Zhou لتصميم وكتابة الكود لتصورات المسار المستخدمة في تحليلنا. تم دعم هذا العمل من خلال التمويل: R01 NS113119 (PWS) ، وزمالة Chen لمرحلة ما بعد الدكتوراه ، ومعهد Tianqiao و Chrissy Chen لعلم الأعصاب.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10 cm Petri dishes | Falcon | 25373-100 | Falcon bacteriological Petri dish 100 x 15 mm |
6 cm Petri dishes | Falcon | 25373-085 | Falcon bacteriological Petri dish 60 x 15 mm |
C. remanei (EM464) | CGC | ||
Centrifuge | Eppendorf | centrifuge 5418 | Any brand should work. |
Chemoattraction assay plates | Homemade solution | N/A | 1.5% agar, 25 mM NaCl, 1.5 mM Tris-base, and 3.5 mM Tris-Cl |
Cholesterol | Alfa Aesar | 57-88-5 | |
Dissecting Microscope | Leica | LeicaMZ75 | Any brand should work. |
E. Coli OP50 | CGC | ||
Ethanol | Koptec | 64-17-5 | |
fog-2(q71) (JK574) | CGC | ||
him-5(e1490)(CB4088) | CGC | ||
Household bleach | Clorox Germicidal bleach concentrated | Bleach | |
M9 buffer | Homemade solution | N/A | 3 g KH2PO4, 11.3 g Na2HPO4.7H2O, 5 g NaCl, H2O to 1 L. Sterilize by autoclaving. Add 1 mL 1 M MgSO4 after cool down to room temperature. |
Magnesium Sulfate, Anhydrous, Powder | Macron | M1063-500GM-EA | |
Microwave | TOSHIBA | N/A | Any brand should work. |
N2 | CGC | ||
NaOH | Sigma-aldrich | S318-3 | 1 M |
NGM plates solution | Homemade solution | N/A | 2.5 g Peptone, 18 g agar, 3 g NaCl, H2O to 1 L.Sterilize by autoclaving. Once the autoclave is done (2 h), wait until the temperature of the medium drops to 65 °C. Put on a hotplate at 65 °C and stir. Then add the following, waiting 5 min between each to avoid crystallization: 1 mL CaCl2 (1 M), 1 mL MgSO4 (1 M), 25 mL K3PO4 (1 M, pH=6), 1 mL Cholesterol ( 5 mg/mL in ethanol). |
Parafilm | Bemis | 13-374-10 | Bemis Parafilm M Laboratory Wrapping Film |
Peptone | VWR | 97063-324 | |
Pipet- aid | Drummond Scientific | 4-000-100 | Any brand should work. |
Plastic paper | Octago | Waterproof Screen Printing Inkjet Transparency Film | https://www.amazon.com/Octago-Waterproof-Transparency-Printing-Printers/dp/B08HJQWFGD |
Potassium chloride | Sigma-aldrich | SLBP2366V | |
Potassium phosphate | Spectrum | 7778-77-0 | |
Pipette | Eppendorf | SKU: EPPR4331; MFG#: 2231300006 | 20 - 200 µL, 100 - 1000 µL, any brand should work. |
Rotator | Labnet | SKU: LI-H5500 | Labnet H5500 Mini LabRoller with Dual Direction Rotator. Any brand should work. |
Sodium chloride | VWR | 7647-14-5 | |
sodium phosphate dibasic | Sigma-aldrich | SLCG3888 | |
Tris-base | Sigma-aldrich | 77-86-1 | |
Tris-Cl | Roche | 1185-53-1 | |
Tryptone | VWR | 97063-390 | |
Vortex | Scientific industries | Vortex-Genie 2 | Any brand should work. |
WormLab system | MBF Bioscience | N/A | https://www.mbfbioscience.com/help/WormLab/Content/home.htm; https://www.mbfbioscience.com/products/wormlab/ |
Wormpicker | Homemade | N/A | made with platinum and glass pipet tips |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved