Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Этот протокол устанавливает методы извлечения и количественной оценки ответов на летучий половой феромон у C. elegans, предоставляя инструменты для изучения химической коммуникации и траектории навигации.
Химическая коммуникация жизненно важна для здоровья организма, размножения и общего благополучия. Понимание молекулярных путей, нейронных процессов и вычислений, управляющих этими сигналами, остается активной областью исследований. Нематода Caenorhabditis elegans представляет собой мощную модель для изучения этих процессов, поскольку она продуцирует летучий половой феромон. Этот феромон синтезируется девственными самками или истощенными спермой гермафродитами и служит аттрактантом для самцов.
В этом протоколе подробно описан метод выделения летучего полового феромона из нескольких штаммов C. elegans (штамм WT N2, daf-22 и fog-2) и C. remanei. Мы также предоставляем протокол для количественной оценки мужской реакции хемотаксиса на летучий половой феромон. В нашем анализе используются такие измерения, как индекс хемотаксиса (C.I.), время прибытия (A.T.) и график траектории для точного сравнения реакций самцов в различных условиях. Этот метод позволяет проводить надежные сравнения между самцами с разным генетическим происхождением или стадиями развития. Кроме того, описанная здесь экспериментальная установка может быть адаптирована к исследованию других химических веществ хемопритяжения.
Взаимодействие между химической коммуникацией и репродуктивным успехом является фундаментальным принципом в животном царстве 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10. Половые феромоны вызывают широкий спектр полового диморфизма, необходимого для поиска партнеров, координации шагов, связанных с поиском и привлечением партн....
1. Экстракция сырых половых феромонов у самок и гермафродитов
Траекторный анализ дефектного штамма восприятия летучих половых феромонов в анализе хемоаттракции
Этот анализ хемоаттракции надежно дифференцирует дикий тип и мутантные штаммы C. elegans в их реакции на летучие половые феромоны. Успешные эксперименты с .......
Этот протокол обеспечивает надежную методологию экстракции летучих половых феромонов из C. elegans, а также создание надежного анализа хемоаттракции для измерения реакций самцов на хемоаттракцию. Дополнительную информацию можно найти в руководстве пользователя Wor.......
У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.
Мы благодарны доктору Тинтао Чжоу за разработку и написание кода для визуализации траекторий, использованных в нашем анализе. Эта работа была поддержана финансированием: R01 NS113119 (PWS), стипендией Чэня для старших постдоков и Институтом неврологии Тяньцяо и Крисси Чен.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10 cm Petri dishes | Falcon | 25373-100 | Falcon bacteriological Petri dish 100 x 15 mm |
6 cm Petri dishes | Falcon | 25373-085 | Falcon bacteriological Petri dish 60 x 15 mm |
C. remanei (EM464) | CGC | ||
Centrifuge | Eppendorf | centrifuge 5418 | Any brand should work. |
Chemoattraction assay plates | Homemade solution | N/A | 1.5% agar, 25 mM NaCl, 1.5 mM Tris-base, and 3.5 mM Tris-Cl |
Cholesterol | Alfa Aesar | 57-88-5 | |
Dissecting Microscope | Leica | LeicaMZ75 | Any brand should work. |
E. Coli OP50 | CGC | ||
Ethanol | Koptec | 64-17-5 | |
fog-2(q71) (JK574) | CGC | ||
him-5(e1490)(CB4088) | CGC | ||
Household bleach | Clorox Germicidal bleach concentrated | Bleach | |
M9 buffer | Homemade solution | N/A | 3 g KH2PO4, 11.3 g Na2HPO4.7H2O, 5 g NaCl, H2O to 1 L. Sterilize by autoclaving. Add 1 mL 1 M MgSO4 after cool down to room temperature. |
Magnesium Sulfate, Anhydrous, Powder | Macron | M1063-500GM-EA | |
Microwave | TOSHIBA | N/A | Any brand should work. |
N2 | CGC | ||
NaOH | Sigma-aldrich | S318-3 | 1 M |
NGM plates solution | Homemade solution | N/A | 2.5 g Peptone, 18 g agar, 3 g NaCl, H2O to 1 L.Sterilize by autoclaving. Once the autoclave is done (2 h), wait until the temperature of the medium drops to 65 °C. Put on a hotplate at 65 °C and stir. Then add the following, waiting 5 min between each to avoid crystallization: 1 mL CaCl2 (1 M), 1 mL MgSO4 (1 M), 25 mL K3PO4 (1 M, pH=6), 1 mL Cholesterol ( 5 mg/mL in ethanol). |
Parafilm | Bemis | 13-374-10 | Bemis Parafilm M Laboratory Wrapping Film |
Peptone | VWR | 97063-324 | |
Pipet- aid | Drummond Scientific | 4-000-100 | Any brand should work. |
Plastic paper | Octago | Waterproof Screen Printing Inkjet Transparency Film | https://www.amazon.com/Octago-Waterproof-Transparency-Printing-Printers/dp/B08HJQWFGD |
Potassium chloride | Sigma-aldrich | SLBP2366V | |
Potassium phosphate | Spectrum | 7778-77-0 | |
Pipette | Eppendorf | SKU: EPPR4331; MFG#: 2231300006 | 20 - 200 µL, 100 - 1000 µL, any brand should work. |
Rotator | Labnet | SKU: LI-H5500 | Labnet H5500 Mini LabRoller with Dual Direction Rotator. Any brand should work. |
Sodium chloride | VWR | 7647-14-5 | |
sodium phosphate dibasic | Sigma-aldrich | SLCG3888 | |
Tris-base | Sigma-aldrich | 77-86-1 | |
Tris-Cl | Roche | 1185-53-1 | |
Tryptone | VWR | 97063-390 | |
Vortex | Scientific industries | Vortex-Genie 2 | Any brand should work. |
WormLab system | MBF Bioscience | N/A | https://www.mbfbioscience.com/help/WormLab/Content/home.htm; https://www.mbfbioscience.com/products/wormlab/ |
Wormpicker | Homemade | N/A | made with platinum and glass pipet tips |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены