A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
نصف طريقة لاستخدام الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) من الفئران من خلال قياس التدفق الخلوي لنقل الخلايا بالتبني. يهدف هذا البروتوكول إلى التحقق من السمية الخلوية المحددة ل TILs ضد الأورام في نموذج فأر سرطان البنكرياس المتزاوي ، مما يوفر رؤى حول تطوير علاجات الخلايا بالتبني لسرطان البنكرياس.
سرطان البنكرياس هو ورم خبيث عدواني مع تشخيص كئيب وخيارات علاجية محدودة. يمثل العلاج بالخلايا بالتبني ، والذي يتضمن عزل وتنشيط الخلايا المناعية للمريض ، مثل الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) ، قبل إعادة حقنها ، نهجا تجريبيا واعدا. ومع ذلك ، فإن تقنيات نقل الخلايا بالتبني في نماذج سرطان البنكرياس قبل السريرية ليست راسخة. هنا ، نصف بروتوكولا مفصلا للعلاج بالخلايا بالتبني باستخدام TILs من نموذج فأر سرطان البنكرياس المتزالين. يتضمن الإجراء زرع خلايا سرطان البنكرياس الحية أو المشعة في الفئران المراسلة المسماة بالفلورة لبدء تدفق الخلايا المناعية ، ثم عزل الخلايا الليمفاوية عن الأورام الأولية عن طريق فرز قياس التدفق الخلوي و / أو تنشيط وتوسيع الخلايا التائية التفاعلية للورم خارج الجسم الحي ، ونقل هذه الخلايا التائية المنشطة داخل الصفاق إلى الفئران الحاملة للورم ، متبوعا بإعطاء الإنترلوكين -2. يسمح تصوير الورم المضيء بيولوجيا بالمراقبة الطولية لنمو الورم التقويمي والاستجابة للعلاج ، وخاصة تقييم التأثيرات السامة للخلايا الخاصة بالورم. يلخص هذا النهج الخدمات اللوجستية التي ينطوي عليها تطوير علاجات نقل الخلايا بالتبني لمرضى سرطان البنكرياس. تظهر النتائج فعالية معززة مضادة للأورام للخلايا التائية التفاعلية للورم المنقولة بالتبني مقارنة بضوابط الخلايا الليمفاوية غير ذات الصلة. تتيح هذه المنهجية متعددة الاستخدامات دراسة العلاج المناعي بالتبني في الجسم الحي في سرطان البنكرياس بالإضافة إلى تحسين معلمات معالجة الخلايا وأنظمة العلاج المركبة.
العلاج المناعي لسرطان البنكرياس في مراحله الأولى ، مع الاستكشاف والتحقق قبل السريري المستمر بشكل أساسي في نماذج الفئران1. تشمل العلاجات الحالية لسرطان البنكرياس الجراحة والعلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي والعلاجات الموجهة. لسوء الحظ ، غالبا ما تفشل هذه الطرق في القضاء تماما على آفات الورم ، مما يؤدي إلى التكرار والتطور. تركز العلاجات التقليدية على الخلايا السرطانية ولكنها غالبا ما تتجاهل البيئة المكروية للورم (TME) ، والتي تشمل كلا من الخلايا السرطانية والسدى المرتبط بها المكون من الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) والخلايا الليفية والمصفوفة خارج الخلية2. TILs هي خلايا مناعية داخل TME ، بما في ذلك الخلايا التائية السامة للخلايا ، والخلايا التائية المساعدة ، والخلايا التائية التنظيمية ، والخلايا البائية ، والخلايا القاتلة الطبيعية ، والضامة ، والخلايا المثبطة المشتقة من النخاع3. تشارك هذه الخلايا في الاستجابات المناعية التي تؤثر على نمو الورم والنتائج العلاجية4.
يتضمن العلاج بالخلايا بالتبني (ACT) جمع الخلايا المناعية للمريض ، وتعديلها وتوسيعها في المختبر ، ثم إعادة إدخالها لاستهداف الخلايا السرطانية وقتلها. يتم البحث عن علاج TIL ، وهو نوع من ACT ، لعلاج أنواع مختلفة من السرطان ، بما في ذلك سرطان الجلد وسرطان الرئة وسرطان عنق الرحم. تتضمن هذه العملية عزل الخلايا الليمفاوية عن الورم ، وزراعتها باستخدام IL-2 في المختبر ، وإعادة ضخها في المريض ، غالبا بعد استنفاد اللمفاويات بالعلاج الكيميائي أو العلاج الإشعاعي5.
منذ أن أظهرت دراسة روزنبرغ عام 1986 فعالية TILs في الفئران6 ، أصبح العلاج المناعي لنقل الخلايا بالتبني نقطة ساخنة للبحث وأظهر وعدا في علاج السرطان7،8،9،10. نحن نهدف إلى استخراج TILs من الفئران ، وفرزها لخلايا تائية معينة عن طريق قياس التدفق الخلوي ، والتحقق من صحة آثارها القاتلة للورم من خلال النقل بالتبني.
في هذا البروتوكول ، نصف طريقة لاستخدام TILs من الفئران من خلال قياس التدفق الخلوي لنقل الخلايا بالتبني. الهدف هو التحقق من السمية الخلوية المحددة ل TILs ضد الأورام في نموذج فأر سرطان البنكرياس المتزابقي ، مما يوفر رؤى حول تطوير العلاجات الخلوية بالتبني لسرطان البنكرياس. تتضمن هذه الطريقة زرع خلايا سرطان البنكرياس الحية أو المشعة في الفئران المراسلة المسماة بالفلورة لبدء تدفق الخلايا المناعية ، وعزل الخلايا الليمفاوية عن الأورام الأولية عن طريق فرز قياس التدفق الخلوي ، أو تنشيط وتوسيع الخلايا التائية التفاعلية للورم خارج الجسم الحي ، ونقل هذه الخلايا التائية المنشطة بالتبني إلى الفئران الحاملة للورم. يسمح الإعطاء اللاحق لتصوير الورم بالإنترلوكين 2 والتصوير الحيوي بالمراقبة الطولية لنمو الورم التقويمي والاستجابة للعلاج ، لا سيما تقييم التأثيرات السامة للخلايا الخاصة بالورم. يلخص هذا النهج الخدمات اللوجستية التي ينطوي عليها تطوير علاجات نقل الخلايا بالتبني لمرضى سرطان البنكرياس. تظهر النتائج فعالية معززة مضادة للأورام للخلايا التائية التفاعلية للورم المنقولة بالتبني مقارنة بضوابط الخلايا الليمفاوية غير ذات الصلة. تتيح هذه المنهجية متعددة الاستخدامات دراسة العلاج المناعي بالتبني في الجسم الحي في سرطان البنكرياس ، بالإضافة إلى تحسين معلمات معالجة الخلايا وأنظمة العلاج المركبة.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تقع مستعمرة الفئران في منشأة معتمدة من AAALAC International ، وتلتزم بجميع لوائح ومعايير وزارة الزراعة الأمريكية و HHS و NIH ذات الصلة. قام معهد السرطان بجامعة تيانجين الطبية ولجنة رعاية واستخدامها في المستشفى بمراجعة واعتماد جميع الإجراءات الحيوانية ، بما في ذلك الأساس المنطقي لاختيار السلالة ، وتخصيصات المجموعة التجريبية ، والتبرير الإحصائي لأعداد والتوزيع العشوائي.
1. تحريض الورم
2. حصاد الأورام
3. هضم الورم
4. جمع الخلايا
5. إعداد قياس التدفق الخلوي
6. فرز الخلايا
7. تحضير الخلية للنقل
8. نقل التبني
9. مراقبة الورم
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تنقسم الفئران المتلقية إلى سبع مجموعات لتقييم فعالية نقل TIL بدقة: (أ) التحكم في المحلول الملحي (تحكم فارغ): تتلقى الفئران حقنا ملحية لتكون بمثابة خط أساس. (ب) IL-2 فقط (تحكم فارغ): الفئران التي تتلقى حقن IL-2 لحساب أي آثار للسيتوكين وحده. (ج) نفس العلاج الفردي للف...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
قد يعزز العلاج المناعي المحتمل لسرطان البنكرياس جهاز المناعة لاستهداف الخلايا السرطانية والقضاء عليها ، بما في ذلك العلاج المناعي بالتبني ومثبطات نقاط التفتيش المناعية ولقاحات الورم12. يستخرج العلاج TIL الخلايا الليمفاوية ويوسعها من الأورام ، والتي يتم بعد...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
وأعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح. أثناء استخدام ChatGPT و Claude-3 لتحرير اللغة ، قام المؤلفون بمراجعة الكلمات والجمل التي تم إنشاؤها بواسطة ChatGPT أو Claude-3 بعناية والتحقق من صحتها قبل تضمينها في المقالة.
تم تمويل هذا البحث من قبل منح المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC) ، ورقم المنحة 82272767 و 82072691 إلى YM. يشكر المؤلفون أعضاء فريقهم على مناقشتهم وتعاونهم.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Bioluminescent imaging system | PerkinElmer | IVIS Spectrum | For monitoring tumor growth |
Bovine Serum Albumin V | Solarbio | A8020 | For cell resuspension |
Cell strainer (40 μm or 70 μm) | Jet | CSS013040 | For filtering cell suspensions |
Centrifuge | Eppendorf | 5810R | For cell collection and preparation |
CO2 chamber | Tianjin Liliang | N/A | For euthanizing mice |
Collagenase | Sigma-Aldrich | C5138 | For digestion solution |
CD3-APC antibody | Biolegend | 100236 | For flow cytometry staining |
CD45-APC/Fire750 antibody | Biolegend | 100154 | For flow cytometry staining |
C57BL/6 albino mice | Jackson Laboratory | 58 | Donor and recipient mice |
Dispase II | Gibco | 17105-041 | For digestion solution |
DNase I | SparkJade | AC1711 | For digestion solution |
D-Luciferin potassium salt | Beyotime | ST198-10g | For live imaging |
Ethanol (75%) | N/A | For sterilization | |
Fc blockers | BD Biosciences | 553142 | For flow cytometry staining |
Fetal Bovine Serum | Gibco | A5669701 | For cell culture |
Flow cytometer | BD Biosciences | FACSAria III | For cell sorting |
IL-2 (Interleukin-2) | PeproTech | 200-02 | For administration post-transfer |
Isoflurane | Shandong Ante | N/A | For narcotism |
KPC-Luc cell line | PI lab generated | N/A | For inducing orthotopic pancreatic tumors |
Matrigel Matrix | Corning | 356234 | For orthotopic implantation |
PBS (Phosphate-Buffered Saline) | Servicebio | G4207-500ML | For washing and resuspending cells |
RPMI 1640 medium | Gibco | 11875093 | For preparing digestion solution |
Sterile hood | ESCO | N/A | For sterile tumor extraction and processing |
Sterile scissors and forceps | N/A | For tumor extraction | |
Suture (4-0, PGA absorbable suture) | Jinhuan Medical | R413 | For wound closure |
Syringe | Jiangxi Fenglin | 1 mL 0.45 × 16RWLB | For injection |
Tissue culture plate 12 well | Jet | TCP001012 | For tumor digestion |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved