وأيد هذا البحث في جزء من القلب الأميركية 0950118G.to منح رابطة MC - W.

1. إعداد حبات المغناطيسي مكافحة PECAM - 1 - الضد مترافق (Dynabeads) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد جيش صرب البوسنة 0.1 ٪ في برنامج تلفزيوني عن طريق خلط 50 ملغ في جيش صرب البوسنة PBS 50 مل باستخدام الدوامة حتى يذوب جيش صرب البوسنة. تعقيم بواسطة الترشيح من خلال 0،22 ميكرون تصفية المحاقن. المحل في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هود TC ، ونقل 200 ميكرولتر من معلق Dynabeads الأغنام كذلك مفتش الحكومة لمكافحة الجرذان في أنبوب 1.5 مل إيبندورف وتغسل حبات : MPC على جبل أنبوب وترك الجلوس لحوالي 1 دقيقة للسماح للالخرز على الرسوبيات. نضح طاف ، إزالة أنبوب من MPC resuspend والخرز في 1 مل من 0.1 ٪ BSA العقيمة / برنامج تلفزيوني. ماصة صعودا وهبوطا لresuspend الخرز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار غسل ثلاث مرات أكثر ، ليصبح المجموع أربعة يغسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أنبوب من MPC resuspend والخرز في 500 ميكرولتر من 0.1 ٪ BSA / برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 10 ميكرولتر الفئران لمكافحة فأر PECAM - 1 (CD - 31) الضد في أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعثر بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية في الغرفة الباردة أو 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل حبات مع جيش صرب البوسنة 0.1 ٪ معقمة / PBS كما هو موضح في الخطوة 1.2 أربع مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أنبوب من MPC resuspend والخرز في 200 BSA 0.1 ٪ ميكرولتر / برنامج تلفزيوني. متجر مكافحة PECAM - 1 - الضد مترافق Dynabeads في 4 درجات مئوية ليصل إلى 1 في الشهر. </li></ol> 2. الماوس الرئوي عزل الخلايا البطانية من الفئران حديثي الولادة قبل المضي قدما في تنقية نسيج بروتوكول ، مطلوب IACUC اللجنة بالموافقة على هذا الإجراء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ما يلي : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 مل من محلول 1 C / D ملغ / مل في DMEM. فلتر مع حقنة 0.22 ميكرون تصفية ودافئة إلى 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنبوب 50 مل مع المخروطية DMEM 15 مل ، وتخزينها على الجليد </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العزلة وسائل الإعلام (IM) تحتوي على 20 ٪ FBS والبنسلين 1X / الستربتوميسين في DMEM </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 ٪ الجيلاتين. 2 غرام مزيج من الجلد البقري الجيلاتين مع 100 مل من الماء د ، 15 دقيقة الأوتوكلاف وتخزينها في 4 درجات مئوية. الحارة إلى 37 درجة مئوية لتسييل قبل قوارير TC الطلاء. </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير three الجراء يوم 6-8 القديمة باستخدام حقنة IP من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). التحقق من فعالية التخدير وتشريح الحيوانات واحدا تلو الآخر ، على النحو التالي : الجراء دبوس إلى المجلس ، وامتصاص الجلد مع الايثانول 70 ٪ وإزالة الجلد من منطقة الصدر مع مقص تشريح العقيمة. استئصال القفص الصدري لفضح الرئتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المكوس جو معقم و مطهر فصوص الرئة الفردية ، والحرص على عدم تشريح القصبات وأي نوع من الأنسجة الضامة وضوحا حول الرئتين. الجمع بين جميع الرئتين في الجليد الباردة DMEM. الموت ببطء الجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العاملة في هود TC ، إزالة فصوص الرئة من DMEM ، ومكان في صحن ملم TC 100 و نضح DMEM الزائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص العقيمة ، واللحم المفروم ناعما النسيج عن طريق خفض ~ 100 مرات. نقل إلى 15 مل حل C / D الدافئة للهضم الأنزيمية. احتضان 45 دقيقة عند درجة 37 على محور دوار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هود TC ، نضح تعليق الأنسجة هضمها في لحقنة 20 مل مع 14 كتل قنية ز المرفقة ويسحن في تعليق خلية واحدة ، على الأقل 12 مرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمرير تعليق الأنسجة من خلال مصفاة الخلية 70 ميكرومتر ، ويغسل مع مصفاة IM 15 مل لوقف عملية الهضم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيليه التعليق على الخلايا بواسطة الطرد المركزي ز 400X لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وطاف بيليه resuspend في 3 BSA 0.1 ٪ مل / برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعليق نقل الخلية إلى 5 مل أنبوب البوليسترين جولة القاع وإضافة 22.5 ميكرولتر مكافحة PECAM - 1 - مترافق Dynabeads الأضداد. هبوط في درجة حرارة الغرفة لمدة 12 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معطف قارورة T75 الجيلاتين مع 2 مل 2 ٪ وفائض نضح الجيلاتين. السماح ليجف الجيلاتين داخل غطاء TC لحوالي 30 دقيقة قبل خلايا الطلاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد حضانة حبة كاملة (الخطوة 2.10) ، وتقسيم الخلية تعليق على قدم المساواة في أنابيب إيبندورف الثلاثة وجبل على لجنة السياسة النقدية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يكون الخرز الرسوبية به لجنة السياسة النقدية (~ 1 دقيقة) ، وجمع طاف ، وإزالة أنبوب من لجنة السياسة النقدية ، وتغسل حبات مع ~ 1 مل 0.1 ٪ BSA / PBS ، ثم صعد مرة ثانية على لجنة السياسة النقدية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار غسل أربع مرات (المجموع 5 يغسل) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخرز Resuspend في 1 مل من VascuLife مع EnGS MV - الحياة العوامل كيت و1X البنسلين / الستربتوميسين (VL) لكل أنبوب ، والخلط جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة على قارورة T75 قبل المغلفة وجلب الحجم الإجمالي في كل قارورة إلى 10 مل مع VL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغير وسائل الاعلام في اليوم التالي ، تسمح 1 يوم كامل من النمو ، ومن ثم تغيير نصف كل يوم وسائل الإعلام الأخرى. عندما الخلايا&gt; 70-80 ٪ متموجة أو أكثر (عادة بعد 3-4 أيام للثقافة) ، ويمكن فرزها مع المضادة للICAM - 2 Dynabeads. </li></ol> 3. تستعد لمكافحة ICAM - 2 - الضد مترافق Dynabeads <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتستخدم Dynabeads مكافحة ICAM - 2 - مترافق الضد لتنقية المزيد من الخلايا التي تم اختيارها مع المضادة للPECAM - 1 - الضد مترافق Dynabeads والمثقفين حتى متموجة. يتم تنفيذ هذا الإجراء كما هو موضح لمكافحة Dynabeads PECAM - 1 - مترافق الأضداد (1 أعلاه) ، إلا أن معاداة الماوس ICAM - 2 (CD - 102) ويستخدم بدلا من الأضداد المضادة للPECAM 1 - الأضداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تخزين Dynabeads مكافحة ICAM - 2 - مترافق الأضداد في 4 درجات مئوية لمدة تصلإلى 1 في الشهر. </li></ol> 4. فرز خلايا الرئة ماوس غشائي المضادة للICAM - 2 Dynabeads <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معطف زراعة الأنسجة T75 قارورة مع 2 ٪ الجيلاتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في وسائل الاعلام من القارورة T75 متموجة مع الخلايا وتغسل مع PBS مل 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح PBS ، إضافة 2 مل 0.05 ٪ التربسين / EDTA وترك الخلايا فصل (حوالي 5 دقائق). اضغط على قوارير برفق لفصل المساعدات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يكون فصل الخلايا ، إضافة 2 مل IM لمنع التربسين وكشط الخلايا لفصل أي الخلايا المتبقية ملتصقة. تعليق نقل الخلية إلى أنبوب 15 مل وتدور باستمرار لمدة 5 دقائق في غرام 400X </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في وسائل الإعلام وresuspend بيليه خلية في جيش صرب البوسنة 0.1 ٪ 2 مل / برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل إلى أنبوب 5 مل جولة القاع البوليسترين وإضافة 10 ميكرولتر مكافحة ICAM - 2 Dynabeads. تعثر لمدة 12 دقيقة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقسام الخلية إلى قسمين تعليق أنابيب 1.5 مل إيبندورف وجبل على لجنة السياسة النقدية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح طاف بعد حبات انضمت لدقيقة واحدة. إزالة الأنابيب من MPC وresuspend كل أنبوب في جيش صرب البوسنة 1 0.1 ٪ مل / برنامج تلفزيوني. صعد مرة ثانية على لجنة السياسة النقدية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار غسل أربع مرات (ما مجموعه 5 يغسل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend كل أنبوب مع VL 1 مل وتنفيذ عدد الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في لوحة الخلايا 250 خلية لكل 350K T25 قارورة و / أو 750K - 1 مليون خلية في T75 القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ليصل حجم 5 مل VL T25 في القوارير ، و 10 مل في T75 القوارير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغير وسائل الاعلام كل يوم. ويمكن استخدام الخلايا لإجراء التجارب عندما تصل الثقافة حوالي 80 ٪ confluency ، وعادة في غضون 2-3 أيام. </li></ol> 5. ممثل النتائج عادة ، بعد 6-7 أيام من التحضير الأولي للخلايا ، ونحن قادرون على الحصول على حوالي 1،2-1،5 × 10 6 خلايا بطانة الأوعية الدموية الرئوية من ثلاثة ايام الجراء 6-8 القديمة. عرض خلايا نموذجية &quot;الحصوه&quot; التشكل تحت المجهر الخفيفة وتظهر VE - كادهيرين (CD144) في تلطيخ خلية خلية التقاطعات ، والتي تتميز عن الخلايا البطانية (الشكل 1). أعرب غالبية MLECs كادهيرين - VE VEGFR2 وكما يتبين من تحليل FACS (الشكل 2). عادة ، ونحن استخدامها لاجراء تجارب في غضون اسبوعين بعد عزل MLEC الأولي. <img src="/files/ftp_upload/2316/2316fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. التحليل المجهري للأحادي الطبقة MLEC متموجة. (أ) صورة الخفيفة المجهري يظهر مورفولوجيا الحصوه من الخلايا مثقف نموذجي للخلايا بطانة الأوعية الدموية. هياكل موحدة الجولة الواقعة في منطقة محيط بالنواة العديد من الخلايا التي هي حبات المغناطيسي المستخدمة لعزل MLEC. (ب) هو مترجم غشائي محددة VE - كادهيرين في تقاطعات خلية خلية كما هو موضح باستخدام المجهر مبائر. البار ممثل 20μm. <img src="/files/ftp_upload/2316/2316fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2 FACS تحليل MLECs مثقف المسمى مع الأجسام المضادة المحددة لالبطانية علامات محددة : VE - كادهيرين (CD144) أو VEGFR2 ، كما اتهم ، تليها فيكوإيريترين - مترافق الضد الثانوية ، يؤكد هوية من البطانية MLECs معزولة. خط أحمر يشير isotype محددة السيطرة ، يشير الخط الأخضر المضادة للVE - كادهيرين أو معادية للVEGFR2 - -- مفتش الحكومة محددة.

<ol>
	<li>Maruyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+endothelial+cell+in+tissue+culture.">The human endothelial cell in tissue culture.</a> Z Zellforsch Mikrosk. Anat. 60, 69-79 (1963).</li><li>Lim, Y. C., Luscinskas, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+murine+heart+and+lung+endothelial+cells+for+in+vitro+model+systems.">Isolation and culture of murine heart and lung endothelial cells for in vitro model systems.</a> Methods Mol Biol. 341, 141-154 (2006).</li><li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+heterogeneity+of+the+endothelium:+I.+Structure,+function,+and+mechanisms.">Phenotypic heterogeneity of the endothelium: I. Structure, function, and mechanisms.</a> Circ Res. 100, 158-173 (2007).</li><li>Fehrenbach, M. L., Cao, G., Williams, J. T., Finklestein, J. M., Delisser, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+lung+endothelial+cells.">Isolation of murine lung endothelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L1096-L1103 (2009).</li><li>Miebach, S., Grau, S., Hummel, V., Rieckmann, P., Tonn, J. C., Goldbrunner, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+microvascular+endothelial+cells+from+gliomas+of+different+WHO+grades.">Isolation and culture of microvascular endothelial cells from gliomas of different WHO grades.</a> J. Neurooncol. 76, 39-48 (2006).</li><li>Demeule, M., Labelle, M., R&#233;gina, A., Berthelet, F., B&#233;liveau, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+endothelial+cells+from+brain,+lung,+and+kidney:+expression+of+the+multidrug+resistance+P-glycoprotein+isoforms.">Isolation of endothelial cells from brain, lung, and kidney: expression of the multidrug resistance P-glycoprotein isoforms.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 281, 827-834 (2001).</li><li>Kajimoto, K., Hossen, N., Hida, K., Ohga, N., Akita, H., Hyodo, M., Hida, Y., Harashima, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+microvascular+endothelial+cells+from+murine+inguinal+and+epididymal+adipose+tissues.">Isolation and culture of microvascular endothelial cells from murine inguinal and epididymal adipose tissues.</a> J. Immunol. Methods. 357, 43-50 (2010).</li><li>Breviario, F., Caveda, L., Corada, M., Martin-Padura, I., Navarro, P., Golay, J., Introna, M., Gulino, D., Lampugnani, M. G., Dejana, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+properties+of+human+vascular+endothelial+cadherin+(7B4/cadherin-5),+an+endothelium-specific+cadherin.">Functional properties of human vascular endothelial cadherin (7B4/cadherin-5), an endothelium-specific cadherin.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 15, 1229-1239 (1995).</li><li>Zachary, I., Gliki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+transduction+mechanisms+mediating+biological+actions+of+the+vascular+endothelial+growth+factor+family.">Signaling transduction mechanisms mediating biological actions of the vascular endothelial growth factor family.</a> Cardiovasc Res. 49, 568-581 (2001).</li><li>Diglio, C. A., Grammas, P., Giacomelli, F., Wiener, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+heart-derived+endothelial+and+smooth+muscle+cell+cultures:+isolation,+cloning+and+characterization.">Rat heart-derived endothelial and smooth muscle cell cultures: isolation, cloning and characterization.</a> Tissue Cell. 20, 477-492 (1988).</li><li>Petzelbauer, P., Bender, J. R., Wilson, J., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+dermal+microvascular+endothelial+cell+antigen+expression+and+cytokine+responsiveness+in+situ+and+in+cell+culture.">Heterogeneity of dermal microvascular endothelial cell antigen expression and cytokine responsiveness in situ and in cell culture.</a> J Immunol. 151, 5062-5072 (1993).</li><li>Chrzanowska-Wodnicka, M., Kraus, A. E., Gale, D., White, G. C., Vansluys, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+angiogenesis,+endothelial+migration,+proliferation,+and+MAPK+signaling+in+Rap1b-deficient+mice.">Defective angiogenesis, endothelial migration, proliferation, and MAPK signaling in Rap1b-deficient mice.</a> Blood. 111, 2647-2656 (2008).</li></ol>

وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها كلية الطب في ويسكونسن IACUC اللجنة بموجب البروتوكول AUA # 00001206.

وقد أثبتت ECS الاوعية الدموية الدقيقة ليكون نموذجا مفيدا في كثير من مجالات البيولوجيا الوعائية ويعتقد أن يكون أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية للدراسة (مثل الأوعية الدموية) من HUVECs درس على نطاق واسع 3. سابقا ، وقد ذكرت أنه يمكن الحصول عليها من الاوعية الدموية الدقيقة ECS والكلى القلب والأنسجة الدهنية الجلد ، وشبكية العين والدماغ والاورام الدبقية ، وكذلك سرطان الرئة 2 ، 4-7 ، 10 ، 11. ومع ذلك ، لا تزال هناك حاجة طريقة متسقة وموثوق بها لعزل ECS الاوعية الدموية الدقيقة. الإجراء المعروض هنا هو تعديل للبروتوكول تنطبق 2 ؛ فهو يختلف عن معظم الإجراءات التي نشرت في أنه يستخدم بدلا من الجراء الحيوانات البالغة. هذا أمر بالغ الأهمية لنجاح العزلة والخلايا من الحيوانات الصغيرة لديها أعلى احتمال انتشار والثقافات المستمدة من أنسجتها ، تميل إلى العائد أعلى عدد من الخلايا. الحيوانات أسبوع واحد من العمر ويبدو أن أمثل ، ولكن يمكن أن تستخدم أيضا الفئران الأصغر (4 أيام من العمر) يكون. أيضا ، يمكن أن يستخدم هذا الرقم أعلى أو أقل من الجراء إذا لزم الأمر ، كما أننا نجحنا في عزل MLECs من الجرو. ومع ذلك ، في حين أن التوسع صعودا أو هبوطا في عملية العزلة ، ويجب أن الخلية كثافة الطلاء لم تتغير ، وهذا أمر بالغ الأهمية أيضا لتكاثر الخلايا. عملية تنقية 2 - خطوة من MLECs باستخدام الخرز المغناطيسي مترافق أول 1 - PECAM ومكافحة الألغام المضادة للICAM - 2 الأضداد هو أكثر فاعلية في الحصول على الثقافات الأوروبية نقية من الإجراءات المذكورة سابقا تنقية خطوة واحدة. هذا البروتوكول يلغي الحاجة إلى استخدام التقنيات اليدوية شاقة جدا ، والطرد المركزي والتدرج FACS أقل كفاءة الفرز للخلايا نبذ تلويث مثل الخلايا الليفية ، وخلايا الدم وخلايا العضلات الملساء. ويمكن استخدام السكان الناجمة عن MLEC في التحليل المعملي للردود عائية ، نفاذية الأوعية الدموية والتهجير الكريات البيض ، التئام الجروح ، فضلا عن تحليل الإشارات البيوكيميائية الممرات. إذا لزم الأمر ، يمكن مطلي MLECs على الأسطح المختلفة مثل الجيلاتين coverslips فبرونيكتين أو المغلفة للصفائف المناعي أو العابرة للقطب البطاني القياسات (TER) المقاومة. ويمكن مقارنة النتائج المتحصل عليها مباشرة إلى الظواهر التي لوحظت في الجسم الحي ، وهو أمر مهم لا سيما في سياق العدد المتزايد من خروج المغلوب وخطوط الفأر المعدل وراثيا. وقد تم بالفعل تنفيذ الناجح لهذا الأسلوب في التحليل المختبري من الآليات الخلوية الكامنة العيوب التي لوحظت في الجسم الحي ، قدم 12.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Spring scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15032-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11223-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>14G cannula</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>1482516N</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>20 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309661</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich </td>
<td>A7030-100G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-rat IgG Dynabeads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>110.35</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Magnetic Particle Concentrator (MPC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>123-21D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-mouse PECAM-1 antibody (CD-31)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>553369</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-mouse ICAM-2 antibody (CD-102) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>553326</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase/Dispase (C/D)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11097113001</td>
<td>100mg/ml stock solution can be prepared and stored at -20&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro Mediatech</td>
<td>10-013-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bovine Skin Gelatin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>#G9391-100G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vasculife EnGS-Mv complete kit (VL)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lifeline Cell Technology</td>
<td>LL0004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.05% Trypsin/EDTA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mediatech</td>
<td>25-052-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell strainer 70 &mu;m nylon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>tissue culture flask 75 cm2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TPP</td>
<td>90076</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation and culture of pulmonary endothelial cells from neonatal mice

الخلايا البطانية تقديم نموذج بحث مفيد في كثير من مجالات البيولوجيا الوعائية. منذ عزلتها الأول (1) ، وقد أظهرت خلايا بطانة الوريد السري (HUVECs) لتكون مريحة وسهلة للحصول على والثقافة ، وبالتالي هي أكثر الخلايا البطانية درس على نطاق واسع. ومع ذلك ، للبحث تركز على عمليات مثل الآخرين الأوعية الدموية والنفاذية أو كثيرة ، الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة (ECS) هي نموذج أكثر بكثير من الناحية الفسيولوجية ذات الصلة لدراسة 2. علاوة على ذلك ، ECS المعزولة من الفئران خروج المغلوب توفير أداة مفيدة لتحليل وظيفة البروتين فيفو السابقين. العديد من الطرق لعزل والاوعية الدموية الدقيقة ECS ثقافة المنشأ مختلفة تم الإبلاغ عنها حتى الآن 3-7 ، ولكن العزلة تتفق وثقافة نقية ECS لا يزال يمثل مشكلة رئيسية في العديد من المختبرات التقنية. هنا ، ونحن نقدم بروتوكول خطوة بخطوة على طريقة موثوقة وبسيطة نسبيا من عزل وزراعة الخلايا البطانية الرئة الماوس (MLECs). في هذا النهج ، وأنسجة الرئة التي تم الحصول عليها من 6 -- 8 ليوم هو أول خفض الجراء القديم إربا ، يتفاعل مع كولاجيناز / dispase (C / D) الحل وفرقت ميكانيكيا في وحيدة الخلية تعليق. ويجري تنقية MLECS من الايقاف الخلية باستخدام اختيار الإيجابي مع مضادات الأجسام المضادة PECAM - 1 مترافق لاستخدام المكثف Dynabeads الجسيمات المغناطيسية (MPC). يتم استزراع هذه الخلايا على تنقيته زراعة الأنسجة المغلفة الجيلاتين (TC) الأطباق حتى تصبح متموجة. عند هذه النقطة ، كذلك تنقية الخلايا باستخدام Dynabeads بالإضافة إلى مكافحة ICAM - 2 الأضداد. MLECs حصل مع هذا البروتوكول يحمل النمط الظاهري حصوه ، كما تصور المجهري ضوء التخلص النقيض من ذلك ، وتأكدت من النمط الظاهري البطانية FACS باستخدام التحليل المضادة للكادهيرين VE - 8 و 9 VEGFR2 المضادة للأضداد وتلطيخ مناعي من كادهيرين - VE. في أيدينا ، وهذا إجراء العزل من خطوتين باستمرار وبشكل موثوق تعطي السكان نقية من MLECs ، والتي يمكن أيضا مثقف. وهذه الطريقة تمكن الباحثين من الاستفادة من عدد متزايد من خروج المغلوب والفئران المعدلة وراثيا لربط مباشرة في الدراسات المجراة مع نتائج التجارب في المختبر أجريت على MLECs معزولة وبالتالي يساعد في الكشف عن الآليات الجزيئية لاحظ الأنماط الظاهرية الأوعية الدموية في الجسم الحي.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice at JoVE.com

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

هنا ، نحن تصف بروتوكول للثقافة العزلة والفئران من خلايا بطانة الأوعية الدموية الرئوية. يضم هذا الأسلوب ميكانيكي والأنزيمية تفارق أنسجة الرئة ، فضلا عن عملية تنقية 2 - خطوة استخدام الألغام المضادة للPECAM - 1 ومعاداة ICAM - 2 الأضداد مترافق إلى حبات المغناطيسي ، والتي تنتج الخلايا البطانية نقية السكان من أصل الاوعية الدموية الدقيقة في معظمها.

العزلة والثقافة في الخلايا البطانية الرئوي من الفئران حديثي الولادة

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

isolation-culture-pulmonary-endothelial-cells-from-neonatal

Research

JoVE Journal

Biology

47.0K Views.  BloodCenter of Wisconsin. هنا ، نحن تصف بروتوكول للثقافة العزلة والفئران من خلايا بطانة الأوعية الدموية الرئوية. يضم هذا الأسلوب ميكانيكي والأنزيمية تفارق أنسجة الرئة ، فضلا عن عملية تنقية 2 - خطوة استخدام الألغام المضادة للPECAM - 1 ومعاداة ICAM - 2 الأضداد مترافق إلى حبات المغناطيسي ، والتي ت?...

Video: Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

Angiogenesis is a complex multi-step process, where in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature. These steps include: degradation of the basement membrane, proliferation and migration (sprouting) of endothelial cells (EC) into the extracellular matrix, alignment of EC into cords, lumen formation, anastomosis, and formation of a new basement membrane. Many in vitro assays have been developed to study this process, but most only mimic certain stages of angiogenesis, and morphologically the vessels often do not resemble vessels in vivo. Here we demonstrate an optimized in vitro angiogenesis assay that utilizes human umbilical vein EC and fibroblasts. This model recapitulates all of the key early stages of angiogenesis, and importantly the vessels display patent intercellular lumens surrounded by polarized EC. Vessels can be easily observed by phase-contrast and time-lapse microscopy, and recovered in pure form for downstream applications.

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVEC

This video protocol illustrates the isolation and culture of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) from human umbilical cord. Once isolated these cells can be used for in vitro angiogenesis assays like the Optimized Fibrin Gel Bead Assay also demonstrated by the Hughes lab.

عزل خلايا الإنسان الوريد السري غشائي (HUVEC)

Angiogenesis is a complex multi-step process, where in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature. These steps ...

Isolation of Valvular Endothelial Cells

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system. These thin, fibrous tissues are subjected to significant mechanical stresses as they open and close several billion times over a lifespan. The incredible endurance of these tissues is due to the resident valvular endothelial (VEC) and interstitial cells (VIC) that constantly repair and remodel in response to local mechanical and biological signals. Only recently have we begun to understand the unique behaviors of these cells, for which in vitro experimentation has played a key role. Particularly challenging is the isolation and culture of VEC. Special care must be used from the moment the tissue is removed from the host through final plating. Here we present protocols for direct isolation, side specific isolation, culture, and verification of pure populations of VEC. We use enzymatic digestion followed by a gentle swab scraping technique to dislodge only surface cells. These cells are then collected into a tube and centrifuged into a pellet. The pellet is then resuspended and plated into culture flasks pre-coated with collagen I matrix. VEC phenotype is confirmed by contact inhibited growth and the expression of endothelial specific markers such as PECAM1 (CD31), Von Willebrand Factor (vWF), and negative expression of alpha-smooth muscle actin (&alpha;-SMA). The functional characteristics of VEC are associated with high levels of acetylated LDL. Unlike vascular endothelial cells, VEC have the unique capacity to transform into mesenchyme, which normally occurs during embryonic valve formation1. This can also occur during significantly prolonged post confluent in vitro culture, so care should be made to passage at or near confluence. After VEC isolation, pure populations of VIC can then be easily acquired.

We provide a method for isolating and culturing pure populations of heart valve endothelial cells (VEC). VEC can be isolated from either side of the cusp or leaflet and immediately following, underlying interstitial cell (VIC) isolation is straightforward.

عزل الخلايا البطانية صمامي

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system.  These thin, fibrous tissues are ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate daughter cells that retain the stem cell phenotype and transit-amplifying cells (TA cells) that migrate from the stem cell niche, undergo rapid proliferation and terminally differentiate to repopulate the tissue.
Epithelial stem cells have been identified in the epidermis, hair follicle, and intestine as cells with a high in vitro proliferative potential and as slow-cycling label-retaining cells in vivo 1-3. Adult, tissue-specific stem cells are responsible for the regeneration of the tissues in which they reside during normal physiologic turnover as well as during times of stress 4-5. Moreover, stem cells are generally considered to be multi-potent, possessing the capacity to give rise to multiple cell types within the tissue 6. For example, rodent hair follicle stem cells can generate epidermis, sebaceous glands, and hair follicles 7-9. We have shown that stem cells from the human hair follicle bulge region exhibit multi-potentiality 10.
Stem cells have become a valuable tool in biomedical research, due to their utility as an in vitro system for studying developmental biology, differentiation, tumorigenesis and for their possible therapeutic utility. It is likely that adult epithelial stem cells will be useful in the treatment of diseases such as ectodermal dysplasias, monilethrix, Netherton syndrome, Menkes disease, hereditary epidermolysis bullosa and alopecias 11-13. Additionally, other skin problems such as burn wounds, chronic wounds and ulcers will benefit from stem cell related therapies 14,15. Given the potential for reprogramming of adult cells into a pluripotent state (iPS cells)16,17, the readily accessible and expandable adult stem cells in human skin may provide a valuable source of cells for induction and downstream therapy for a wide range of disease including diabetes and Parkinson's disease.

A rapid, robust way of isolating viable adult epithelial stem cells from human skin is described. The method utilizes enzymatic digestion of skin collagen matrix , followed by plucking of hair follicles and isolation of single cell suspensions or tissue fragments for cell culture.

العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية الظهارية من الجلد البشري

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow for easy investigation and manipulation of biochemical pathways, and their effect on the biomechanical properties of spontaneously beating cardiomyocytes.	
The following 2-day protocol describes the isolation and culture of neonatal mouse cardiomyocytes. We show how to easily dissect hearts from neonates, dissociate the cardiac tissue and enrich cardiomyocytes from the cardiac cell-population. We discuss the usage of different enzyme mixes for cell-dissociation, and their effects on cell-viability. The isolated cardiomyocytes can be subsequently used for a variety of morphological, electrophysiological, biochemical, cell-biological or biomechanical assays. We optimized the protocol for robustness and reproducibility, by using only commercially available solutions and enzyme mixes that show little lot-to-lot variability. We also address common problems associated with the isolation and culture of cardiomyocytes, and offer a variety of options for the optimization of isolation and culture conditions.

Primary mouse cardiomyocyte cultures are one of the pivotal tools for the investigation of myofibrillar organization and function. The following protocol describes the isolation and culture of primary cardiomyocytes from neonatal mouse hearts. The resulting cardiomyocyte cultures may be subsequently used for a variety of biomechanical, biochemical and cell-biological assays.

العزلة وثقافة الأطفال حديثي الولادة ماوس العضلية

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines offer significant advantages for their ease of use, these cell lines are unavailable for all potential cell types. By isolating primary cells from a specific region of interest, particularly from a transgenic mouse, more nuanced studies can be performed. The basic technique involves dissecting the organ or partial organ of interest (e.g. the heart or a specific region of the heart) and dissociating the organ to single cells. These cells are then incubated with magnetic beads conjugated to an antibody that recognizes the cell type of interest. The cells of interest can then be isolated with the use of a magnet, with a short trypsin incubation dissociating the cells from the beads. These isolated cells can then be cultured and analyzed as desired. This technique was originally designed for adult mouse organs but can be easily scaled down for use with embryonic organs, as demonstrated herein. Because our interest is in the developing coronary vasculature, we wanted to study this population of cells during specific embryonic stages. Thus, the original protocol had to be modified to be compatible with the small size of the embryonic ventricles and the low potential yield of endothelial cells at these developmental stages. Utilizing this scaled-down approach, we have assessed coronary plexus remodeling in transgenic embryonic ventricular endothelial cells.

Primary cell culture is a useful technique for analyzing specific populations of cells, particularly from transgenic mouse embryos at specific developmental stages. Herein, embryonic ventricles are dissected and dissociated, and antibody-conjugated beads recognize and separate out the endothelial cells for further analysis.

عزلة الجنينية البطيني الخلايا البطانية

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling pathways involved in vascular smooth muscle contraction in PASMC from fetal sheep. While sheep make an excellent model of term pulmonary hypertension, they are very expensive and lack the advantage of genetic manipulation found in mice. Conversely, the inability to isolate PASMC from mice was a significant limitation of that system. Here we described the isolation of primary cultures of mouse PASMC from P7, P14, and P21 mice using a variation of the previously described technique of Marshall et al.26 that was previously used to isolate rat PASMC. These murine PASMC represent a novel tool for the study of signaling pathways in the neonatal period. Briefly, a slurry of 0.5% (w/v) agarose + 0.5% iron particles in M199 media is infused into the pulmonary vascular bed via the right ventricle (RV). The iron particles are 0.2 &#956;M in diameter and cannot pass through the pulmonary capillary bed. Thus, the iron lodges in the small pulmonary arteries (PA). The lungs are inflated with agarose, removed and dissociated. The iron-containing vessels are pulled down with a magnet. After collagenase (80 U/ml) treatment and further dissociation, the vessels are put into a tissue culture dish in M199 media containing 20% fetal bovine serum (FBS), and antibiotics (M199 complete media) to allow cell migration onto the culture dish. This initial plate of cells is a 50-50 mixture of fibroblasts and PASMC. Thus, the pull down procedure is repeated multiple times to achieve a more pure PASMC population and remove any residual iron. Smooth muscle cell identity is confirmed by immunostaining for smooth muscle myosin and desmin.

We have developed a novel and reproducible technique to isolate primary cultures of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMC) from mice as young as P7, thereby allowing better study of the signaling pathways involved in neonatal smooth muscle cell contraction and relaxation.

عزل الشريان الرئوي خلايا العضلات الملساء من الفئران حديثي الولادة

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and surrounded by a monolayer of valve endothelial cells (VECs). VECs play essential roles in establishing the valve structures during embryonic development, and are important for maintaining life-long valve integrity and function. In contrast to a continuous endothelium over the surface of healthy valve leaflets, VEC disruption is commonly observed in malfunctioning valves and is associated with pathological processes that promote valve disease and dysfunction. Despite the clinical relevance, focused studies determining the contribution of VECs to development and disease processes are limited. The isolation of VECs from animal models would allow for cell-specific experimentation. VECs have been isolated from large animal adult models but due to their small population size, fragileness, and lack of specific markers, no reports of VEC isolations in embryos or adult small animal models have been reported. Here we describe a novel method that allows for the direct isolation of VECs from mice at embryonic and adult stages. Utilizing the Tie2-GFP reporter model that labels all endothelial cells with Green Fluorescent Protein (GFP), we have been successful in isolating GFP-positive (and negative) cells from the semilunar and atrioventricular valve regions using fluorescence activated cell sorting (FACS). Isolated GFP-positive VECs are enriched for endothelial markers, including CD31 and von Willebrand Factor (vWF), and retain endothelial cell expression when cultured; while, GFP-negative cells exhibit molecular profiles and cell shapes consistent with VIC phenotypes. The ability to isolate embryonic and adult murine VECs allows for previously unattainable molecular and functional studies to be carried out on a specific valve cell population, which will greatly improve our understanding of valve development and disease mechanisms.

The ability to isolate heart valve endothelial cells (VECs) is critical for understanding mechanisms of valve development, maintenance, and disease. Here we describe the isolation of VECs from embryonic and adult Tie2-GFP mice using FACS that will allow for studies determining the contribution of VECs in developmental and disease processes.

عزل خلايا الفئران صمام غشائي

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an important model for cardiovascular disease research. This study demonstrates a simple method to isolate and culture endothelial cells from the mouse aorta without any special equipment. To isolate endothelial cells, the thoracic aorta is quickly removed from the mouse body, and the attached adipose tissue and connective tissue are removed from the aorta. The aorta is cut into 1 mm rings. Each aortic ring is opened and seeded onto a growth factor reduced matrix with the endothelium facing down. The segments are cultured in endothelial cell growth medium for about 4 days. The endothelial sprouting starts as early as day 2. The segments are then removed and the cells are cultured continually until they reach confluence. The endothelial cells are harvested using neutral proteinase and cultured in endothelial cell growth medium for another two passages before being used for experiments. Immunofluorescence staining indicated that after the second passage the majority of cells were double positive for Dil-ac-LDL uptake, Lectin binding, and CD31 staining, the typical characteristics of endothelial cells. It is suggested that cells at the second to third passages are suitable for in vitro and in vivo experiments to study the endothelial biology. Our protocol provides an effective means of identifying specific cellular and molecular mechanisms in endothelial cell physiopathology.

The vascular endothelial cells play a significant role in many important cardiovascular disorders. This article describes a simple method to isolate and expand endothelial cells from the mouse aorta without using any special equipment. Our protocol provides an effective means of identifying mechanisms in endothelial cell physiopathology.

العزلة والثقافة الابتدائية من خلايا الفأر الأورطي غشائي

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular mechanisms underlying endothelial dysfunction in these individuals. However, the recent identification of blood outgrowth endothelial cells (BOECs), generated from circulating endothelial progenitors in adult peripheral blood, may circumvent this limitation by offering an endothelial-like, primary cell surrogate for patient-derived endothelial cells. Beyond their value to understanding endothelial biology and disease modeling, BOECs have potential uses in endothelial cell transplantation therapies. They are also a suitable cellular substrate for the generation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) via nuclear reprogramming, offering a number of advantages over other cell types. We describe a method for the reliable generation, culture and characterization of BOECs from adult peripheral blood for use in these and other applications. This approach (i) allows for the generation of patient-specific endothelial cells from a relatively small volume of adult peripheral blood and (ii) produces cells that are highly similar to primary endothelial cells in morphology, cell signaling and gene expression.

This protocol allows for the reliable generation and characterization of blood outgrowth endothelial cells (BOECs) from a small volume of adult peripheral blood. BOECs can be used as a surrogate for endothelial cells from patients with vascular disorders and as a substrate for the generation of induced pluripotent stem cells.

جيل وثقافة الدم ثمرة غشائي خلايا من الدم المحيطي الإنسان

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

Isolation of Mouse Coronary Endothelial Cells

Endothelial cells line the inner wall of blood vessels and play an important role in the regulation of vascular tone, vascular permeability, and new vascular formation. Endothelial cell dysfunction is implicated in the development and progression of many cardiovascular diseases including ischemic heart disease. To examine the function and characterization of coronary endothelial cells, cell isolation is the first step and it requires high purity and quantity to conduct subsequent experiments. This protocol describes an efficient method to isolate adult mouse coronary endothelial cells. The mouse heart is dissected and minced into small pieces. After the digestion of the heart using dispase and collagenase II, cells are washed&#160;and incubated with magnetic beads which are conjugated with anti-CD31 antibody. The beads with endothelial cells are washed several times and are ready to use in various applications, including imaging and molecular biological experiments. Efficient isolation yields approximately 104 cells per one heart with over 90% purity.

This protocol is prepared to share our method of isolating mouse coronary endothelial cells for the purpose of imaging or to conduct molecular biological experiments.

عزل خلايا الفأر التاجي غشائي

Endothelial cells line the inner wall of blood vessels and play an important role in the regulation of vascular tone, vascular permeability, and new ...