وأيد هذا العمل من قبل وزارة الدفاع غرانت PT074620 (SLJ) وغرانت NIH R01NS245014 (SLJ).

1. كاشف إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد المجمدة Matrigel على الرطب ، وترك ما يكفي من الوقت قبل التجربة (لا تسرع العملية عن طريق الانحباس الحراري النشط). Matrigel يستخدم لإنشاء بيئة 3D تشبه عن كثب مصفوفة خارج الخلية المؤدية إلى الهجرة من الخلايا. أنها توفر الخلايا مع كل ركيزة والميكانيكية التغليف. يتم تخزين Matrigel المجمدة في -20 درجة مئوية. قبل الاستخدام ، يجب أن تكون عليه تدريجا حتى درجة حرارة 0-4 درجة مئوية ، أي إذابة الجليد على الرطب أو في الثلاجة. Matrigel مجموعات لا رجعة فيه لتشكيل هلام في درجة حرارة الحضانة (37 درجة مئوية). لذا فمن غير المستحسن لتسريع ذوبان بغمر الحاويات في المياه الدافئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتعد كسور البروتين من خلال التركيز كهرساوي (IEF) من استخراج البروتين الكلي من قشرة الدماغ من 0 يوم بعد الولادة (P0) النمس. بعد الانفصال ، ومدال الكسور بين عشية وضحاها ضد pH7.2 تريس ، حمض الهيدروكلوريك 20mM لتنظيف مقتطفات من مكونات عازلة التركيز ، والتي قد تكون سامة للأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وكثف البروتين نظام التسليم. البروتينات المستخرجة من قشرة الدماغ على حبات الفلورسنت التي اللاتكس ثم حرر ببطء إلى environment.We البروتينات وجدت أن ميزة مضان يساعد في معالجة البصرية المجهرية ويسمح الكشف عن الآثار غير المباشرة من السهل حتى الحد الأدنى من موقع حبة وديعة ، وعندما لاحظ تحت المجهر الفلورسنت. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10μl من الخرز الفلورسنت ل200μl - 100 من محلول البروتين </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاحتضان 30min في الظلام في RT على شاكر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور الخرز عليها في جهاز للطرد المركزي لمقاعد البدلاء 1hr بسرعة قصوى </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة طاف </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في دوامة باستخدام 10μl متوسطة جديدة ، إعادة تعليق </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 30μl من Matrigel إلى تعليق ، ومزيج جيد ، ومكان على الجليد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المخازن ووسائل الإعلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد والترشيح تعقيم - الاصطناعي السائل النخاعي (aCSF ؛ 124mM كلوريد الصوديوم ، NaHCO 26mM 3 ، 2 ص 4 ناه 1.2mM ، بوكل 3.2mM ، MgSO 4 1.2mM ، CaCl 2 2.4mM ، 10MM الجلوكوز). تبذير للتجمد في aCSF مسبقا ، بحيث يكون جاهزا في وقت تشريح الأنسجة. لجعله ، ضع قارورة بلاستيكية مملوءة aCSF العقيمة في الفريزر -80 درجة مئوية. رصد تجميد كل ذلك في كثير من الأحيان ، وذلك عندما طبقة من الجليد يتراكم في داخل الجدار ، وانكساره والاختلاط مع السائل. كرر حتى قارورة تحتوي معظمها طين الجليدية. أعد العازلة بهذه الطريقة ليس فقط تؤيد بقاء الأنسجة ، ولكن سوف يعقد أيضا درجة حرارة منخفضة لفترة أطول ، وميكانيكيا أقل ضررا للأنسجة من مكعبات الثلج مكتنزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المتوسطة Neurobasal مع N - 2 و B - 27. الملاحق المضافة وفقا لاقتراحات الشركة المصنعة ، فضلا عن 1mg/100ml الجنتاميسين ، 2 مم L - الجلوتامين ، والجلوكوز بنسبة 0.6 ٪ تعقيم عن طريق الترشيح من خلال غشاء 0.22μm. الدفء عند 37 درجة مئوية حتى استخدام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثقافة لوحات <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتعد ثقافة الصف البلاستيكية ستة جيدا لوحات بواسطة تنقيط كل بئر في وسطها مع كمية صغيرة (حوالي 2μl) من Matrigel الباردة باستخدام 20μl ماصة الحافة ، وتعقيمها مما يشكل الجولة ساترة 18mm الزجاج في كل قطرة. لا لوحات ولا coverslips على ضرورة أن يكون خلاف ذلك ثقافة المعالجة. </li></ol></li></ol> 2. تحضير الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على أنسجة المخ <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التخدير العميق مع Euthasol الحيوان ، وإزالة المخ وضعه في الثلج الباردة aCSF </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل نصفي الكرة مع مشرط وشريحة coronally في 500μm باستخدام جهاز للاختيار ، وجمع شرائح في صحن صغير يحتوي على الجليد الباردة aCSF </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل explants (استخدام مجهر تشريح) <ol class="a" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الشرائح التي تحتوي على الفضيلة العقدية (GE) والمناطق تقليم من القشرة التي قد تلتف على شركة جنرال الكتريك ، وتتداخل مع اتخاذ مزيد من الخطوات </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على هاريس أحادي النواة يحمل في منطقة قريبة من سطح البطين من جنرال الكتريك ، والتراجع عن نواة تحتوي في الغالب منطقة البطين ، وإخراجها مع المكبس في المتوسط ​​الجليد الباردة (Fig.1). explants ثلاثة إلى أربعة من 0.5 ويمكن إجراء قطرها ملم من شركة جنرال الكتريك في احد P0 النمس شريحة الدماغ. يرجى ملاحظة أنه في كلتا القوارض وقوارض ، وتنصهر في GES الإنسي والجانبية في هذه المرحلة العمرية. إذا كان جوهر يبقى في شريحة أو عالق إلى أسفل البلاستيكية للطبق ، وحشد من قبل التدفق aCSF مع طرف ماصة ونقل مع ماصة في صحن يحتوي المتوسطة Neurobasal الباردة. الحفاظ على طبق على الجليد الرطب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل دفعة من explants من المتوسط ​​إلى انخفاض عدد كبير من الجليد الباردة Matrigel (حوالي 0.25 - 0.5ml) وضعت في طبق منفصل ، مع الحرص على أن يكون explants مغمورة تماما وتجنب الفقاعات. الحفاظ على طبق على الجليد الرطب. حجم دفعة يعتمد على سرعة مجرى سير العمل. </li></ol></li></ol> 3. الإعداد الثقافة (استخدام مجهر تشريح) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دائما Matrigel وMatrigel المحتوية على الجليد يمزج لتجنب المعالجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ريمكس تعليق حبة ومكان 1 - 2μl أو أقل من تعليق خرزة في الجليد الباردة Matrigel في وسط الزجاج توضع ساترة سابقا في لوحة الثقافة جيدا باستخدام تلميح 20μl ماصة. ندعه مجموعة قليلا ، وتجنب الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلميح باستخدام ماصة 20μl التقاط explants 2 من القائمة المنسدلة Matrigel ووضعها في محيط المرجوة من ودائع حبة (على الأقل 1MM بعيدا عن حافة إيداع) بشكل متناظر على طرفي نقيض. السماح لها مجموعة لمدة لا تزيد 5min في درجة حرارة الغرفة ، والتوقيت المناسب من الخطوات ب و ج أمر بالغ الأهمية. إذا كان الوقت قصيرا جدا وسوف يؤدي ذلك إلى عدم اكتمال التبلور ومكونات الثقافة الإعداد سوف تتحرك عندما يتم تغطيتها بطبقة من Matrigel النهائي ، وإذا كان وقت طويل جدا قد يؤدي إلى جفاف أكثر من الجل وخلق الحواجز المادية التي تعيق حرية تنقل الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية والخرز ويزدرع مع طبقة مسطحة من حوالي 30μl من Matrigel ، امتداده خارج explants (Fig.2). ندعه المنصوص عليها في الحاضنة لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2ml المتوسطة Neurobasal مع ملاحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عند 37 درجة مئوية في ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 ٪ O 2 / 95 ٪ رصد النشاط 2 المهاجرة يوميا. </li></ol> 4. يعيش التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد حضانة لمدة 3-4 أيام ، واستعراض لوحات والثقافة ، واختيار coverslips المصالح. يجب أن تولد explants سحابة موحدة شعاعيا من الخلايا. استبدال coverslips المختار في لوحة الثقافة الجديدة التي سيتم استخدامها في تصوير حي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للcoverslips الجلوس في لوحة جديدة خلال الليل. قبل ان يضع لوحة على المجهر للتصوير ، في خلية ثقافة هود ، واستخدام ملعقة لتحريك العقيمة ساترة من أجل الإفراج عن أي microbubbles التي تجمع بين لوحة ساترة والثقافة الخلية. وسوف تدخل فقاعات الخراب الصور. نقل coverslips إلى وسط البئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمنع التبخر ، وملء الفراغ بين الآبار بالماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل بعناية لوحة من الخلية هود الثقافة المجهر حتى لا تحرك coverslips من وسط البئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعريف نظام التصوير باستخدام برامج التصوير ، ونظرا لطبيعة 3D الإعداد للثقافة أيضا نقل الخلايا عموديا ، وبالتالي فإنه من المهم جمع Z - الطائرات يشمل العمق الكامل للسحابة الهجرة. وينبغي أيضا مدى XY للمنطقة أن التقط مجموعة كبيرة بما يكفي لتغطية المناطق التي يتوقع أن يتم ملؤها من قبل الخلايا المهاجرة أثناء التسجيل ، ويحتوي على ودائع حبة من أجل تسجيل التوجه الزاوي لازدراع والخلايا المهاجرة مقارنة مصدر للبروتين. تنظر أيضا أنه كلما تصوير طائرات Z ، أو أكثر من المساحة التي تغطيها ، والمزيد من الوقت الذي يستغرقه لتسجيل حلقة في نقطة زمنية معينة ، مما اضطر فترات زمنية أطول بين العينات وفقدان القرار الزماني لتعقب الخلية. في حالتنا ، وذلك باستخدام الهدف 10X ، كان المخطط الأمثل لتسجيل بلاط 3X3 لكل من Z - 10 طائرات متباعدة كل 20μm ، على فترات 30min. وجدنا فترات أطول 30 دقيقة تسمح بتحديد لا لبس فيه من الخلايا في وقت نقاط متتالية ، وهو أمر حاسم لتتبع تحركاتهم موثوق بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تصوير مرور الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الوقت المطلوب ، وإزالة لوحة والإصلاح الثقافات في 4 ٪ الفوسفات مخزنة بارافورمالدهيد. يمكن استخدامه لمزيد من التحليل الصرفي وimmunocytochemical. </li></ol> 5. تحليل الحركة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل سلاسل زمنية من الصور المسجلة في شكل أكثر ملاءمة لمزيد من المعالجة ، TIFF ، كونها الأكثر المحمولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتبع حركة الخلايا الفردية على مر الزمن من خلال تسجيل إحداثيات XY ، ويمكن القيام بذلك باستخدام البرمجيات المتاحة بحرية مثل ImageJ (NIH) مع تتبع المختصر في المكونات ، أو أي تطبيق تجارية أخرى مثل ImagePro ، أو Volicity AutoQuant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم المسارات باستخدام Excel أو في منزل البرمجيات المتقدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل خلية تتبع حساب المعلمات الحركية مثل متوسط ​​السرعة ، انحناء المسار ، وتقلب الاتجاه مع مرور الوقت ، المتفرعة ، والانحراف في اتجاه مصدر للبروتينات ، ويمكن القيام به وما الحسابات في MS Excel أو أي جدول ما يعادلها. لكن خبرتنا تشير أنه أبعد ما يكون أكثر إنتاجية لتطوير البرامج النصية في المنزل (باستخدام R ، ماتلاب ، بيثون ، بيرل أو غيرها ، لغات المصدر المفتوح في الغالب) ، كما أنها تسمح للتخصيص أكثر مرونة وإدراج الطرق التحليلية أكثر تطورا من تلك التي تتوفر في تثبيت الأساسية من Excel. </li></ol> 6. ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/2583/2583fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. رسم تخطيطي للأوريجي التشريحيةن من explants. هذا هو رسم لشريحة من الدماغ الاكليلية النمس hemisected. الدوائر الرمادية تشير إلى المنطقة التي اتخذت explants. <img src="/files/ftp_upload/2583/2583fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. رسم توضيحي لإعداد الثقافة. إيداع حبة هو مصدر للبروتينات ، ويتم وضع explants إلى جانبي ، وتتم تغطية جميع العناصر مع Matrigel. <img src="/files/ftp_upload/2583/2583fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. المناظرة قطع المسارات الخلية الملونة التي الأرباع (السهام نحو نقطة إيداع حبة). المسارات الخلية على اليمين وتهاجر نحو مد الكسر ، والذي يظهر على جذب الخلايا ، والخلايا على اليسار وتهاجر نحو ألف جزء ، والذي يظهر في مقاومة الخلايا المهاجرة. <img src="/files/ftp_upload/2583/2583fig4.jpg" alt="الشكل 4"/> الشكل 4. أ) مجموعة من الصور المختارة من timepoints تظهر سحابة متزايدة من الخلايا المهاجرة من أصل ازدراع. يتم تعقب خلية سبيل المثال ، أشار إليه أحد الأسهم ، مع مرور الوقت كما هو مبين أدناه (شريط مقياس 200μm). وتصور هذه يزدرع مع التصوير لمدة 38 ساعة العيش الصور المعروضة هنا هي من الخلايا ترك يزدرع من بداية تسجيل الصور إلى الصورة النهائية. B) الخلية المشار إليها في الجزء ألف في الأوقات المحددة. الخلية يظهر المتفرعة المتكررة (مقياس شريط 50μm).

<ol>
	<li>Caviness, V. S., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+cortical+development:+a+view+from+mutations+in+mice.">Mechanisms of cortical development: a view from mutations in mice.</a> Annu. Rev. Neurosci. 1, 297-326 (1978).</li><li>Gelman, D. M., Martini, F. J., N&#243;brega-Pereira, S., Pierani, A., Kessaris, N., Mar&#237;n, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+embryonic+preoptic+area+is+a+novel+source+of+cortical+GABAergic+interneurons.">The embryonic preoptic area is a novel source of cortical GABAergic interneurons.</a> J. Neurosci. 29, 9380-9389 (2009).</li><li>Hasling, T. A., Gierdalski, M., Jablonska, B., Juliano, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+radialization+factor+in+normal+cortical+plate+restores+disorganized+radial+glia+and+disrupted+migration+in+a+model+of+cortical+dysplasia.">A radialization factor in normal cortical plate restores disorganized radial glia and disrupted migration in a model of cortical dysplasia.</a> Eur. J. Neurosci. 17, 467-780 (2003).</li><li>Hirschberg, A., Deng, S., Korostylev, A., Paldy, E., Costa, M. R., Worzfeld, T., Vodrazka, P., Wizenmann, A., G&#246;tz, M., Offermanns, S., Kuner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+deletion+mutants+reveal+a+role+for+semaphorin+receptors+of+the+plexin-B+family+in+mechanisms+underlying+corticogenesis.">Gene deletion mutants reveal a role for semaphorin receptors of the plexin-B family in mechanisms underlying corticogenesis.</a> Mol. Cell Biol. 30, 764-780 (2010).</li><li>Hatten, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Riding+the+glial+monorail:+a+common+mechanism+for+glial-guided+neuronal+migration+in+different+regions+of+the+developing+mammalian+brain.">Riding the glial monorail: a common mechanism for glial-guided neuronal migration in different regions of the developing mammalian brain.</a> Trends Neurosci. 13, 179-184 (1990).</li><li>Hatten, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+neuronal+migration.">Central nervous system neuronal migration.</a> Annu. Rev. Neurosci. 22, 511-539 (1999).</li><li>Liodis, P., Denaxa, M., Grigoriou, M., Akufo-Addo, C., Yanagawa, Y., Pachnis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lhx6+activity+is+required+for+the+normal+migration+and+specification+of+cortical+interneuron+subtypes.">Lhx6 activity is required for the normal migration and specification of cortical interneuron subtypes.</a> J. Neurosci. 27, 3078-3089 (2007).</li><li>M&#233;tin, C., Alvarez, C., Moudoux, D., Vitalis, T., Pieau, C., Moln&#225;r, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+pattern+of+tangential+neuronal+migration+during+forebrain+development.">Conserved pattern of tangential neuronal migration during forebrain development.</a> Development. 134, 2815-2827 (2007).</li><li>Martini, F. J., Valiente, M., L&#243;pez Bendito, G., Szab&#243;, G., Moya, F., Valdeolmillos, M., Mar&#237;n, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+selection+of+leading+process+branches+mediates+chemotaxis+during+tangential+neuronal+migration.">Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration.</a> Development. , 136-1341 (2009).</li><li>N&#243;brega-Pereira, S., Kessaris, N., Du, T., Kimura, S., Anderson, S. A., Mar&#237;n, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postmitotic+Nkx2-1+controls+the+migration+of+telencephalic+interneurons+by+direct+repression+of+guidance+receptors.">Postmitotic Nkx2-1 controls the migration of telencephalic interneurons by direct repression of guidance receptors.</a> Neuron. 59, 733-745 (2008).</li><li>Pearlman, A. L., Faust, P. L., Hatten, M. E., Brunstrom, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+directions+for+neuronal+migration.">New directions for neuronal migration.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 8, 45-54 (1998).</li><li>Poluch, S., Jablonska, B., Juliano, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+interneuron+migration+in+a+ferret+model+of+cortical+dysplasia.">Alteration of interneuron migration in a ferret model of cortical dysplasia.</a> Cereb Cortex. 18, 78-92 (2008).</li><li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+neural+cell+migration.">Principles of neural cell migration.</a> Experientia. 46, 882-891 (1990).</li><li>Riddle, D. R., Katz, L. C., Lo, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+delivery+of+neurotrophins+into+the+central+nervous+system+using+fluorescent+latex+microspheres.">Focal delivery of neurotrophins into the central nervous system using fluorescent latex microspheres.</a> Biotechniques. 23, 928-937 (1997).</li><li>Wichterle, H., Alvarez-Dolado, M., Erskine, L., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permissive+corridor+and+diffusible+gradients+direct+medial+ganglionic+eminence+cell+migration+to+the+neocortex.">Permissive corridor and diffusible gradients direct medial ganglionic eminence cell migration to the neocortex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 727-732 (2003).</li><li>Xu, Q., Cobos, I., De La Cruz, E., Rubenstein, J. L., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+of+cortical+interneuron+subtypes.">Origins of cortical interneuron subtypes.</a> J. Neurosci. 24, 2612-2622 (2004).</li></ol>

استخدام الحيوان : تم تنفيذ كافة الاجراءات التي تنطوي على الحيوانات وفقا لمبادئ توجيهية USUHS والمعاهد الوطنية للصحة والمؤسسية التي وافقت عليها IACUC USUHS.

هنا نقدم نظام بسيط لدراسة وتحليل السلوك المهاجرة من الخلايا العصبية في استجابة لاشارات كيميائية في المختبر فحوصات الهجرة استخدمت لتحديد الجزيئات التي تؤثر على تنقل خارج الخلية من الخلايا. لدينا نموذج يضمن أن كل خلية فردية درس لديه 3 الأبعاد (3D) مع البيئة التي تتفاعل. انها ميزة كبيرة على الثقافات حيث تهاجر خلايا من explants يضطر للتحرك على سطح مستو من بولي - D - يسين المغلفة ساترة ، وبالتالي يخلو من التفاعل مع المصفوفة خارج الخلية (على سبيل المثال هرشبيرغ آخرون &#39;10؛ 8. ميتين وآخرون. &#39;07). لكن فيما يتعلق على نطاق أوسع لتعقب الخلايا المهاجرة ، فإنه لا يزال 2 الأبعاد ، كما هي مقيدة رأسيا الخلايا إلى المسافة بين ساترة الزجاج على السطح السفلي والعلوي من Matrigel ، وهي رقيقة نسبيا بالمقارنة مع الحرية الأفقي للهجرة. مثل هذا الإعداد يسمح لتسهيل تحليل الحركة ، والذي لا يزال أساسا 2 الأبعاد. كانوا يعملون سابقا نماذج 3D مماثلة تتألف من explants GE - المجاميع أو إعادة الخلايا GE جزءا لا يتجزأ من الكولاجين أو Matrigel ، وذلك باستخدام خلايا من الركام تعبر عن بروتين معين يشير كمصدر للإشارات الكيميائية (مثل Liodis آخرون &#39;07؛ مارتيني وآخرون . بن &#39;09؛ نوبريجا ، وآخرون بيريرا&#39;08 ؛ Wichterle آخرون &#39;03). الطريقة المعروضة هنا يستخدم نظام الإفراج البطيء في شكل حبات اللثي مع بروتينات انضمت للسماح لمستوى مستدام في البيئة المحلية ، وهي نسبة أعلى من البروتينات وأضاف مباشرة إلى المتوسط ​​، مما يجعل نظام مناسب خصوصا عندما يتوفر مبلغ غير محدودة من البروتين ، أو عندما يتم اختبار خليط معقد من البروتينات. لا يقتصر اختيار حبات لمادة اللاتكس المنتجات القائمة ، ويشمل أيضا مواد أخرى ، على سبيل المثال agarose الخرز ، ولكل منها خصائص مختلفة. وذلك لزيادة كثافة مقايسة ، وتستخدم نحن اثنان explants apposed لإيداع الخرز على طرفي نقيض. لضمان وجود منطقة محددة من الأصل ، وقد استخدمنا explants البارزة العقدية كمصدر للخلايا. قمنا بتقييم الاختلافات في أجزاء الإنسي والجانبية للفضيلة العقدية ، ولكن لم ير أي خلافات. وينبغي أن نشير إلى أن هذه الدراسة يستخدم قوارض ، وفي هذه الأنواع البوارز الإنسي والجانبية العقدية الصمامات في وقت سابق من القوارض (Poluch آخرون &#39;08). في الوقت الذي كان أدلى الثقافات (P0) كانت تنصهر في البوارز الإنسي والجانبية العقدية ، على الرغم من العديد من الخلايا لا تزال ملء المخية الحديثة التي يتم توليدها والمهاجرة. ومع ذلك ، إذا كان هو المفضل مصدر متجانسة حقا من الخلايا ، يمكن أن تكون على استعداد تعليق خلية من أنسجة تشريح والمختلط مباشرة مع Matrigel ، أو نسج أسفل بدلا من بيليه واللكم مما أدى إلى جعل &#39;explants. تم تخيف استخدام أنسجة الأنزيمية الهضم لإعداد التعليق الخلية ، بل بحثا عن آثار متبقية من نشاط بروتين يمكن تسييل Matrigel على مدار التجربة. أيضا ، وهو الحرص الواجب أن تطبق على توقيت الإعداد الثقافة. على الرغم من Matrigel يتطلب فترة من ارتفاع درجات الحرارة الى تتبلمر ، وحتى فترة ممتدة قليلا من التعرض لقطرات صغيرة من Matrigel (كما تستخدم في هذا البروتوكول) في الهواء يسبب التجفيف والنتائج في قذيفة التي لا يمكن اختراقها إلى الخلايا المهاجرة والتي لا يمكن محوها من من خلال تغطية لاحقة مع Matrigel الطازجة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </td><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> Neurobasal متوسطة (1X) والسائلة </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td><td></td></tr><tr><td> N - 2 الملحق (100X) ، السائل </td><td> Invitrogen </td><td> 17502-048 </td><td></td></tr><tr><td> B - 27 الملحق (50X) </td><td> Invitrogen </td><td> 0080085 - SA </td><td></td></tr><tr><td> دينار بحريني الغشاء القاعدي Matrigel ماتريكس </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354234 </td><td></td></tr><tr><td> هاريس أحادي النواة ، وحجم 0.5mm </td><td> الإلكترون المجهر العلوم </td><td> 69036-05 </td><td> لكمة تتحمل </td></tr><tr><td> الأخضر Retrobeads التاسع </td><td> Lumafluor ، وشركة </td><td></td><td> اللاتكس المجهرية </td></tr></tbody></table>

migratory behavior of cells generated in ganglionic eminence cultures

الهجرة من الخلايا هي عملية مشتركة تؤدي الى تطوير ونضوج النظام العصبي المركزي الفقاريات (Hatten ، &#39;99). قشرة الدماغ تتكون من نوعين العصبية الأساسية : مثير والمثبطة. تنشأ هذه الخلايا في مناطق متميزة والهجرة الى القشرة على طول مسارات مختلفة (بيرلمان وآخرون ، &#39;98). interneurons المثبطة تهاجر من مصادر هامشية تحت القشرية ، ومعظمهم من مناطق مختلفة من الفضيلة العقدية (غيلمان وآخرون ، &#39;09؛ شو وآخرون ،&#39;04). يتطلب مراقبة حركتهم spatiotemporal الدقيقة التي تفرضها منبهات البيئية ، للسماح لإنشاء التهندس الخلوي السليم والربط في القشرة الدماغية (Caviness وراكيتش ، &#39;78؛ Hatten ،&#39;90 ؛ راكيتش ، &#39;90). لدراسة سلوك المهاجرة من الخلايا المتولدة في المناطق التكاثري للالبوارز العقدية (GE) في حديثي الولادة قوارض في المختبر استخدمنا 3 الترتيب الثقافة الأبعاد في مصفوفة Matrigel دينار بحريني. تألف الإعداد ثقافة explants GE اثنين ومصدرا للبروتينات اختبار المستخرج من قشرة الدماغ وكثف على الفلورسنت التاسع Retrobeads اللاتكس المتمركزة بين explants (Hasling آخرون ، &#39;03؛ ريدل وآخرون ،&#39;97). بعد 2-3 أيام من الثقافة ، وتبدأ الخلايا لتظهر على حافة يزدرع يظهر الميل إلى ترك الأنسجة في اتجاه شعاعي. التصوير مسموح يعيش رصد أنماط الهجرة من دون ضرورة لوضع العلامات أو الوسم الخلايا. عرض GE الخلايا عند تعرضها للكسور من البروتين الحصول عليها من استخراج القشرة isochronic النمس ، والسلوكيات المختلفة والحكم عليها من خلال التحليل الكمي لالحركية الفردية خلايا تتحرك.

Watch this Scientific Journal Video about Migratory Behavior of Cells Generated in Ganglionic Eminence Cultures at JoVE.com

Migratory Behavior of Cells Generated in Ganglionic Eminence Cultures

وقت التصوير انقضاء زراعة الأنسجة 3D يسمح بدراسة سلوك الهجرة من الخلايا الفردية النابعة من سماحة العقدية كرد فعل لاستخراج البروتين مجزأة من القشرة الدماغية.

المهاجرة سلوك الخلايا المولدة في الثقافات سماحة العقدية

Migration of cells is a common process that leads to the development and maturation of the vertebrate central nervous system (Hatten, '99). The cerebral ...

migratory-behavior-of-cells-generated-in-ganglionic-eminence-cultures

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.9K Views.  Uniformed Services University. وقت التصوير انقضاء زراعة الأنسجة 3D يسمح بدراسة سلوك الهجرة من الخلايا الفردية النابعة من سماحة العقدية كرد فعل لاستخراج البروتين مجزأة من القشرة الدماغية.

Video: Migratory Behavior of Cells Generated in Ganglionic Eminence Cultures

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Cryopreservation of Cortical Tissue Blocks for the Generation of Highly Enriched Neuronal Cultures

In this study, we outline a standardized protocol for the successful cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly enriched neuronal cultures. For this protocol the freezing medium used is 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) diluted in Hank's Buffered Salt Solution (HBSS). Blocks of cortical tissue are transferred to cryovials containing the freezing medium and slowly frozen at -1&deg;C/min in a rate-controlled freezing container. Post-thaw processing and dissociation of frozen tissue blocks consistently produced neuronal-enriched cultures which exhibited rapid neuritic growth during the first 5 days in culture and significant expansion of the neuronal network within 10 days. Immunocytochemical staining with the astrocytic marker glial fibrillary acidic protein (GFAP) and the neuronal marker beta-tubulin class III, revealed high numbers of neurons and astrocytes in the cultures. Generation of neural precursor cell cultures after tissue block dissociation resulted in rapidly expanding neurospheres, which produced large numbers of neurons and astrocytes under differentiating conditions. This simple cryopreservation protocol allows for the rapid, efficient, and inexpensive preservation of cortical brain tissue blocks, which grants increased flexibility for later generation of neuronal, astrocyte, and neuronal precursor cell cultures.

Here, we describe a method for efficient cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly enriched neuronal cultures. This simple protocol provides flexibility for later generation of neuronal, astrocyte, and neuronal precursor cell cultures.

الحفظ بالتبريد من كتل الأنسجة القشرية للجيل الثقافات متعلق بالخلايا العصبية التخصيب

In this study, we outline a standardized protocol for the successful cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding fundamental biological mechanisms. Striking progress has been particularly evident in Drosophila, whose extensive toolkit of mutants and transgenic lines provides a convenient model to study evolutionarily-conserved developmental and cell biological mechanisms. We are interested in understanding the mechanisms that control cell fate specification in the adult peripheral nervous system (PNS) in Drosophila. Bristles that cover the head, thorax, abdomen, legs and wings of the adult fly are individual mechanosensory organs, and have been studied as a model system for understanding mechanisms of Notch-dependent cell fate decisions. Sensory organ precursor (SOP) cells of the microchaetes (or small bristles), are distributed throughout the epithelium of the pupal thorax, and are specified during the first 12 hours after the onset of pupariation. After specification, the SOP cells begin to divide, segregating the cell fate determinant Numb to one daughter cell during mitosis. Numb functions as a cell-autonomous inhibitor of the Notch signaling pathway.
Here, we show a method to follow protein dynamics in SOP cell and its progeny within the intact pupal thorax using a combination of tissue-specific Gal4 drivers and GFP-tagged fusion proteins 1,2.This technique has the advantage over fixed tissue or cultured explants because it allows us to follow the entire development of an organ from specification of the neural precursor to growth and terminal differentiation of the organ. We can therefore directly correlate changes in cell behavior to changes in terminal differentiation. Moreover, we can combine the live imaging technique with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) system to assess the dynamics of tagged proteins in mitotic SOPs under mutant or wildtype conditions. Using this technique, we and others have revealed novel insights into regulation of asymmetric cell division and the control of Notch signaling activation in SOP cells (examples include references 1-6,7 ,8).

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

In this video, we describe a method for live cell imaging of asymmetrically dividing sensory organ progenitor cells and epidermal cells in intact Drosophila pupae

تعيش خلية التصوير الحسي للخلايا السليمة في الجهاز السلائف ذبابة الفاكهة شرانق

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

Optogenetic تحفيز السلوك في الهروب<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling of auditory axons within the VIIIth cranial nerve would enhance the study of central auditory circuit development. This approach is challenging because multiple sensory organs of the inner ear contribute to the VIIIth nerve 1. Moreover, markers that reliably distinguish auditory versus vestibular groups of axons within the avian VIIIth nerve have yet to be identified. Auditory and vestibular pathways cannot be distinguished functionally in early embryos, as sensory-evoked responses are not present before the circuits are formed. Centrally projecting VIIIth nerve axons have been traced in some studies, but auditory axon labeling was accompanied by labeling from other VIIIth nerve components 2,3. Here, we describe a method for anterograde tracing from the acoustic ganglion to selectively label auditory axons within the developing VIIIth nerve. First, after partial dissection of the anterior cephalic region of an 8-day chick embryo immersed in oxygenated artificial cerebrospinal fluid, the cochlear duct is identified by anatomical landmarks. Next, a fine pulled glass micropipette is positioned to inject a small amount of rhodamine dextran amine into the duct and adjacent deep region where the acoustic ganglion cells are located. Within thirty minutes following the injection, auditory axons are traced centrally into the hindbrain and can later be visualized following histologic preparation. This method provides a useful tool for developmental studies of peripheral to central auditory circuit formation.

Here we describe a microdissection technique followed by fluorescent dye injection into the acoustic ganglion of early chick embryos for selective tracing of auditory axon fibers in the nerve and hindbrain.

انتقائية للبحث عن المفقودين من ألياف العصب السمعي في الطيور الدهليزي القوقعي الجنينية

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by repeated, time-lapse in vivo imaging in live rodents. These studies were made possible by straightforward surgical procedures, which enabled optical access for a prolonged period of time without repeat surgical procedures. In contrast, analogous studies of the spinal cord have been previously limited to only a few imaging sessions, each of which required an invasive surgery. As previously described, we have developed a spinal chamber that enables continuous optical access for upwards of 8 weeks, preserves mechanical stability of the spinal column, is easily stabilized externally during imaging, and requires only a single surgery. Here, the design of the spinal chamber with its associated surgical implements is reviewed and the surgical procedure is demonstrated in detail. Briefly, this video will demonstrate the preparation of the surgical area and mouse for surgery, exposure of the spinal vertebra and appropriate tissue debridement, the delivery of the implant and vertebral clamping, the completion of the chamber, the removal of the delivery system, sealing of the skin, and finally, post-operative care. The procedure for chronic in vivo imaging using nonlinear microscopy will also be demonstrated. Finally, outcomes, limitations, typical variability, and a guide for troubleshooting are discussed.

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

In this video, we describe a procedure for implanting a chronic optical imaging chamber over the dorsal spinal cord of a live mouse. The chamber, surgical procedure, and chronic imaging are reviewed and demonstrated.

إجراء لغرس الدائرة العمود الفقري للالطولية<em&gt; في فيفو</em&gt; التصوير من الحبل الشوكي ماوس

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

فحوصات لكشف الهياكل التي تعكس الأشعة فوق البنفسجية، وتحديد أهميتها في تفضيل ماتي باستخدام مولي شراعية الزعانف<em&gt; البكيللية latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

Decades of research in many model organisms have led to the current concept of synaptic plasticity underlying learning and memory formation. Learning-induced changes in synaptic transmission are often distributed across many neurons and levels of processing in the brain. Therefore, methods to visualize learning-dependent synaptic plasticity across neurons are needed. The fruit fly Drosophila melanogaster represents a particularly favorable model organism to study neuronal circuits underlying learning. The protocol presented here demonstrates a way in which the processes underlying the formation of associative olfactory memories, i.e., synaptic activity and their changes, can be monitored in vivo. Using the broad array of genetic tools available in Drosophila, it is possible to specifically express genetically encoded calcium indicators in determined cell populations and even single cells. By fixing a fly in place, and opening the head capsule, it is possible to visualize calcium dynamics in these cells whilst delivering olfactory stimuli. Additionally, we demonstrate a set-up in which the fly can be subjected, simultaneously, to electric shocks to the body. This provides a system in which flies can undergo classical olfactory conditioning - whereby a previously na&#239;ve odor is learned to be associated with electric shock punishment - at the same time as the representation of this odor (and other untrained odors) is observed in the brain via two-photon microscopy. Our lab has previously reported the generation of synaptically localized calcium sensors, which enables one to confine the fluorescent calcium signals to pre- or postsynaptic compartments. Two-photon microscopy provides a way to spatially resolve fine structures. We exemplify this by focusing on neurons integrating information from the mushroom body, a higher-order center of the insect brain. Overall, this protocol provides a method to examine the synaptic connections between neurons whose activity is modulated as a result of olfactory learning.

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

Here we present a protocol with which pre- and/or postsynaptic calcium can be visualized in the context of Drosophila learning and memory. In vivo calcium imaging using synaptically localized calcium sensors is combined with a classical olfactory conditioning paradigm such that the synaptic plasticity underlying this type of associative learning may be determined.

في فيفو البصرية الكالسيوم التصوير من اللدونة متشابك الناجمة عن التعلم في دروفوميلا ميلغاستر

Decades of research in many model organisms have led to the current concept of synaptic plasticity underlying learning and memory formation. ...

Combining Behavior and EEG to Study the Effects of Mindfulness Meditation on Episodic Memory

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has examined the behavioral and neural effects of mindfulness meditation on episodic memory. Here we present a protocol that combines mindfulness meditation training, an episodic memory task, and EEG to examine how mindfulness meditation changes behavioral performance and the neural correlates of episodic memory. Subjects in a mindfulness meditation experimental group were compared to a waitlist control group. Subjects in the mindfulness meditation experimental group spent four weeks training and practicing mindfulness meditation. Mindfulness was measured before and after training using the Five Facet Mindfulness Questionnaire (FFMQ). Episodic memory was measured before and after training using a source recognition task. During the retrieval phase of the source recognition task, EEG was recorded. The results showed that mindfulness, source recognition behavioral performance, and EEG theta power in right frontal and left parietal channels increased following mindfulness meditation training. In addition, increases in mindfulness correlated with increases in theta power in right frontal channels. Therefore, results obtained from combining mindfulness meditation training, an episodic memory task, and EEG reveal the behavioral and neural effects of mindfulness meditation on episodic memory.

Here we present a protocol for combining mindfulness meditation training, an episodic memory task, and EEG to understand the behavioral and neural effects of mindfulness meditation on episodic memory.

الجمع بين السلوك وتخطيط كهربية الدماغ لدراسة آثار التأمل الذهني على الذاكرة العرضية

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has ...

AAV Deployment of Enhancer-Based Expression Constructs In Vivo in Mouse Brain

Enhancers are binding platforms for a diverse array of transcription factors that drive specific expression patterns of tissue- and cell-type-specific genes. Multiple means of assessing non-coding DNA and various chromatin states have proven useful in predicting the presence of enhancer sequences in the genome, but validating the activity of these sequences and finding the organs and developmental stages they are active in is a labor-intensive process. Recent advances in adeno-associated virus (AAV) vectors have enabled the widespread delivery of transgenes to mouse tissues, enabling in vivo enhancer testing without necessitating a transgenic animal. This protocol shows how a reporter construct that expresses EGFP under the control of a minimal promoter, which does not drive significant expression on its own, can be used to study the activity patterns of candidate enhancer sequences in the mouse brain. An AAV-packaged reporter construct is delivered to the mouse brain and incubated for 1-4 weeks, after which the animal is sacrificed, and brain sections are observed under a microscope. EGFP appears in cells in which the tested enhancer is sufficient to initiate gene expression, pinpointing the location and developmental stage in which the enhancer is active in the brain. Standard cloning methods, low-cost AAV packaging, and expanding AAV serotypes and methods for in vivo delivery and standard imaging readout make this an accessible approach for the study of how gene expression is regulated in the brain.

AAV Deployment of Enhancer-Based Expression Constructs In Vivo in Mouse Brain

This protocol describes a novel rAAV-based transient enhancer-reporter assay. This assay can be used to induce enhancer-driven expression in vivo in the mouse brain.

نشر AAV لبنيات التعبير القائمة على المحسن في الجسم الحي في دماغ الفأر

Enhancers are binding platforms for a diverse array of transcription factors that drive specific expression patterns of tissue- and cell-type-specific ...