InDevR يقر المعاهد الوطنية للصحة / NIAID U01AI070276 وR43AI077112 لتمويل هذا العمل.

1. التضخيم باستخدام عينة RT - PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخراج الحمض النووي الريبي الفيروسي من المواد الطبية أو الفيروسية. عزل الفيروسات باستخدام MinElute Qiagen كيت سبين بالاشتراك مع الآلية حمض النووي QIAcube منصة استخراج يتم تنفيذ عمليات الاستخراج على 200 عينة ميكرولتر مع حجم شطف النهائي من 60 ميكرولتر. مقتطفات المحل في -70 درجة مئوية أو أقل لاستخدامها لاحقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في منطقة خالية من القالب ، وإعداد مزيج الرئيسي RT - PCR على الجليد وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. لدمج البيوتين خلال RT - PCR ، واستخدام خليط dNTP biotinylated بدلا من الصانع الموردة dNTP المزيج. تكلفة استخدام خليط dNTP biotinylated أقل من 1 دولار أمريكي / مقايسة. ويمكن أيضا طرق بديلة لإدماج البيوتين ، مثل استخدام التمهيدي biotinylated استخدامها. إضافة التمهيدي يمزج بتركيزات النهائي من 1.0 ميكرومتر لأنفلونزا A ، B 1.0 ميكرومتر لأنفلونزا ، و 0.14 ميكرومتر للرقابة الداخلية. الانفلونزا مجموعة التمهيدي تضخيم الجزء الجينات مصفوفة (1032 NT المنتج) وباء انفلونزا التمهيدي تعيين تضخيم شريحة الجين غير الهيكلية (811 NT المنتج). كل مجموعة التمهيدي FluChip التمهيدي يحتوي على واحد مع مجموعة 5 &#39;فسفوريل لتسهيل توليد واحدة من الحمض النووي الذين تقطعت بهم السبل عن طريق الهضم الأنزيمي مع نوكلياز خارجية امدا التالية PCR. ينجم عن ذلك المنتج الذين تقطعت بهم السبل واحد يتطلب مرات التهجين أقصر بكثير من ما يعادل ضعف الذين تقطعت بهم السبل ، ويقصر كثيرا من الوقت الفحص الشامل. مزيج معدة سلفا لهذه المشارع وكذلك التحكم في قالب الحمض النووي الريبي الداخلية المتوفرة من InDevR إلى الباحثين المهتمين على أساس محدود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة لفترة وجيزة وتوزيع 18 ميكرولتر من مزيج الرئيسي في أنابيب PCR رقيقة الجدران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب نقل على الجليد إلى منطقة مناسبة للعمل بالإضافة إلى ذلك القالب ، قالب وإضافة 2 ميكرولتر لكل أنبوب التفاعل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب نقل PCR لcycler الحرارية ، وتشغيل ملف الحرارية التالية : النسخ العكسي عند 50 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، وتعطيل انزيم / التنشيط عند 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، و 40 دورات PCR من 95 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ، 55 درجة C ل30S ، و 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة ، والتمديد النهائي في 72 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. </li></ol> 2. تهجين RT - PCR المنتجات لميكروأرس منخفض الكثافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل توليد الحمض النووي الذين تقطعت بهم السبل واحد لتهجين FluChip ، تحضير الخليط الهضم الأنزيمي من خلال الجمع بين 1.0 نوكلياز خارجية انزيم امدا ميكرولتر ، 2.2 ميكرولتر من رد فعل العازلة المصاحبة لها ، و 0.8 ميكرولتر من nuclease خالية من المياه. هذه المبالغ هي لعينة واحدة ، ولكن يمكن تحجيمها لمجرد العدد الكلي للعينات ليتم هضمها. إزالة عينات من cycler الحرارية وإضافة 4 ميكرولتر من الخليط على استعداد لفعل كل لهضم حبلا فسفرته للمنتج PCR. عودة إلى عينات cycler الحرارية وبرنامج cycler الحرارية إلى 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة تليها 95 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة لإتمام عملية الهضم الأنزيمي والخطوات تجزئة الحرارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبع ميكروأرس الأنفلونزا المخصصة المستخدمة على الشرائح الزجاجية ألدهيد functionalized من قبل شركة ميكروأرس] التطبيقية (تيمبي ، من الألف إلى الياء). يتم الجمع بين 5&#39; - الأمينية التقاط تسلسل إنهاء وجود مخزن مؤقت الأمثل اكتشاف وطباعتها في التركيز النهائي من 20 ميكرومتر (باستثناء تسلسل السيطرة الإيجابية التي قد بالإضافة إلى تعديل 3&#39; البيوتين ، ورصدت عند تركيز النهائي من 500 نانومتر) . ويستخدم الاتصال غير اكتشاف الأسلوب ، مع بقعة قطرها 300 ميكرون الأمثل للمركز والى ارض الملعب وسط 700 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ميكروأرس من مربع التخزين والتهجين تطبيق الآبار تستخدم مرة واحدة في جميع أنحاء ميكروأرس عن طريق إزالة الطبقة الواقية وضغط بشدة حول محيط جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرائح في مكان بن لغسل تحتوي على 110 مل من المياه النقية لغسل ما قبل 5 دقائق التهجين باستخدام شاكر المداري في 60-90 دورة في الدقيقة. تجفيف مجموعة عن طريق لمس الأنسجة ممسحة بلطف إلى حافة البئر ، والسماح للمياه لتكون الأشرار بعيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 22 الجمع بين ميكرولتر من الاحتياطي تهجين 2X مع كل من المنتجات ssDNA مجزأة ، والماصة 40 ميكرولتر الحلول التهجين في آبار ميكروأري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لهجن الشرائح في غرفة مغلقة الرطوبة لمدة 60 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الشرائح من الغرفة الرطوبة ، وشطف لفترة وجيزة مع المصفوفات اغسل الاحتياطي D في زجاجة شطف قبل ان يضع في رف الشريحة. عادة ما يكون حجم الاحتياطي شطف الغسيل D هو 2 مل لكل صفيف. مكان الرف الشريحة التي تحتوي على الشرائح في غسل بن العازلة التي تحتوي على 110 ألف لتر اغسل بن شاكر مكان على مدار الساعة 60-90 دورة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة شريحة من رفوف مخزن غسل ، وشطف لفترة وجيزة مع اغسل الاحتياطي D ، نقل الشريحة إلى رف بن تحتوي اغسل B الاحتياطي ، ويهز في 60-90 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جافة بلطف الصفيف على كل شريحة ، ومكان الشرائح المجففة في الغرفة الرطوبة في التحضير للخطوات ampliPHOX الكشف اللونية. </li></ol> 3. ampliPHOX : وسم المنتجات المهجنة ورقائق المعايرة مع ampliTAG <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضم<html> ميكرولتر من 10 ampliTAG و 20 ميكرولتر من العازلة ampliTAG 2X ، و 10 ميكرو لتر من المياه النقية لكل مجموعة بحيث تتم معالجتها. يمكن تحجيم حجم كاشف ببساطة عن مجموع عدد من العينات. تأكد من أن يعد ما يكفي من خليط وضع العلامات على حساب لجميع المصفوفات والمصفوفات عينة المعايرة اللازمة. عدد رقائق المعايرة اللازمة يعتمد على ما إذا كنت إجراء المعايرة الكامل (عن أداة جديدة أو كثيرا جديدة من الكواشف) ، أو مجرد أداة الاختيار. لمعايرة كامل ، ينبغي أن يكون المسمى رقائق المعايرة 3 ، وكاشف للفحص ، ينبغي أن يكون المسمى مجرد رقاقة المعايرة واحد. يرجى ملاحظة أن قبل أن يتم تسمية صفائف المعايرة ، فإنها ينبغي أن تمر عبر هذه الخطوة ما قبل الغسيل التهجين التي تم وصفها سابقا للمصفوفات الأنفلونزا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 40 ميكرولتر مزيج التسمية على كل مجموعة وتسمح العلامات رد فعل على المضي قدما في غرفة مغلقة الرطوبة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف على الفور مع غسل صفائف الاحتياطي D في زجاجة شطف قبل وضع الشرائح في حامل الشرائح. نقل إلى رف بن تحتوي على 110 مل من اغسل الاحتياطي C ، ويهز في 60-90 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تستخدم بن لغسل الثانية المملوءة الماء النقي ، نفذ ثلاث مرات متتالية الانخفاضات المياه قصيرة لإزالة بقايا الملح. تجفيف صفائف عن طريق لمس الأنسجة ممسحة بلطف إلى حافة الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هي الآن بشكل صحيح مع ميكروأرس المسمى ampliTAG ، ويمكن تنفيذ ما تبقى من إجراءات الكشف ampliPHOX. وينبغي الانتهاء من التصوير وتنشيط ضوئي صفائف المسمى في غضون 24 ساعة ، ويمكن تخزين صفائف إضافية في خانة الشريحة الظلام حتى الاستخدام. </li></ol> 4. ampliPHOX : المعايرة ، تضخيم الإشارات ، والتصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره ampliPHOX على القارئ وضمان ampliVIEW البرنامج هو على استعداد لتنشيط ضوئي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الوقت الأمثل تنشيط ضوئي باستخدام رقائق المعايرة. بالإضافة إلى مقدمة موجزة الذي يلي ، كما هو مبين في هذا الإجراء بالتفصيل في دليل التشغيل ampliPHOX. رقائق معايرة تحتوي على سلسلة من التخفيفات لمراقبة تسلسل biotinylated التي تستخدم لتحسين حساسية الفحص ، وذلك بهدف تحقيق أقصى قدر من عدد من الصفوف من الشريحة المعايرة التي تنتج إشارة إيجابية على النحو الذي يحدده البرنامج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ampliPHY من 4 درجات مئوية ، والسماح لتسخين إلى درجة حرارة الغرفة ، ودوامة لفترة وجيزة إلى المزيج. 3 الماصة ميكرولتر من محسن ampliPHY في قارورة ampliPHY ، ودوامة جيدا لمدة 10 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 40 بالتساوي ميكرولتر من محلول ampliPHY في ميكروأري تحتوي جيدا ampliTAG المسمى مجموعة ، وضمان عدم وجود فقاعات. إغلاق فيال ampliPHY بين كل طلب. إدراج الشريحة ميكروأري في خليج تنشيط ضوئي للقارئ ampliPHOX. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمعايرة مجموعة الأولى ، استخدام الوقت تنشيط ضوئي الافتراضية في مربع &quot;تايم&quot; على لوحة lefthand من البرنامج ، وانقر على الأخضر &quot;ابدأ&quot; الزر لبدء تنشيط ضوئي. عند الانتهاء ، إزالة مجموعة وشطف مع الماء النقي لإزالة ampliPHY الزائدة. وينبغي تشكيل البوليمر واضحة على بعض البقع تكون الآن مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للبقع البوليمر لتجف لمدة 2 دقيقة ، ثم توزيع قطرتين من ampliRED على الصفيف والسماح للتلوين والمضي قدما لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، وشطف ميكروأري بسرعة مع المياه النقية والجافة يمسح بمنديل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج ميكروأري في خليج التصوير من القارئ ampliPHOX ، وانقر على زر &#39;التقاط صورة جديدة&quot; في التبويب التصوير. التقط مرة واحدة ، وضبط المحاصيل وحفظ الصورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في التبويب تحليل ، حدد قناع المعايرة وتشيب على زر &quot;الموضع تلقائي&quot; لبدء التحليل. يقوم البرنامج تلقائيا إنتاج &quot;تسجيل ملخص&quot; تظهر النتائج كميا. بناء على هذه النتائج ، يتم ضبط الوقت تنشيط ضوئي بنسبة 10 ثانية لمجموعة المعايرة الثانية ، ويتم تكرار هذا الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم تحديد الوقت الأمثل تنشيط ضوئي ، يمكن معالجة المصفوفات باستخدام العينة نفسها ، وتضخيم إشارة بروتوكول التصوير المستخدمة للمصفوفات المعايرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة يتم التقاط صورة للمصفوفات العينة ، يمكن للقناع للتخطيط الخاص مجموعة معينة مثل الأنفلونزا تخطيط مجموعة وصفها هنا يمكن created.The ampliVIEW البرمجيات هي قادرة على أداء الآلي تحليل الصور وتوليد النتائج الأنفلونزا التصنيف الفرعي لكل عينة. </li></ol> 5. ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/2682/2682fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. توضيح تخطيطي لطريقة الكشف ampliPHOX اللونية. (A) هو تهجين الحمض النووي المستهدف Biotinylated إلى كل بقعة في الصفيف ، و (ب) المسمى مع ampliTAG. (C) ثم يضاف ampliPHY الحل ، و (D) تعرضها للضوء لتشكيل البوليمر البقع مرئية. (E) والملون لاحقا البقع البوليمر شكلت مع صبغة غير سامة لتحسين التباين. ontent &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/2682/2682fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2 : (أ) منخفض الكثافة ميكروأري الأنفلونزا التخطيط. متواليات 1-7 و 10-13 أنفلونزا الهدف ألف ، ومتواليات 8 و 9 باء الانفلونزا هدف (B) ampliPHOX و (ج) من الصور مضان H1N1 رواية 2009 (&#39;انفلونزا الخنازير&#39;) عينة تبين نمط الكشف عن نفسه من قبل كل من الأساليب. <img src="/files/ftp_upload/2682/2682fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. من اليسار إلى اليمين ، وصور للممثلة ampliPHOX H3N2 A ، الأنفلونزا البشرية المنشأ H1N1 ، H1N1 2009 رواية (الخنازير المنشأ) ، وعينة سلبية. جميع أنواع فرعية 3 تظهر أنماط متميزة بصريا على صفيف. إشعار في السلبية التي ينظر اليها فقط MS2 السيطرة الداخلية ، مما يدل على التضخيم RT - PCR لم الكبت.

<ol>
	<li>Kumar, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Widely+Used+Diagnostics+"DNA-Microarray"-A+Review.">The Widely Used Diagnostics "DNA-Microarray"-A Review.</a> Amer J Inf Dis. 5, 207-218 (2009).</li><li>Miller, M. B., Tang, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Concepts+of+Microarrays+and+Potential+Applications+in+Clinical+Microbiology.">Basic Concepts of Microarrays and Potential Applications in Clinical Microbiology.</a> Clin Microbiol Rev. 22, 611-633 (2009).</li><li>Mikhailovich, V., Gryadunov, D., Kolchinsky, A., Makarov, A. A., Zasedatelev, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+microarrays+in+the+clinic:+infectious+diseases.">DNA microarrays in the clinic: infectious diseases.</a> BioEssays. 30, 673-682 (2008).</li><li>Call, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+for+pathogen+detection+using+DNA+microarrays.">Challenges and opportunities for pathogen detection using DNA microarrays.</a> Crit Rev Microbiol. 31, 91-99 (2005).</li><li>Raoult, D., Fournier, P. E., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+does+the+future+hold+for+clinical+microbiology.">What does the future hold for clinical microbiology.</a> Nat Rev Microbiol. 2, 151-159 (2004).</li><li>Dawson, E. D., Rowlen, K. L., Wang, Q., Tao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MChip:+A+Single+Gene+Diagnostic+for+Influenza+A.">MChip: A Single Gene Diagnostic for Influenza A.</a> Influenza: Molecular Virology. , (2010).</li><li>Gall, A., Hoffman, B., Harder, T., Grund, C., Ehricht, R., Beer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+hemagglutinin+subtyping+and+pathotyping+of+avian+influenza+viruses+by+a+DNA+microarray.">Rapid hemagglutinin subtyping and pathotyping of avian influenza viruses by a DNA microarray.</a> J Virol Meth. 160, 200-205 (2009).</li><li>Townsend, M. B., Dawson, E. D., Mehlmann, M., Smagala, J. A., Dankbar, D. M., Moore, C. L., Smith, C. B., Cox, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FluChip:+Experimental+evaluation+of+a+diagnostic+influenza+microarray.">FluChip: Experimental evaluation of a diagnostic influenza microarray.</a> J Clin Microbiol. 44, 2863-2871 (2006).</li><li>Wang, Z., Daum, L. T., Vora, G. J., Metzgar, D., Walter, E. A., Canas, L. C., Malanosky, A. P., Lin, B., Stenger, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+influenza+viruses+with+resequencing+arrays.">Identifying influenza viruses with resequencing arrays.</a> Emerg Inf Dis. 12, 638-646 (2006).</li><li>Kessler, N., Ferraris, O., Palmer, K., Marsh, W., Steel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+DNA+Flow-Thru+Chip,+a+three-dimensional+biochip,+for+typing+and+subtyping+of+influenza+viruses.">Use of the DNA Flow-Thru Chip, a three-dimensional biochip, for typing and subtyping of influenza viruses.</a> J Clin Microbiol. 42, 2173-2185 (2004).</li><li>Kuck, L. R., Taylor, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photopolymerization+as+an+innovative+detection+technique+for+low-density+microarrays.">Photopolymerization as an innovative detection technique for low-density microarrays.</a> Biotechniques. 45, 179-186 (2008).</li><li>Avens, H. J., Bowman, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+fluorescent+polymerization-based+signal+amplification+for+sensitive+and+non-enzymatic+biodetection+in+antibody+arrays.">Development of fluorescent polymerization-based signal amplification for sensitive and non-enzymatic biodetection in antibody arrays.</a> Acta Biomat. 6, 83-89 (2010).</li><li>Sikes, H. D., Jenison, R., Bowman, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+detection+using+polymerization-based+amplification.">Antigen detection using polymerization-based amplification.</a> Lab on a Chip. 9, 653-656 (2008).</li></ol>

كل من المؤلفين هم من موظفي InDevR ، وشركة كيان للربح. InDevR هو تسويق هذه التكنولوجيا ampliPHOX الموصوفة هنا.

كشف اللونية ampliPHOX التكنولوجيا المقدمة هنا هي سريعة ، رخيصة بديلة للكشف لون واحد مضان لانخفاض الكثافة ميكروأري التطبيقات. أظهرت تخطيطي في الشكل 1 ، ويستند على مبدأ الكشف عن استخدام تسمية photoinitiator (1B). في وجود حل مونومر المحتوية على (1C) ، والتعرض للضوء يسبب photoinitia...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> كاشف / المعدات </th><th> الصانع </th><th> كتالوج # </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> Qiagen سبين الفيروسات MinElute كيت </td><td> Qiagen </td><td> 57704 </td><td> شطف واحد 60 ميكرولتر </td></tr><tr><td> QIAcube </td><td> Qiagen </td><td> 9001292 </td><td> اختياري </td></tr><tr><td> ABI 9800 Cycler السريع الحرارية </td><td> تطبيق النظم البيولوجية </td><td> 4441166 </td><td></td></tr><tr><td> Qiagen OneStep RT - PCR طقم </td><td> Qiagen </td><td> 210210 </td><td> لا تستخدم عدة dNTPs </td></tr><tr><td> 2X الاحتياطي الإكتشاف </td><td> شركة InDevR </td><td> MI - 5007 </td><td></td></tr><tr><td> Biotinylated dNTP ميكس </td><td> شركة InDevR </td><td> MI - 5009 </td><td></td></tr><tr><td> امدا نوكلياز خارجية </td><td> التكنولوجيات الحيوية Epicentre </td><td> LE032K </td><td> 2500 U ، 10U/μl </td></tr><tr><td> FluChip التمهيدي مزيج </td><td> InDevR </td><td> N / A </td><td> لم يتوفر حتى الآن للبيع </td></tr><tr><td> شاكر المداري </td><td> Madell التكنولوجيا </td><td> ZD - 9556 - A </td><td></td></tr><tr><td> سلال غسيل </td><td> شركة InDevR </td><td> MI - 4002 </td><td></td></tr><tr><td> غسل الرفوف </td><td> شركة InDevR </td><td> MI - 4003 </td><td></td></tr><tr><td> 2X تهجين العازلة </td><td> شركة InDevR </td><td> MI - 5004 </td><td></td></tr><tr><td> المعايرة شيبس </td><td> شركة InDevR </td><td> AP - 5006 </td><td></td></tr><tr><td> غسل المخازن ميلادي </td><td> شركة InDevR </td><td> MI - 5005 </td><td></td></tr><tr><td> ampliRED </td><td> شركة InDevR </td><td> AP - 5004 </td><td></td></tr><tr><td> ampliTAG </td><td> شركة InDevR </td><td> AP - 5001 </td><td></td></tr><tr><td> 2X ampliTAG العازلة </td><td> شركة InDevR </td><td> AP - 5002 </td><td></td></tr><tr><td> ampliPHY ، ampliPHY محسن </td><td> شركة InDevR </td><td> AP - 5003 </td><td></td></tr></tbody></table>

ampliphox colorimetric detection on a dna microarray for influenza

ظهرت ميكروأرس الحمض النووي كأداة قوية للكشف عن العوامل المسببة للأمراض. 1-5 وعلى سبيل المثال ، أثبتت العديد من الأمثلة على القدرة على نوع وسلالة فيروس الانفلونزا. 6-11 تحديد وتصنيف الفرعي لأنفلونزا على ميكروأرس الحمض النووي وتطبيقاتها في القطاعين العام الصحة وعيادة للكشف المبكر والتدخل السريع ، والتقليل من تأثير وباء الأنفلونزا. مضان التقليدية في الوقت الراهن الكشف ميكروأري الأكثر استخداما الأسلوب. لكن ، وكما استخدموا تكنولوجيا متطورة تقدم نحو الاستخدام السريري (1) ، واستبدال الأجهزة غالية مع انخفاض تكلفة تكنولوجيا الكشف واظهار خصائص الأداء مماثلة لمضان جعل المقايسات ميكروأري أكثر جاذبية وفعالة من حيث التكلفة. المقصود من الكشف اللونية ampliPHOX التكنولوجيا لتطبيقات البحوث ، ووضع حد للكشف داخل احدة من حيث الحجم من 11 مضان التقليدية ، مع الميزة الرئيسية التي يجري تقريبي عشرة أضعاف تكلفة أقل مقارنة صك الماسحات الضوئية اللازمة لميكروأري مبائر ميكروأري مضان الكشف. ميزة أخرى هي من الحجم الصغير الصك الذي يسمح لقابلية ومرونة ، على عكس مضان الصكوك التقليدية. لأن التكنولوجيا البلمرة ليست كما الخطية بطبيعتها كما كشف مضان ، ومع ذلك ، هو الأنسب لانخفاض الكثافة ميكروأري التطبيقات التي المطلوب هو نعم / لا جواب عن وجود تسلسل معين ، مثل الكشف عن صفائف الممرض. في الوقت الحاضر كثافة بقعة أقصى متوافقة مع الكشف ampliPHOX هو ~ 1800 البقع / الصفيف. بسبب محدودية كثافة البقعة ، ميكروأرس العالي الكثافة ليست مناسبة للكشف عن ampliPHOX. هنا ، نقدم ampliPHOX تكنولوجيا الكشف اللونية كوسيلة لتضخيم إشارة على ميكروأري منخفض الكثافة وضعت لكشف وتشخيص فيروسات الأنفلونزا (FluChip). على الرغم من أن هذا البروتوكول يستخدم FluChip (أ ميكروأري الحمض النووي) ، وتطبيق واحد محدد للكشف ampliPHOX ، أي دمج ميكروأري الهدف biotinylated يمكن الكشف عن وصفت بطريقة مماثلة. تصميم وميكروأري biotinylation هدف ليتم القبض هي من مسؤولية المستخدم. مرة واحدة وقد تم القبض على الهدف biotinylated على الصفيف ، يمكن إجراء الكشف عن طريق وضع علامات ampliPHOX لأول مرة مع مجموعة المتقارن streptavidin التسمية (ampliTAG). عند التعرض للضوء باستخدام أداة قارئ ampliPHOX ، البلمرة حل مونومر (ampliPHY) يحدث فقط في المناطق التي تحتوي على ampliTAG المسمى الأهداف. ويمكن تشكيل البوليمر الملون في وقت لاحق مع حل غير سامة لتحسين النقيض البصرية ، تليها التصوير والتحليل باستخدام مجموعة من البرامج البسيطة (ampliVIEW). ويمكن إجراء فحص كامل من FluChip الامم المتحدة واستخراج عينة لينتج حوالي 6 ساعات ، ويمكن الانتهاء من الخطوات المذكورة أعلاه الكشف ampliPHOX في حوالي 30 دقيقة.

Watch this Scientific Journal Video about ampliPHOX Colorimetric Detection on a DNA Microarray for Influenza at JoVE.com

ampliPHOX Colorimetric Detection on a DNA Microarray for Influenza

وتقدم تكنولوجيا الكشف ampliPHOX اللونية كبديل غير مكلف للكشف عن ميكروأرس مضان. استنادا بلمرة ضوئية المنشأ ، ampliPHOX تنتج البقع البوليمر الصلبة مرئية للعين المجردة في دقائق معدودة. ثم يتم تصوير النتائج وتفسيرها تلقائيا مع حزمة برامج بسيطة لكنها قوية.

ampliPHOX الكشف اللونية على ميكروأري الحمض النووي لمكافحة الأنفلونزا

DNA microarrays have emerged as a powerful tool for pathogen detection.1-5  For instance, many examples of the ability to type and subtype influenza virus ...

ampliphox-colorimetric-detection-on-a-dna-microarray-for-influenza

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.9K Views.  InDevR Inc.. وتقدم تكنولوجيا الكشف ampliPHOX اللونية كبديل غير مكلف للكشف عن ميكروأرس مضان. استنادا بلمرة ضوئية المنشأ ، ampliPHOX تنتج البقع البوليمر الصلبة مرئية للعين المجردة في دقائق معدودة. ثم يتم تصوير النتائج وتفسيرها تلقائيا مع حزمة برامج بسيطة لكنها قوية.

Video: ampliPHOX Colorimetric Detection on a DNA Microarray for Influenza

Generation of Recombinant Influenza Virus from Plasmid DNA

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally established in 1999 1,2 plasmid-based reverse genetic techniques to generate recombinant viruses have revolutionized the influenza research field because specific questions have been answered by genetically engineered, infectious, recombinant influenza viruses. Such studies include virus replication, function of viral proteins, the contribution of specific mutations in viral proteins in viral replication and/or pathogenesis and, also, viral vectors using recombinant influenza viruses expressing foreign proteins 3.

Rescue of influenza A viruses from plasmid DNA is a basic and essential experimental technique that allows influenza researchers to generate recombinant viruses to study multiple aspects in the biology of influenza virus, and to be used as potential vectors or vaccines.

توليد المؤتلف فيروسات الأنفلونزا من الحمض النووي البلازميد

Efforts by a number of influenza research groups have been pivotal in the development and improvement of influenza A virus reverse genetics. Originally ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of infection with influenza virus alone. Instead, most individuals are thought to have succumbed to a secondary bacterial infection, predominately caused by the bacterium Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). The synergistic relationship between infections caused by influenza virus and the pneumococcus has subsequently been observed during the 1957 Asian influenza virus pandemic, as well as during seasonal outbreaks of the virus (reviewed in 1, 2). Here, we describe a protocol used to investigate the mechanism(s) that may be involved in increased morbidity as a result of concurrent influenza A virus and S. pneumoniae infection. We have developed an infant murine model to reliably and reproducibly demonstrate the effects of influenza virus infection of mice colonised with S. pneumoniae. Using this protocol, we have provided the first insight into the kinetics of pneumococcal transmission between co-housed, neonatal mice using in vivo imaging 3.

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A concurrent infection with influenza A virus is one of the factors implicated in the induction of invasive pneumococcal disease during asymptomatic Streptococcus pneumoniae carriage. Here we describe a mixed infection method using infant mice to investigate the synergism between these two respiratory pathogens.

باستخدام التصوير Bioluminescent بالتحقيق في التآزر بين العقدية الرئوية والأنفلونزا من الفيروسات في الفئران الرضع

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Using a Pan-Viral Microarray Assay (Virochip) to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence of novel viral pathogens, such as SARS coronavirus and 2009 pandemic H1N1 influenza virus, that are not detectable by traditional methods. To address these challenges, we have previously developed and validated a pan-viral microarray platform called the Virochip with the capacity to detect all known viruses as well as novel variants on the basis of conserved sequence homology1. Using the Virochip, we have identified the full spectrum of viruses associated with respiratory infections, including cases of unexplained critical illness in hospitalized patients, with a sensitivity equivalent to or superior to conventional clinical testing2-5. The Virochip has also been used to identify novel viruses, including the SARS coronavirus6,7, a novel rhinovirus clade5, XMRV (a retrovirus linked to prostate cancer)8, avian bornavirus (the cause of a wasting disease in parrots)9, and a novel cardiovirus in children with respiratory and diarrheal illness10. The current version of the Virochip has been ported to an Agilent microarray platform and consists of ~36,000 probes derived from over ~1,500 viruses in GenBank as of December of 2009. Here we demonstrate the steps involved in processing a Virochip assay from start to finish (~24 hour turnaround time), including sample nucleic acid extraction, PCR amplification using random primers, fluorescent dye incorporation, and microarray hybridization, scanning, and analysis.

Using a Pan-Viral Microarray Assay Virochip to Screen Clinical Samples for Viral Pathogens

The Virochip is a pan-viral microarray designed to simultaneously detect all known viruses as well as novel viruses on the basis of conserved sequence homology. Here we demonstrate how to run a Virochip assay to analyze clinical samples for the presence of both known and unknown viruses.

باستخدام الفحص ميكروأري عموم الفيروسي (Virochip) إلى الشاشة العينات السريرية لمسببات الأمراض الفيروسية

The diagnosis of viral causes of many infectious diseases is difficult due to the inherent sequence diversity of viruses as well as the ongoing emergence ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

الإنتاجية العالية لطريقة الكشف عن فيروس الإنفلونزا

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and new strains are continually emerging. Swine are able to be infected by diverse lineages of influenza A virus making them important hosts for the emergence and maintenance of novel influenza A virus strains. Sampling pigs in diverse settings such as commercial swine farms, agricultural fairs, and live animal markets is important to provide a comprehensive view of currently circulating IAV strains. The current gold-standard ante-mortem sampling technique (i.e. collection of nasal swabs) is labor intensive because it requires physical restraint of the pigs. Nasal wipes involve rubbing a piece of fabric across the snout of the pig with minimal to no restraint of the animal. The nasal wipe procedure is simple to perform and does not require personnel with professional veterinary or animal handling training. While slightly less sensitive than nasal swabs, virus detection and isolation rates are adequate to make nasal wipes a viable alternative for sampling individual pigs when low stress sampling methods are required. The proceeding protocol outlines the steps needed to collect a viable nasal wipe from an individual pig.

The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.

الأنف المسحات لمكافحة الأنفلونزا A الكشف عن الفيروسات وعزل من الخنازير

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

A Miniaturized Glycan Microarray Assay for Assessing Avidity and Specificity of Influenza A Virus Hemagglutinins

Influenza A virus (IAV) hemagglutinins recognize sialic acids on the cell surface as functional receptors to gain entry into cells. Wild waterfowl are the natural reservoir for IAV, but IAV can cross the species barrier to poultry, swine, horses and humans. Avian viruses recognize sialic acid attached to a penultimate galactose by a &#945;2-3 linkage (avian-type receptors) whereas human viruses preferentially recognize sialic acid with a &#945;2-6 linkage (human-type receptors). To monitor if avian viruses are adapting to human type receptors, several methods can be used. Glycan microarrays with diverse libraries of synthetic sialosides are increasingly used to evaluate receptor specificity. However, this technique is not used for measuring avidities. Measurement of avidity is typically achieved by evaluating the binding of serially diluted hemagglutinin or virus to glycans adsorbed to conventional polypropylene 96-well plates. In this assay, glycans with &#945;2-3 or &#945;2-6 sialic acids are coupled to biotin and adsorbed to streptavidin plates, or are coupled to polyacrylamide (PAA) which directly adsorb to the plastic. We have significantly miniaturized this assay by directly printing PAA-linked sialosides and their non PAA-linked counterparts on micro-well glass slides. This set-up, with 48 arrays on a single slide, enables simultaneous assays of 6 glycan binding proteins at 8 dilutions, interrogating 6 different glycans, including two non-sialylated controls. This is equivalent to 18x 96-well plates in the traditional plate assay. The glycan array format decreases consumption of compounds and biologicals and thus greatly enhances efficiency.

Using a printed glycan microarray strategy, a conventional 96-well plate assay was miniaturized for analysis of influenza A virus hemagglutinin avidity and specificity for sialic acid containing receptors.

والمنمنمة غليكان ميكروأري الفحص لتقييم الطمع وخصوصية الأنفلونزا من الفيروسات Hemagglutinins

Influenza A virus (IAV) hemagglutinins recognize sialic acids on the cell surface as functional receptors to gain entry into cells. Wild waterfowl are the ...

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus (IAV), virus fusion with the endosomal membrane as well as the subsequent disassembly of the viral capsid, called uncoating, is governed by the ionic conditions inside endocytic vesicles. The early steps in the virus life cycle are hard to study because endosomes cannot be directly accessed experimentally, creating the need for an in vitro approach. Here, we describe a method based on velocity gradient centrifugation of purified virions through a two-layer glycerol gradient, which enables analysis of the IAV core and its stability. The gradient contains a non-ionic detergent (NP-40) in its lower layer to remove the viral membrane by solubilization as the virus sediments toward the bottom. At neutral pH, viral cores are pelleted as stable structures. The major core components, matrix protein (M1) and the viral ribonucleoproteins (vRNPs), can be clearly identified in the pellet fraction by SDS-PAGE. Decreasing the pH to 6.0 or lower in the bottom layer selectively removes M1 from the pellet followed by release of vRNPs at more acidic conditions. Viral protein bands on Coomassie-stained gels can be subjected to densitometric quantification to monitor intermediate states of IAV disassembly. Besides pH, other factors that influence viral core stability can be assessed, such as salt concentration and putative viral uncoating factors, simply by modifying the detergent-containing glycerol layer accordingly. Taken together, the presented technique allows highly reproducible and quantitative analysis of viral uncoating in vitro. It can be applied to other enveloped viruses that undergo complex uncoating processes.

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

Disassembly of influenza A virus cores during virus entry into host cells is a multistep process. We describe an in vitro method to analyze the early stages of viral uncoating. In this approach, velocity gradient centrifugation is used to biochemically dissect the steps that initiate uncoating under defined conditions.

في المختبر التفكيك من الأنفلونزا من الفيروسات Capsids بواسطة الطرد المركزي التدرج

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus ...

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality every year. The Influenza A and B assay was the first CLIA-waived molecular rapid flu test available. The Influenza A and B test works by employing isothermal amplification with influenza-specific primers followed by target detection with molecular beacon probes. Here, the performance of the Influenza A and B assay on frozen, archived nasopharyngeal swab (NPS) specimens stored in viral transport medium (VTM) were compared to a respiratory panel assay.
The performance of the Influenza A and B assay was evaluated by comparing the results to the respiratory panel reference method. The sensitivity for total influenza virus A was 67.5% (95% CI (CI), 56.6-78.5) and the specificity was 86.9% (CI, 71.0-100). For influenza virus B testing, the sensitivity and specificity were 90.2% (CI, 68.5-100) and 98.8% (CI, 68.5-100), respectively.
This system has the advantage of a significantly shorter test time than any other currently available molecular assay and the simple, pipette-free procedure runs on a fully integrated, closed, small-footprint system. Overall, the Influenza A and B assay evaluated in this study has the potential to serve as a point-of-care rapid influenza diagnostic test.

We describe a rapid, molecular-based Influenza A and B assay. The Influenza assay detects each target within 15 min by employing isothermal amplification with influenza-specific primers followed by target detection with molecular beacon probes. The Influenza A and B assay is user-friendly and required minimal hands-on time to perform.

سرعة الكشف الجزيئي والتمايز من فيروسات الأنفلونزا A و B

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...