نعترف مراكز الأسهم بلومينغتون لسلالة الطاير. وأيد هذا العمل من خلال منحة بحثية من BBSRC (BB / G008973 / 1).

1. يطير التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تهجين جميع المسوخ، GAL4 / UAS وخطوط أخرى مع سلالة wildtype، مثل CSw-، لمدة ستة أجيال على الأقل قبل التجارب السلوكية للسيطرة على الخلفية الوراثية 26. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو الذباب على معيار دقيق الذرة والخميرة والعسل الاسود الحمية الغذائية تحت دائرة الضوء المظلم 00:12 ساعة عند 25 درجة مئوية ما لم تتطلب معالجات معينة ودرجة حرارة مختلفة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد آثار التحوير التعبير: استخدام 18 ° C لمنع التعبير عن الجينات المحورة في GAL4 Gal80 TS (نظام الهدف) من خلال تطوير وثم نقل الذباب إلى 30 درجة مئوية الحاضنة قبل 1-2 أيام من التجربة السلوكية. إجراء التجربة في 30 ° C لتحديد آثار التحوير التعبير 3،4،6،7،14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء التجارب باستخدام قنوات TRPA1 تنشيط الحرارة لتحفيز الخلايا العصبية: رفع الذباب عند 23 درجة مئوية، وهي درجة حرارة معروفةللحفاظ على قناة غير نشطة، ثم تحول إلى غرفة السلوك عند 30 درجة مئوية لتفعيل TRPA1 معربا عن الخلايا العصبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء التجارب باستخدام درجة حرارة Shibire الحساسة لمنع انتاج متشابك 11، 14،24: جر الذباب في 18 ° C وإجراء الاختبار عند 30 درجة مئوية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الذباب 1-2 أيام قبل التجربة والاعتماد عليها في مجموعات من حوالي 25 تحت ضوء CO 2 التخدير. تخزين الذباب على الأقل O / N في قارورة الغذاء (بدون خميرة) في 25 ° C (ما لم تتطلب معالجات محددة درجة حرارة مختلفة) والرطوبة النسبية 70٪ في غرفة التحكم للبيئة مع ضوء 00:12 ساعة: الظروف المظلمة حتى وقت التجربة. ملاحظة: هذا التخزين يسمح الذباب إلى التأقلم على المحك التعلم اللاحقة التي أجريت في غرفة التحكم بيئيا، والتي كان لها الظروف المثلى للتعلم ذبابة الفاكهة، والأهم، ويزيل أي ENVI اليوميةronmental الاختلافات التي قد أثرت على النمط الظاهري السلوكية. </li></ol> 2. إعداد قبل التجربة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء التجارب في صنع العرف البرسبيكس T-متاهة (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق بانتظام الأنبوب المناسب لضمان أن يتم الحصول على ختم محكم أثناء التجربة. إذا لزم الأمر، تغيير O-الحلقات التي ختم المقصورات الداخلية للT-المتاهة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع شبكات مصنوعة خصيصا النحاس داخل أنابيب التدريب. فحص وتنظيف هذه الشبكات بصورة منتظمة، واستبدالها إذا أكسدة. إرفاق شبكات الأسلاك النحاسية لعن طريق مقاطع التمساح التي تعمل على مربع التبديل متصلة مشجعا الكهربائية. استخدام الفولتميتر للتأكد من أن الجهاز هو تقديم الصدمة المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ز استخدام المشابك لعقد متاهة بإحكام لتفادي أي تسرب الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق T-المتاهة للأنابيب التي تمتد إلى مضخة الهواء، للسماح الروائح التي يمكن استخلاصها عبر الذباب وإزالتها في وقت لاحق من T-المتاهة. الحفاظ على الهواء معتدلتدفق في ~ 2 لتر / دقيقة </li></ol> 3. رائحة التخفيفات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام اثنين من الروائح المختلفة بتركيزات مثل الذباب وتبين أن تفضيل متساوية لكلا الروائح. استخدام 4 methylcyclohexanol (1:67) و 3-الأوكتانول (1: 100) المخفف في الزيوت المعدنية 7،13. ملاحظة: تحديد بعناية هذه التركيزات، والتي سوف تختلف من مختبر. على سبيل المثال للآخرين استخدامه لكلا 01:10 الروائح 24. وتشمل غيرها من الروائح التي يشيع استخدامها خلات الإيثيل وخلات الأميل ايزو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 30 ميكرولتر من رائحة المخفف إلى رائحة فنجان حسب الطلب وضعت في كتلة رائحة بواسطة أنبوب بلاستيكي مغطاة أعلى مثقبة تسمح الهواء التي يمكن استخلاصها على رائحة في كوب، وبالتالي تعريض الذباب إلى عمود رائحة. </li></ol> 4. بروتوكول التدريب (الشكلان 1 و 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للبالغين تكييف صدمة حاسة الشم، أداء جميع التجارب تحت ضوء أحمر خافت (أي.، أحمر LED)، والذي يسمح للباحث أن يرى ولكن يمنع فلوريداذ من رؤية، وبالتالي السماح للذباب للتركيز على الشم بدلا من المدخلات البصرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدخال الذباب في أنبوب التدريب ومن ثم نعلق على T-متاهة والسماح لهم للتكيف مع أنبوب وتدفق الهواء لمدة 90 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقديم الرائحة الأولى (4 methylcyclohexanol، صحة الأم والطفل) مع صدمة 60-V (تتألف من اثني عشر نبضات 1.25 ثانية مع 3.75 ثانية فترات بين النبض) لمدة إجمالية قدرها 60 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع صدمة مع فترة راحة 30 ثانية من دون رائحة أو صدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقديم الرائحة الثانية (3-الأوكتانول، أكتوبر) لمدة 60 ثانية دون صدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع صدمة مع فترة راحة 30 ثانية من دون رائحة أو صدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الذباب من غرفة الى غرفة التدريب المركزية للT-متاهة من خلال تحويل T-متاهة على جانبها وضجيجا أسفل T-المتاهة على سطح ناعم بلطف مثل حصيرة الماوس القديمة. الحفاظ على الذباب في الغرفة المركزية لمدة 90 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تناسب أنابيب الاختيار في بوttom الجهاز لتشكيل T-المتاهة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لقياس التعلم، ونقل الذباب إلى نقطة خيار T-المتاهة، حيث تعرضوا في وقت واحد إلى كل من الروائح والتحرك نحو واحد. إجراء فترة اختبار لمدة 120 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مصيدة الذباب في أنابيب الاختيار عن طريق تحريك الغرفة المركزية يصل بذلك حظر نهايات الأنابيب الاختيار. جمع الذباب في كل ذراع من T-متاهة وفي المقصورة المركزية في قارورة الغذاء والعد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لقياس الذاكرة، وجمع الذباب بعد التدريب (4.6) ونقلها من T-المتاهة للقارورة الغذاء دون الخميرة. متجر الذباب في الظلام عند 25 درجة مئوية والرطوبة 70٪ للمرة المتبقية الضروري تحديد المرحلة الذاكرة الفائدة (انظر المقدمة). إعادة تقديم الذباب إلى T-متاهة كما هو الحال في المرحلة 4.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عن الذاكرة طويلة الأمد، واستخدام متاهة عرف بني الذي يسمح عدة دفعات من الذباب لتدريبهم في وقت واحد. 5 دورات إدارة التدريب مع 15 دقيقة الفاصلة بين دورة (سباCED) أو دون فاصل بين دورة (حشدت). الحفاظ على الذباب في 18 درجة مئوية والرطوبة 70٪ في الظلام حتى الاختبار. قبل الاختبار، نقل الذباب إلى 25 درجة مئوية والسماح لهم التأقلم على الأقل 1 ساعة. تقييم الذاكرة طويلة الأجل 24 ساعة بعد التدريب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التجارب السلوكية، وتنظيف الأكواب مع رائحة الماء الساخن والمنظفات عديم الرائحة. بعد التجفيف، ومعطف الكؤوس مع 10 ميكرولتر sigmacote. تجفيف sigmacote عن طريق التسخين في فرن الميكروويف. أحيانا تنظيف T-متاهة أنابيب المقوى وكتل رائحة بالماء الساخن والمنظفات عديم الرائحة. </li></ol> 5. حساب مؤشر الأداء: مقياس ذاكرة الذباب &quot; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب مؤشر الأداء (PI) لكل حالة حيث وصل عدد الذباب تجنب رائحة تقرن صدمة (CS -) ناقص عدد من الذباب اختيار رائحة تقرن صدمة (CS +) مقسوما على العدد الكلي للذباب (CS - CS + +) 1. PEمؤشر rformance (PI) = (# CS - الذباب - # CS + الذباب) / (# مجموع الذباب) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب PI النهائي للتجربة عن طريق حساب متوسط ​​PI التجربة التي كانت في صحة الأم والطفل ورائحة تقرن صدمة واحدة في أكتوبر التي كانت رائحة-تقرن صدمة. هذا يزيل أي تحيز من الذباب وجود تفضيل العالي للرائحة واحدة. </li></ol> 6. الضوابط حسي حركي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء رائحة حدة عن طريق إدخال ~ 40-50 الذباب في T-متاهة 6،7،17. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 90 ثانية، نقل الذباب إلى نقطة الاختيار، والسماح لهم 2 دقيقة للاختيار بين الروائح والهواء النقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع والاعتماد الذباب. حساب النسبة المئوية تجنب بقسمة مجموع عدد الذباب الذي اختار رائحة من تلك التي شاركت في الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من الصدمة التفاعل 6،7،17، وإدخال الذباب في حجرة الصدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 90 ثانية من الراحة، إدارة صدمة كهربائية 60-V DC، والتي من الذباب يمكن الهروب إلى مماثلةأنبوب دون صدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سماح 2 دقيقة لاختيار الذباب. جمع والاعتماد الذباب. حساب النسبة المئوية صدمة تجنب بقسمة عدد من الذباب الذي تجنب صدمة الهروب بواسطة أنبوب صدمة من قبل عدد من الذباب في التجربة. تشمل الذباب التي تبقى في غرفة مركزية في مجموعه تلك التي نجت من الصدمات الكهربائية. </li></ol>

<ol>
	<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster.">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> Journal of Comparative Physiology A. 157, 263-277 (1985).</li><li>Bolduc, F. V., Tully, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruit+flies+and+intellectual+disability.">Fruit flies and intellectual disability.</a> Fly (Austin). 3, 91-104 (2009).</li><li>McGuire, S. E., Deshazer, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+olfactory+learning+and+memory+research+in+Drosophila+melanogaster.">Thirty years of olfactory learning and memory research in Drosophila melanogaster.</a> Prog Neurobiol. 76, 328-347 (2005).</li><li>Keene, A. C., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+olfactory+memory:+single+genes+to+complex+neural+circuits.">Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits.</a> Nat Rev Neurosci. 8, 341-354 (2007).</li><li>Chiang, H. C., Wang, L., Xie, Z., Yau, A., Zhong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3+kinase+signaling+is+involved+in+Abeta-induced+memory+loss+in+Drosophila.">PI3 kinase signaling is involved in Abeta-induced memory loss in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107, 7060-7065 (2010).</li><li>Kanellopoulos, A. K., Semelidou, O., Kotini, A. G., Anezaki, M., Skoulakis, E. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+deficits+consequent+to+reduction+of+the+Fragile+X+mental+retardation+protein+result+from+metabotropic+glutamate-mediated+inhibition+of+cAMP+signalling+in+Drosophila.">Learning and memory deficits consequent to reduction of the Fragile X mental retardation protein result from metabotropic glutamate-mediated inhibition of cAMP signalling in Drosophila.</a> J Neurosci. 32, 13111-13124 (2012).</li><li>Malik, B. R., Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+and+CaMKII+function+in+the+mushroom+body+a&#8217;/&#223;&#8217;+neurons+during+Drosophila+memory+formation.">CASK and CaMKII function in the mushroom body a&#8217;/&#223;&#8217; neurons during Drosophila memory formation.</a> Front Neural Circuits. 7, 52 (2013).</li><li>Gerber, B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+larva+as+a+model+for+studying+chemosensation+and+chemosensory+learning:+a+review.">The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review.</a> Chem Senses. 32, 65-89 (2007).</li><li>Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+regulates+CaMKII+autophosphorylation+in+control+of+synaptic+growth+and+appetitive+learning.">CASK regulates CaMKII autophosphorylation in control of synaptic growth and appetitive learning.</a> Front Molecular Neuroscience. 6, 27 (2013).</li><li>Apostolopoulou, A. A., Widmann, A., Rohwedder, A., Pfitzenmaier, J. E., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetitive+associative+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae.">Appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (72), e4334 (2013).</li><li>Tonoki, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+impairs+intermediate-term+behavioral+memory+by+disrupting+the+dorsal+paired+medial+neuron+memory+trace.">Aging impairs intermediate-term behavioral memory by disrupting the dorsal paired medial neuron memory trace.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 109, 6319-6324 (2012).</li><li>Yamazaki, D., Horiuchi, J., Nagano, S., Tamura, T., Saitoe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+DCO+mutation+suppresses+age-related+memory+impairment+without+affecting+lifespan.">The Drosophila DCO mutation suppresses age-related memory impairment without affecting lifespan.</a> Nat Neurosci. 10, 478-484 (2007).</li><li>Cavaliere, S., Malik, B. R., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ+channels+regulate+age-related+memory+impairment.">KCNQ channels regulate age-related memory impairment.</a> PLoS One. 8, e62445 (2013).</li><li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly.">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li><li>Isabel, G., Pascual, A., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exclusive+consolidated+memory+phases+in+Drosophila.">Exclusive consolidated memory phases in Drosophila.</a> Science. 304, 1024-1027 (2004).</li><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory.">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr Biol. 23, R752-R763 (2013).</li><li>Tully, T., Preat, T., Bonyton, S. C., Del Vecchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila.">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li><li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila.">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning and memory. 16, 19-27 (2009).</li><li>Le Glou, E., Seugnet, L., Shaw, P. J., Preat, T., Gouguel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+consolidated+memory+retrieval+following+sleep+deprivation+in+Drosophila.">Circadian modulation of consolidated memory retrieval following sleep deprivation in Drosophila.</a> Sleep. 35 (10), 1377-1384 (2012).</li><li>Placais, P. Y., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+favour+survival+under+food+shortage,+the+brain+disables+costly+memory.">To favour survival under food shortage, the brain disables costly memory.</a> Science. 339, 440-442 (2012).</li><li>Hirano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fasting+launches+CRTC+to+faciltate+long-term+memory+formation+in+Drosophila.">Fasting launches CRTC to faciltate long-term memory formation in Drosophila.</a> Science. 339, 443-446 (2012).</li><li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae.">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li><li>Claridge-Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Writing+memories+with+light-addressable+reinforcement+circuitry.">Writing memories with light-addressable reinforcement circuitry.</a> Cell. 139, 405-415 (2009).</li><li>Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+dopamine+pathways+induce+aversive+odor+memories+with+different+stability.">Three dopamine pathways induce aversive odor memories with different stability.</a> PLoS Genetics. 8, e1002768 (2012).</li><li>Connolly, J. B., Tully, T., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a Practical Approach. , 265-319 (1998).</li><li>Connolly, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+disrupted+by+impaired+Gs+signaling+in+Drosophila+mushroom+bodies.">Associative learning disrupted by impaired Gs signaling in Drosophila mushroom bodies.</a> Science. 274, 2104-2107 (1996).</li><li>Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traces+of+Drosophila+memory.">Traces of Drosophila memory.</a> Neuron. 70, 8-19 (2011).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+kenyon+cells+in+situ.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila kenyon cells in situ.</a> J Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Young, J. M., Wessnitzer, J., Armstrong, J. D., Webb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elemental+and+non-elemental+olfactory+learning+in+Drosophila.">Elemental and non-elemental olfactory learning in Drosophila.</a> Neurobiol Learn Mem. 96, 339-353 (2011).</li><li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. .. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+alcohol+reward.">Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li><li>Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+reveals+neural+circuit+mechanisms+of+fly+memory.">Dopamine reveals neural circuit mechanisms of fly memory.</a> Trends Neurosci. 33, 457-464 (2010).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

صدمة فحص حاسة الشم تعلم الكبار ذبابة الفاكهة المعروضة هنا يسمح تحليل الآليات الجزيئية الكامنة مراحل مختلفة من الذاكرة، بما في ذلك الذاكرة طويلة المدى 15-17. وكذلك تحديد تأثير ايقاعات كل يوم 18، والنوم 19، والنظام الغذائي 20،21، 11-13 الشيخوخة وأمراض الاعصاب 5 والعلاجات المخدرات 5،6،19 على الذاكرة. وقد وضعت العديد من المناهج القوية مؤخرا للتصوير وظيفي من الدوائر العصبية التي تتوسط ذاكرة الشم في الذباب 3،4،7،11،16،27. هذه التقنيات optogenetic تستخدم ذخيرة واسعة من مختلف المروجين متاحة في ذبابة الفاكهة 14،16. وتستخدم هذه المروجين للتعبير عن صحفيين الكالسيوم ومخيم المشفرة وراثيا في الخلايا العصبية الذاكرة 16،27 لدراسة تأثير الطفرات الجينية المحددة على آثار الذاكرة. عشراستخدام البريد المروجين مشروط والطفرات في البالغين يسمح دراسة دور بعد التنموي للمنتج الجين في الذاكرة 3،4،6،7،13،14. التصوير والنهج السلوكية يمكن دمجها مع قنوات الخفيفة وتنشيط الحرارة لتحفيز أو تثبيط الخلايا العصبية المختلفة في الدائرة الذاكرة 11،14،16،22-24 لزيادة توضيح وظيفتها. وعلاوة على ذلك، الجسم الفطر الخلايا العصبية الذاكرة يمكن الوصول إلى كامل الخلية التسجيلات المشبك التصحيح 28، وتقنيات رياضية وحسابية تستخدم لنمذجة ذبابة الفاكهة ذاكرة الشم 29. هذه التطورات التجريبية، جنبا إلى جنب مع أشكال مختلفة من البروتوكولات الذاكرة الترابطية قدم هنا، ذبابة الفاكهة تسمح لاستخدامها لنمذجة التغيرات الجزيئي وعلى مستوى الدائرة في الذاكرة الترابطية التي تحدث في استجابة لمكافأة والعقاب، والدافع، والإدمان، والشيخوخة والمرض 5،6،11-13،16،30-31.

الطريقة المعروضة هنا هو أن وصفها تالي وكوين مع بعض التعديلات الصغيرة 1. يتم تنفيذ التجربة على مرحلتين: يتم تدريب الذباب في المرحلة الأولى، ويتم اختبار الذباب تدريبهم في المرحلة الثانية. خلال التدريب، ويتعرض مجموعة من الذباب في الوقت نفسه إلى رائحة 1 (CS +) والصدمات الكهربائية (US) في أنبوب التدريب. الذباب ثم يتلقى رائحة 2 (CS -) دون حدوث صدمة كهربائية. ويسمى هذا الاقتران واحد من رائحة معينة مع صدمة التدريب 1 دورة، والروائح التي تستخدم في معظم الأحيان هم 4 methylcyclohexanol (صحة الأم والطفل) و 3-الأوكتانول (أكتوبر). التدريب دورة واحدة يؤدي إلى تشكيل لمرحلة عطوب الذاكرة التي يمكن الكشف عنها لمدة تصل إلى 7 ساعات. ومع ذلك، يتم عادة اختبار الذاكرة على الفور لتحديد ما يطلق عليه التعلم، واكتساب أو 2 دقيقة الذاكرة. يشار الذاكرة قياسها 30 دقيقة أو 1 ساعة إلى والذاكرة على المدى القصير، في حينيشار 3 ساعة إلى الذاكرة كذاكرة منتصف المدة. تعرض الذباب لدورات تدريبية متكررة مع الفجوات بين دورات التدريب (تدريب متباعدة) يؤدي إلى شكل موحد من الذاكرة طويلة الأمد التي هي CREB النسخ وتعتمد تستغرق ما يصل إلى أسبوع. التدريب دون ثغرات (التدريب حشدت) يؤدي إلى تشكيل الذاكرة مقاومة للتخدير (ARM)، والتي تشبه إلى الذاكرة طويلة المدى، وعادة ما تقاس 24 ساعة بعد 5 دورات التدريب 7،13،15-17،20،21. مع هذا النهج، يمكن تحديد تأثير مختلف طفرات الجينات على هذه المراحل المختلفة من الذاكرة. التعبير يحركها المروج من الجينات المحورة أو ضوئية حساسة للحرارة لتنشيط أو منع النشاط العصبي للخلايا العصبية محددة يسمح احد لتحقيق الخلايا العصبية التي تكون مطلوبة من أجل اكتساب الذاكرة، وتوطيد واسترجاع 3،4،11،15،16،20، 22-24. عادة يتم قياس الذاكرة في 1 ساعة عند دراسة ضعف الذاكرة المرتبط بالعمر لأن هذا ويبدو أن مكتب إدارة السجلات من الذاكرة عرضة بصفة خاصة لآثار الشيخوخة 11-13. يتم إجراء مجموعة كاملة من الضوابط السلوكية والوراثية وبين التجارب الذاكرة، على سبيل المثال، لتحديد ما إذا كان عيب الأداء هو بسبب عيب الذاكرة المركزي أو خلل الحسي المحيطي الذي يمنع الطيران من الاستشعار صدمة أو جديلة حاسة الشم 5 -7، 1 7، 25،26.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:28px;">Materials</td>
			<td style="width:139px;height:28px;">Source</td>
			<td style="width:116px;height:28px;">Cat. No.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">3-Octanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">218405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">4-Methyl cyclohexanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">15,309-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Benzaldehyde</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">418099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Mineral Oil</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Fluka</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">BP2629-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Hexyl acetate</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">108154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Fructose</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:22px;">Agarose</td>
			<td style="width:139px;height:22px;">Bioline</td>
			<td style="width:116px;height:22px;">BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drosophila adult olfactory shock learning

وقد استخدمت ذبابة الفاكهة في التجارب تكييف الكلاسيكية لأكثر من 40 عاما، مما يسهل إلى حد كبير فهمنا من الذاكرة، بما في ذلك توضيح الآليات الجزيئية المشاركة في الأمراض المعرفية 1-7. التعلم والذاكرة يمكن أن يعاير في اليرقات لدراسة تأثير الجينات العصبية النمائية 8-10 والذباب لقياس مساهمة الجينات اللدونة الكبار 1-7. وعلاوة على ذلك، عمر قصير من ذبابة الفاكهة يسهل تحليل الجينات التوسط المرتبطة بالعمر ضعف الذاكرة 5،11-13. توافر العديد من المروجين محرض أن تقسيم الجهاز العصبي ذبابة الفاكهة يجعل من الممكن تحديد متى وأين مطلوب الجينات التي تهم الذاكرة العادية وكذلك التتابع مختلف جوانب التعزيز إشارة 3،4،14،16. دراسة الذاكرة في ذبابة الفاكهة الكبار يسمح لتحليل مفصل للالسلوك والدوائر المعنية وقياس الذاكرة طويلة المدى 15 -17. طول مرحلة الكبار يستوعب التلاعب الوراثية والسلوكية والغذائية والدوائية على المدى الطويل من الذاكرة، بالإضافة إلى تحديد تأثير الشيخوخة والأمراض العصبية التنكسية على الذاكرة 3-6،11-13،15-21. وبفعل الإشراط الكلاسيكي من العرض المتزامن لجديلة محايدة رائحة (التحفيز مكيفة، CS +) والتحفيز التعزيز، على سبيل المثال، صدمة كهربائية أو السكروز، (المثير غير الشرطي، الولايات المتحدة)، التي أصبحت مرتبطة مع بعضها البعض بواسطة الحيوان 1،16. وتقدم بعد ذلك دون الولايات المتحدة - والتحفيز مكيفة الثانية (CS). خلال مرحلة الاختبار، يتم عرض ذبابة الفاكهة في وقت واحد مع CS + والروائح CS-. بعد يتم توفير الوقت لذبابة الفاكهة الاختيار بين الروائح، يتم تسجيل توزيع الحيوانات. هذا الإجراء اللهأدنى النقابي تكييف مكره أو مشهي إلى أن تقاس بشكل موثوق دون تحيز التي أدخلها التفضيل الفطري لأي من المحفزات مكيفة. يتم إجراء التجارب التحكم المختلفة أيضا لاختبار ما إذا كانت جميع الأنماط الجينية تستجيب عادة للرائحة والتعزيز وحده.

مؤشر الأداء (PI) بمثابة مقياس للذاكرة. ويوضح الجدول 1 حساب تمثيلي من PI. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> يقترن صحة الأم والطفل مع صدمة </td><td> يقترن 3-OCT مع صدمة </td></tr><tr><td> الذباب تجنب صحة الأم والطفل (في أنبوب أكتوبر) = 80 الذباب مفضلا صحة الأم والطفل (صحة الأم والطفل في أنبوب) = 20 PI 1 - (80-20) / 80 + 20) = 0.6 </td><td> الذباب تجنب أكتوبر (في أنبوب صحة الأم والطفل) = 75 الذباب مفضلا أكتوبر (في أنبوب أكتوبر) = 25 PI 2 = (75-25) / (75 + 25) = 0.5 </td></tr><tr><td> PI التجربة = (0،6 + 0،5) /2=0.55 </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 1. حساب تمثيلي مؤشر الأداء باستخدام بيانات توضيحية. مؤشرات الأداء لتجارب مختلفة يمكن مقارنة لتوضيح آثار الذاكرة. مرة واحدة مثلتظهر المقارنة في الشكل 3، والذي يحتوي على نتائج سلسلة من التجارب أجريت مع كانتون S wildtype الذباب الكبار (WT) وغبي تعلم الكبار الذباب متحولة 1. يتم توفير متوسط ​​10 حزب القانون والعدالة، مع أشرطة الخطأ تمثل الخطأ المعياري للمتوسط ​​(SEM). هذه النتائج تثبت أن الذباب غبي تظهر انخفاضا في التعلم مقارنة wildtype. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1.jpg" /> الشكل 1. الكبار التجريبية مجموعة المتابعة. يتم تدريب الذباب واختبار T في المتاهة. التدريب يشمل يقدمون رائحة ومع صدمة كهربائية تليها رائحة B الثاني من دون صدمة كهربائية. بعد فترة راحة في غرفة الوسطى وتعرض الذباب مع كل من الروائح في وقت واحد. محاصرون الذبابفي أنابيب اثنين وجمعها وعدها للحصول على عشرات التعلم / الذاكرة. <img alt="الشكل 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2.jpg" /> الرقم 2. البروتوكول تدريب الكبار. الذباب يتدربون في خطوتين. الخطوة الأولى حيث تتلقى الذباب رائحة (CS +) يقترن صدمة كهربائية (US) لمدة 60 ثانية. في الخطوة التالية تحصل الذباب رائحة الثانية (CS-) دون صدمة كهربائية. ثم يسمح للذباب للراحة لمدة 90 ثانية وبعد ذلك يتم اختبارها للاختيار ما بين CS + وCS-. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig3highres.jpg" width="400" /> الشكل 3. الرسم البياني التمثيلي تظهر غبي والتعلم wildtype في ذبابة الفاكهة الكبار. </strongتظهر&gt; WT وتم اختبار الذباب غبي التالية دورة واحدة من التدريب. الذباب غبي انخفاض في التعلم مقارنة WT (ن = 10).

Watch this Scientific Journal Video about Drosophila Adult Olfactory Shock Learning at JoVE.com

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

يوصف طريقة لقياس الكبار ذبابة الفاكهة الذاكرة الجمعوية. ويستند الفحص على قدرة الذبابة لربط رائحة قدم مع معزز سلبي (الصدمة الكهربائية) ثم أذكر هذه المعلومات في وقت لاحق، مما يسمح الذاكرة المراد قياسها.

ذبابة الفاكهة الكبار الشم صدمة التعلم

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

drosophila-adult-olfactory-shock-learning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

27.7K Views.  University of Bristol.  يوصف طريقة لقياس الكبار ذبابة الفاكهة الذاكرة الجمعوية. ويستند الفحص على قدرة الذبابة لربط رائحة قدم مع معزز سلبي (الصدمة الكهربائية) ثم أذكر هذه المعلومات في وقت لاحق، مما يسمح الذاكرة المراد قياسها. 

Video: Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of these diseases, including Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's disease are characterized by age-dependent deterioration in learning and memory functions and movement coordination2. Here we use behavioral assays, including the negative geotaxis assay3 and the aversive phototaxic suppression assay (APS assay)4,5, to show that some of the behavior characteristics associated with human neurodegeneration can be recapitulated in flies. In the negative geotaxis assay, the natural tendency of flies to move against gravity when agitated is utilized to study genes or conditions that may hinder locomotor capacities. In the APS assay, the learning and memory functions are tested in positively-phototactic flies trained to associate light with aversive bitter taste and hence avoid this otherwise natural tendency to move toward light. Testing these trained flies 6 hours post-training is used to assess memory functions. Using these assays, the contribution of any genetic or environmental factors toward developing neurodegeneration can be easily studied in flies.

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Behavior assays for measuring locomotor functions, learning, and memory abilities in Drosophila.

يعاير الحركي ، والتعلم ، والذاكرة في العجز ذبابة الفاكهة نماذج من تنكس عصبي

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells in the walls of the lateral ventricle give rise to neuroblasts that migrate for several millimeters along the rostral migratory stream (RMS) to reach and incorporate into the olfactory bulb. To study the different steps and the impact of adult-born neuron integration into preexisting olfactory circuits, it is necessary to selectively label and manipulate the activity of this specific population of neurons. The recent development of optogenetic technologies offers the opportunity to use light to precisely activate this specific cohort of neurons without affecting surrounding neurons4,5. Here, we present a series of procedures to virally express Channelrhodopsin2(ChR2)-YFP in a temporally restricted cohort of neuroblasts in the RMS before they reach the olfactory bulb and become adult-born neurons. In addition, we show how to implant and calibrate a miniature LED for chronic in vivo stimulation of ChR2-expressing neurons.

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Adult-born neurons of the olfactory bulb can be optogenetically controlled using Channelrhodopsin2-expressing lentiviral injection in the rostral migratory stream and chronic photostimulation with an implanted miniature LED.

الفيروسية تنبيغ الانتقائي للبالغين المولودين في الخلايا العصبية الشمية لالمزمنة في الجسم الحي تحفيز Optogenetic

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

مشهي التعلم النقابي في الشم<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including lens-secreting cone cells, pigment cells, a bristle cell and eight photoreceptors (PRs) R1-R8 2. The PRs have specialized microvillar structures, the rhabdomeres, which contain light-sensitive pigments, the Rhodopsins (Rhs). The rhabdomeres of six PRs (R1-R6) form a trapezoid and contain Rh1 3 4. The rhabdomeres of R7 and R8 are positioned in tandem in the center of the trapezoid and share the same path of light. R7 and R8 PRs stochastically express different combinations of Rhs in two main subtypes5: In the 'p' subtype, Rh3 in pR7s is coupled with Rh5 in pR8s, whereas in the 'y' subtype, Rh4 in yR7s is associated with Rh6 in yR8s 6 7 8.
Early specification of PRs and development of ommatidia begins in the larval eye-antennal imaginal disc, a monolayer of epithelial cells. A wave of differentiation sweeps across the disc9 and initiates the assembly of undifferentiated cells into ommatidia10-11. The 'founder cell' R8 is specified first and recruits R1-6 and then R7 12-14. Subsequently, during pupal development, PR differentiation leads to extensive morphological changes 15, including rhabdomere formation, synaptogenesis and eventually rh expression.
In this protocol, we describe methods for retinal dissections and immunohistochemistry at three defined periods of retina development, which can be applied to address a variety of questions concerning retinal formation and developmental pathways. Here, we use these methods to visualize the stepwise PR differentiation at the single-cell level in whole mount larval, midpupal and adult retinas (Figure 1).

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The Drosophila retina is a crystal-like lattice composed of a small number of cell types that are generated in a stereotyped manner 1. Its amenability to sophisticated genetic analysis allows the study of complex developmental programs. This protocol describes dissections and immunohistochemistry of retinas at three discrete developmental stages, with a focus on photoreceptor differentiation.

تشريح والمناعية من اليرقات، العذراء وتعليم الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; شبكية العين

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

كله من جبل Immunolabeling الشم مستقبلات الخلايا العصبية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الهوائي

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

الطريقة الكهربية لالردود تسجيل بين الخلايا الجهد ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء وInterneurons إلى النور المحفزات<em&gt; في فيفو</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

السلوكيات حاسة الشم يعاير التي تتبع الكمبيوتر<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; في Olfactometer أربعة رباعي

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival. The most obvious application of these chemosenses is to be able to distinguish good food sources from potentially dangerous food sources. Gustation requires physical contact with a chemical compound which is able to signal through taste receptors that are expressed on the surface of neurons. In insects, these gustatory neurons can be located across the animal's body allowing taste to play an important role in many different behaviors. Insects typically prefer compounds containing sugars, while compounds that are considered bitter tasting are avoided. Given the basic biological importance of taste, there is intense interest in understanding the molecular mechanisms underlying this sensory modality. We describe an adult Drosophila taste assay which reflects the preference of the animals for a given tastant compound. This assay may be applied to animals of any genetic background to examine the taste preference for a desired soluble compound.

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste is an important sensory process which facilitates attraction to beneficial substances and avoidance of toxic substances. This protocol describes a simple ingestion assay for determining Drosophila gustatory preference for a given chemical compound.

طعم الفحص تفضيل الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

تكييف قنبلة ذبابة الفاكهة كتدبير للتعلم والذاكرة

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.