Biz sinek suşu için Bloomington stok merkezleri kabul. Bu çalışma BBSRC (BB / G008973 / 1) araştırma bursu ile desteklenmiştir.

1. Fly Hazırlık <ol><li> Genetik geçmişi 26 kontrol etmek için davranışsal deney öncesinde en az altı kuşaklar için, tüm mutantlar, Gal4 / UAS ve bu gibi bir CSw- vahşi tip suş ile diğer hatları outcross. </li><li> Belirli manipülasyonlar farklı bir sıcaklık gerektirmediği sürece 25 ° C&#39;de 00:12 saatlik bir ışık-karanlık döngüsü altında, standart bir mısır unu, maya ve melas gıda diyeti sinekler büyütün. <ol><li> Transjen etkilerini belirlemek için: Kullan 18 ° C geliştirme yoluyla -Gal4 GAL80 ts (TARGET sistemine) transgenlerin ifadesini önlemek ve daha sonra 1-2 gün davranışsal deneyden önce 30 ° C inkübatör sinekler taşımak için. Transgen ekspresyonu 3,4,6,7,14 etkisini belirlemek için, 30 ° C&#39;de deney yapmak. </li><li> Nöronlar uyarmak için ısıyla harekete geçen TRPA1 kanalları kullanılarak deneyler için: Bilinen bir sıcaklık olan 23 ° C, sinekler kaldırınAktif olmayan kanalını sürekli olarak ve nöronlar ifade TRPA1 etkinleştirmek için 30 ° C&#39;da bir oda davranış geçmek için. </li><li> Sinaptik çıkışı 11, 14,24 blokaja hassastır Shibire sıcaklığı kullanılarak deneyler için: Arka 18 ° C&#39;de sinek ve 30 ° C&#39;de test yaparlar. </li></ol></li><li> Deneyden önce sinekler 1-2 gün toplayın ve hafif CO 2 anestezi altında yaklaşık 25 grupları bunları saymak. 00:12 saat aydınlık olan bir çevresel olarak kontrol edilen bir odada ve% 70 nispi nem (spesifik manipülasyonlar farklı bir sıcaklık gereklidir edilmiştir) 25 ° C&#39;de şişeler içinde sinekler gıda O / N, en az (mayasız) muhafaza edin: karanlık koşullarda zamanına kadar Deney. Not: Bu depolama sinekler Drosophila öğrenme için uygun koşulları vardı çevre kontrollü odasında gerçekleştirilen sonraki öğrenme testi iklime alıştırmak için izin verir ve daha da önemlisi, herhangi bir günlük Envi kaldırırdavranışsal fenotip etkilemiş olabilir çevresel değişimleri. </li></ol> Deney öncesi 2. Hazırlık <ol><li> Bir ısmarlama Perspeks T-labirent deneyleri (Şekil 1) gerçekleştirin. </li><li> Düzenli olarak hava geçirmez bir conta deney sırasında elde edilmesini sağlamak için uygundur tüp kontrol edin. Gerekirse, T-labirentin iç bölmeyi kapayacak O-halkalarını değiştirin. </li><li> Eğitim tüpler içinde özel yapılmış bakır ızgaraları yerleştirin. Kontrol ve düzenli olarak bu ızgaraları temizlemek ve okside değiştirin. Bir elektrik uyancısına bağlı bir switch-box çalıştırmak timsah klipler aracılığıyla telleri bakır ızgaraları takın. Kısmı gereken şok veren emin olmak için bir voltmetre kullanın. </li><li> Herhangi bir hava kaçağı önlemek için sıkıca labirent tutmak için g-kelepçeler kullanın. </li><li> Bir hava pompasına çalışan boru için T-labirent takın izin vermek için kokular sinekler arasında çekilir ve daha sonra T-labirent temizlenmelidir. Hafif hava koruyun~ 2 L / dak akış </li></ol> 3. Koku Seyreltmeler <ol><li> Sinekler iki kokuları eşit ölçüde tercih edilir göstermektedir, öyle ki, iki farklı konsantrasyonlarda kokuları kullanın. Mineral yağ içinde seyreltilmiş 7,13: 4-metilsikloheksanol (1:67) ve 3-oktanol (100 1) kullanınız. Not: Dikkatle laboratuvar tarafından değişebilir, bu konsantrasyonlarını belirlemek. Örneğin bazıları ise hem kokuları 24 için 01:10 kullanın. Diğer yaygın olarak kullanılan kokuların etil asetat ve izo-amil asetat bulunur. </li><li> Pipet böylece koku dumanın sinekleri açığa hava fincandaki koku üzerine çizilir sağlayan bir delikli bir üst ile bir plastik tüp ile kaplı koku blok içine yerleştirilebilir, ısmarlama bir koku kabının içine koku seyreltilmiş 30 ul. </li></ol> 4. Eğitim Protokolü (Şekil 1 ve 2) <ol><li> Yetişkin koku şok klima, bir loş kırmızı ışık altında tüm deneyleri (yani., Kırmızı LED), araştırmacı görmenizi sağlar gerçekleştirmek ancak fl önlerBöylece görsel girdilerin aksine sinekler olfaksiyon konsantre sağlayan, görmesini y. </li><li> Eğitim tüpüne sinekler tanıtmak ve daha sonra T-labirent eklemek ve bunları 90 sn için tüp ve hava akışına uyum sağlar. </li><li> 60 saniyelik bir toplam süresi (3.75 sn arası nabız aralıklarına oniki 1.25 sn bakliyat oluşan) bir 60-V şok ile ilk koku (4-metilsikloheksanol, AÇS) sunun. </li><li> Bir koku veya şok olmadan 30 saniye dinlenme süresi ile şok uygulayın. </li><li> Bir şok olmadan 60 saniye boyunca ikinci koku (3-oktanoldür Ekim) sunun. </li><li> Bir koku veya şok olmadan 30 saniye dinlenme süresi ile şok uygulayın. </li><li> Bu eski fare altlığı gibi yumuşak bir yüzey üzerine, T-labirent alt vurarak hafifçe yan T-labirent döndürülür ve T-labirent merkez odasına eğitim odasından sinekler taşıyın. 90 sn için merkezi bölmenin içerisinde bulunan sinekler koruyun. </li><li> Bo içine seçim tüpleri Fittertibatın ttom T-labirent oluşturur. </li><li> , Öğrenmeyi ölçmek onlar aynı anda hem kokulara maruz kaldılar T-labirent, seçimi noktasına sinekler taşımak ve birine doğru hareket ettirin. 120 saniye için bir test dönemi Davranış. </li><li> Tuzak önler.böylece merkezi bölme kayar tercih tüplerin uçlarını bloke ederek tercih tüplerinde sinekler. T-labirent her kolunda ve gıda şişeleri ve saymak içine orta bölmesindeki sinekleri toplayın. </li><li> , Hafıza ölçmek eğitim (4.6) sonra sinekler toplamak ve mayasız gıda şişelerine T-labirent onları aktarmak için. Mağaza (giriş bölümüne bakınız) ilgi bellek aşamasını belirlemek için gerekli kalan süre için 25 ° C&#39;de karanlıkta ve% 70 nem uçar. Aşamada 4.7 olarak T-labirent sinekler reintroduce. </li><li> Uzun süreli bellek için, sinek, birkaç parti aynı anda eğitim sağlar özel bir inşa labirent kullanın. 15 dk arası geçiş aralığı (spa ile eğitim 5 döngüleri yönetmemiş) veya bir inter-döngüsü Arasız (kitlesel). Test kadar karanlıkta 18 ° C&#39;de sinekler ve% 70 nem korumak. Deneyden önce, 25 ° C&#39;ye sinekler taşımak ve bunları en az 1 saat boyunca ortama alışmaları için izin verir. Uzun süreli hafızayı eğitimden sonra 24 saat değerlendirin. </li><li> Davranışsal deneyler sonra, sıcak su ve kokusuz deterjanla koku bardak temizleyin. 10 ul Sigmacote ile kurutulduktan sonra, ceket bardak. Bir mikrodalga fırınında ısıtılarak Sigmacote kurutun. Bazen sıcak su ve kokusuz deterjan ile pleksiglas borular ve koku blokları T-labirent temizleyin. </li></ol> Performans Endeksi&#39;ni 5. Hesaplama: Sinekler &#39;Hafıza bir ölçüsüdür <ol><li> Eksi sinekler (CS toplam sayısına bölünmesiyle şok eşleştirilmiş koku (CS +) seçerek sinek sayısını - şok eşleştirilmiş koku (CS) kaçınarak sineklerin sayısı gibi her durum için Performans Endeksi (PI) hesaplayın - + CS +) 1. Performance indeksi (PI) = (# CS - uçar - # CS + uçar) / (# toplam sinekleri) </li><li> MCH şok eşleştirilmiş koku ve Ekim şok eşleştirilmiş kokusu olduğu bir olduğu içindeki deneyin ortalamasını alarak PI Deneyin son PI hesaplayın. Bu bir koku için daha yüksek bir tercihi olan sineklerin herhangi bir önyargı kaldırır. </li></ol> 6. Duyusal Kontrolleri <ol><li> T-labirent 6,7,17 ​​içine ~ 40-50 sinekler tanıtarak koku keskinliği gerçekleştirin. </li><li> 90 saniye sonra, seçim noktasına sinekler hareket ve saf koku ve hava arasında seçim için onlara 2 dakika izin verir. </li><li> Toplayın ve sinekler saymak. Testte katılan olanlar tarafından koku seçti sineklerin toplam sayısına bölünmesiyle kaçınma yüzdesini hesaplayın. </li><li> Şok reaktivite 6,7,17, şok odasına sinekler getirmektedir. </li><li> Dinlenme 90 saniye sonra, sineklerin bir benzer kaçabileceği bir 60-V DC elektrik şoku, yönetmekBir şok olmadan tüp. </li><li> Sinekler seçmek için 2 dakika izin ver; toplamak ve sinekler saymak. Deneyde sineklerin toplam sayısına göre şok tüp kaçan şokunu sineklerin sayısına bölünmesiyle şok kaçınma yüzdesini hesaplayın. , Elektrik çarpmasına kaçan olanların toplam merkez hücre içinde kalmasına sinekler içerir. </li></ol>

<ol>
	<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster.">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> Journal of Comparative Physiology A. 157, 263-277 (1985).</li><li>Bolduc, F. V., Tully, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruit+flies+and+intellectual+disability.">Fruit flies and intellectual disability.</a> Fly (Austin). 3, 91-104 (2009).</li><li>McGuire, S. E., Deshazer, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+olfactory+learning+and+memory+research+in+Drosophila+melanogaster.">Thirty years of olfactory learning and memory research in Drosophila melanogaster.</a> Prog Neurobiol. 76, 328-347 (2005).</li><li>Keene, A. C., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+olfactory+memory:+single+genes+to+complex+neural+circuits.">Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits.</a> Nat Rev Neurosci. 8, 341-354 (2007).</li><li>Chiang, H. C., Wang, L., Xie, Z., Yau, A., Zhong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3+kinase+signaling+is+involved+in+Abeta-induced+memory+loss+in+Drosophila.">PI3 kinase signaling is involved in Abeta-induced memory loss in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107, 7060-7065 (2010).</li><li>Kanellopoulos, A. K., Semelidou, O., Kotini, A. G., Anezaki, M., Skoulakis, E. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+deficits+consequent+to+reduction+of+the+Fragile+X+mental+retardation+protein+result+from+metabotropic+glutamate-mediated+inhibition+of+cAMP+signalling+in+Drosophila.">Learning and memory deficits consequent to reduction of the Fragile X mental retardation protein result from metabotropic glutamate-mediated inhibition of cAMP signalling in Drosophila.</a> J Neurosci. 32, 13111-13124 (2012).</li><li>Malik, B. R., Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+and+CaMKII+function+in+the+mushroom+body+a&#8217;/&#223;&#8217;+neurons+during+Drosophila+memory+formation.">CASK and CaMKII function in the mushroom body a&#8217;/&#223;&#8217; neurons during Drosophila memory formation.</a> Front Neural Circuits. 7, 52 (2013).</li><li>Gerber, B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+larva+as+a+model+for+studying+chemosensation+and+chemosensory+learning:+a+review.">The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review.</a> Chem Senses. 32, 65-89 (2007).</li><li>Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+regulates+CaMKII+autophosphorylation+in+control+of+synaptic+growth+and+appetitive+learning.">CASK regulates CaMKII autophosphorylation in control of synaptic growth and appetitive learning.</a> Front Molecular Neuroscience. 6, 27 (2013).</li><li>Apostolopoulou, A. A., Widmann, A., Rohwedder, A., Pfitzenmaier, J. E., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetitive+associative+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae.">Appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (72), e4334 (2013).</li><li>Tonoki, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+impairs+intermediate-term+behavioral+memory+by+disrupting+the+dorsal+paired+medial+neuron+memory+trace.">Aging impairs intermediate-term behavioral memory by disrupting the dorsal paired medial neuron memory trace.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 109, 6319-6324 (2012).</li><li>Yamazaki, D., Horiuchi, J., Nagano, S., Tamura, T., Saitoe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+DCO+mutation+suppresses+age-related+memory+impairment+without+affecting+lifespan.">The Drosophila DCO mutation suppresses age-related memory impairment without affecting lifespan.</a> Nat Neurosci. 10, 478-484 (2007).</li><li>Cavaliere, S., Malik, B. R., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ+channels+regulate+age-related+memory+impairment.">KCNQ channels regulate age-related memory impairment.</a> PLoS One. 8, e62445 (2013).</li><li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly.">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li><li>Isabel, G., Pascual, A., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exclusive+consolidated+memory+phases+in+Drosophila.">Exclusive consolidated memory phases in Drosophila.</a> Science. 304, 1024-1027 (2004).</li><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory.">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr Biol. 23, R752-R763 (2013).</li><li>Tully, T., Preat, T., Bonyton, S. C., Del Vecchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila.">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li><li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila.">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning and memory. 16, 19-27 (2009).</li><li>Le Glou, E., Seugnet, L., Shaw, P. J., Preat, T., Gouguel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+consolidated+memory+retrieval+following+sleep+deprivation+in+Drosophila.">Circadian modulation of consolidated memory retrieval following sleep deprivation in Drosophila.</a> Sleep. 35 (10), 1377-1384 (2012).</li><li>Placais, P. Y., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+favour+survival+under+food+shortage,+the+brain+disables+costly+memory.">To favour survival under food shortage, the brain disables costly memory.</a> Science. 339, 440-442 (2012).</li><li>Hirano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fasting+launches+CRTC+to+faciltate+long-term+memory+formation+in+Drosophila.">Fasting launches CRTC to faciltate long-term memory formation in Drosophila.</a> Science. 339, 443-446 (2012).</li><li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae.">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li><li>Claridge-Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Writing+memories+with+light-addressable+reinforcement+circuitry.">Writing memories with light-addressable reinforcement circuitry.</a> Cell. 139, 405-415 (2009).</li><li>Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+dopamine+pathways+induce+aversive+odor+memories+with+different+stability.">Three dopamine pathways induce aversive odor memories with different stability.</a> PLoS Genetics. 8, e1002768 (2012).</li><li>Connolly, J. B., Tully, T., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a Practical Approach. , 265-319 (1998).</li><li>Connolly, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+disrupted+by+impaired+Gs+signaling+in+Drosophila+mushroom+bodies.">Associative learning disrupted by impaired Gs signaling in Drosophila mushroom bodies.</a> Science. 274, 2104-2107 (1996).</li><li>Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traces+of+Drosophila+memory.">Traces of Drosophila memory.</a> Neuron. 70, 8-19 (2011).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+kenyon+cells+in+situ.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila kenyon cells in situ.</a> J Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Young, J. M., Wessnitzer, J., Armstrong, J. D., Webb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elemental+and+non-elemental+olfactory+learning+in+Drosophila.">Elemental and non-elemental olfactory learning in Drosophila.</a> Neurobiol Learn Mem. 96, 339-353 (2011).</li><li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. .. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+alcohol+reward.">Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li><li>Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+reveals+neural+circuit+mechanisms+of+fly+memory.">Dopamine reveals neural circuit mechanisms of fly memory.</a> Trends Neurosci. 33, 457-464 (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan Drosophila ergin koku şok öğrenme deneyi uzun süreli bellekte 15-17 olmak üzere belleğin farklı aşamalarını, altında yatan moleküler mekanizmaların analiz sağlar. Yanı sıra sirkadiyen ritimler 18, uyku 19, diyet 20,21, yaşlanması 11-13, nörodejeneratif hastalığı 5 ve ilaç tedavileri bellek üzerine 5,6,19 etkisinin belirlenmesi gibi. Birçok güçlü bir yaklaşım son zamanlarda sinekler 3,4,7,11,16,27 olfaktör bellek aracılık nöral devrelerinin fonksiyonel görüntüleme için geliştirilmiştir. Bu teknikler Optogenetic Drosophila 14,16 bulunan farklı promoterlerin geniş bir repertuar kullanın. Bu destekleyiciler hafıza izleri belirli gen mutasyonlarının etkisini incelemek için bellek nöronlarda 16,27 genetik olarak kodlanmış kalsiyum ve cAMP gazetecilere ifade etmek için kullanılır. Thyetişkinlerde Şartlı ve mutasyonların E hafıza kullanır 3,4,6,7,13,14 bir gen ürününün sonrası gelişim rolünün çalışma sağlar. Görüntüleme ve davranışsal yaklaşımlar ile canlandırmak ya da daha da aydınlatmak fonksiyonu için bellek devre 11,14,16,22-24 farklı nöron inhibe etmek için ışık ve ısı ile aktive olan kanalları ile kombine edilebilir. Ayrıca, mantar vücut bellek nöronlar Drosophila koku hafızası 29 modellemek için kullanılmaktadır tüm hücre yama kelepçe kayıtları 28, matematiksel ve hesaplama teknikleri erişilebilir. Burada tanıtılan çağrışımlı bellek protokollerin farklı formları ile birlikte bu deneysel gelişmeler, yaşlanma ve hastalık, Drosophila, ceza, motivasyon, bağımlılığı ödüllendirmek tepki olarak ortaya ilişkisel bellekte moleküllü ve devre düzeyi değişiklikleri modellemek için kullanılmasına izin 5,6,11-13,16,30-31.

Burada sunulan yöntem, bazı küçük değişiklikler 1 Tully, Quinn ile tarif edildiği gibidir. Sinekler ilk aşamada eğitimli ve eğitimli sinekler ikinci aşamada test edilir: deney iki aşamada yapılır. Eğitim sırasında, sineklerin bir grup aynı anda kokuya maruz kalan 1 (CS +) ve bir eğitim tüp içinde bir elektrik şoku (ABD). Elektrik çarpması olmadan - sinekler daha sonra koku 2 (CS) alırsınız. Bir şok ile belirli bir koku Bu tek eşleşme 1-döngüsü eğitim olarak adlandırılır ve en yaygın olarak kullanılan kokuların 4-metilsikloheksanol (MCH) ve 3-oktanol (Ekim) &#39;dir. Tek döngüsü eğitim kadar 7 saat boyunca tespit edilebilir bellek kararsız bir fazın oluşmasına yol açar; Ancak, bellek tipik olarak adlandırılan öğrenme, edinimi veya 2 dk bellek ne olduğunu belirlemek için hemen test edilir. 30 dakika veya 1 saat sonra ölçülen bellek ise, kısa-süreli hafıza denir3 saat bellek orta süreli hafıza olarak adlandırılır. Eğitim döngüleri (aralıklı eğitim) arasındaki boşlukları ile tekrarlayan eğitim döngüleri sineklerin maruz CREB&#39;ye transkripsiyon bağlıdır ve bir hafta kadar süren uzun süreli bellek konsolide şeklinde yol açar. Boşluklar (blok eğitim olmadan) Eğitim tipik eğitim 7,13,15-17,20,21 5 döngü 24 saat sonra ölçülür uzun süreli bellekte benzer anestezi dirençli bellek (ARM) oluşmasına yol açar. Bu yaklaşımla, bu bellek farklı aşamalarında çeşitli gen mutasyon etkisi belirlenebilir. Etkinleştirmek veya özel nöronların sinir aktivitesini engellemek için açık veya ısıya duyarlı transgenlerin promotör-tahrikli bir bellek ifade etme, konsolidasyon ve erişim 3,4,11,15,16,20 için gerekli olan nöronların araştırmak sağlar, 22-24. Bu f nedeni yaşa bağlı hafıza bozukluğu okuyan zaman 1 saat sonra hafıza genellikle ölçülürbellek orm 11-13 yaşlanma etkilerine karşı özellikle savunmasız görünüyor. Davranışsal ve genetik kontrollerin bir dizi bellek deneyler ile yapılır, örneğin, bir performans kusur nedeniyle bir merkezi bellek kusur veya şok veya koku ipucu 5 -7 algılamasını sinek engelleyen bir periferik duyusal kusurun olup olmadığını belirlemek için 1 7, 25,26.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:28px;">Materials</td>
			<td style="width:139px;height:28px;">Source</td>
			<td style="width:116px;height:28px;">Cat. No.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">3-Octanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">218405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">4-Methyl cyclohexanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">15,309-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Benzaldehyde</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">418099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Mineral Oil</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Fluka</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">BP2629-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Hexyl acetate</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">108154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Fructose</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:22px;">Agarose</td>
			<td style="width:139px;height:22px;">Bioline</td>
			<td style="width:116px;height:22px;">BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drosophila adult olfactory shock learning

Drosophila böylece büyük ölçüde bilişsel hastalıklarda 1-7 katılan moleküler mekanizmaların aydınlatılması dahil olmak üzere bellekte anlayışımızı kolaylaştırmak, 40 yıldır klasik koşullanma deneylerinde kullanılmıştır. Öğrenme ve hafıza yetişkin plastisite genlerin 1-7 katkısını ölçmek nörogelişimsel genlerin 8-10 etkisini araştırmak için larva ve sinek tahlil edilebilir. Ayrıca, Drosophila kısa yaşam süresi, yaşa bağlı bellek zayıflığı 5,11-13 aracılık genlerin analizi kolaylaştırmaktadır. Drosophila sinir sistemi alt bölümlere birçok uyarılabilir promoterlerin temini ne zaman ve nerede konu edilen gen, normal bir bellek gibi takviye sinyalinin 3,4,14,16 farklı yönlerini geçiş için gereklidir mümkün belirlemek için yapar. Yetişkin Drosophila okuyan hafıza ayrıntılı bir analiz sağlardavranış ve ilgili devreler ve uzun süreli bellek 15 -17 bir ölçüm. Yetişkin evresinin süresi bellek 3-6,11-13,15-21 ile yaşlanma ve nörodejeneratif hastalığın etkisinin belirlenmesi ek olarak, bellek uzun vadeli, genetik davranış, beslenme ve farmakolojik manipülasyonlara barındırmaktadır. Klasik koşullama hayvan tarafından birbirleri ile bağlantılı hale nötr koku işaret (Koşullu uyarı CS +) ve bir takviye uyaran, örneğin., Elektrik çarpması veya sukroz, (koşulsuz uyarıcı, ABD) &#39;nin aynı anda sağlanması ile uyarılmaktadır 1,16. İkinci klimalı uyaran (CS -) daha sonra, ABD olmadan sunulmaktadır. Test aşamasında, Drosophila aynı anda CS + ve CS kokuları ile sunulmaktadır. Drosophila kokular arasında seçmek için zaman sağlanır sonra hayvanların dağılımı kaydedilir. Bu prosedür arkdüşüklerin caydırıcı veya iştahlı klima güvenilir koşullanmış uyaran biri için doğuştan tercihi tarafından tanıtılan bir önyargı olmadan ölçülecek çağrışımlı. Çeşitli kontrol deneyleri de tüm genotipleri tek başına koku ve takviye normal tepki olup olmadığını sınamak için yapılır.

Performans indeksi (PI) bir bellek ölçüsü olarak hizmet vermektedir. Tablo 1 temsili bir PI hesabım göstermektedir. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> AÇS şok ile eşleştirilmiş </td><td> 3-Ekim şok ile eşleştirilmiş </td></tr><tr><td> (Ekim tüp içinde) MCH önlemek sinekler 80 = (MCH tüp içinde) MCH tercih sinekler = 20 PI 1 - (80-20) / 80 + 20) = 0.6 </td><td> (MCH tüp içinde) Ekim önlemek sinekler 75 = (Ekim tüp içinde) Ekim tercih Sinekler 25 = PI 2 = (75-25) / (+ 25 75) = 0.5 </td></tr><tr><td> Deney = (0.6 ± 0.5) PI /2=0.55 </td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1. açıklayıcı verileri kullanılarak performans indeksi temsili bir hesaplama. Farklı deneyler için performans endeksleri bellek etkilerini aydınlatmak için mukayese edilebilir. Bu bir kezkarşılaştırma Canton S Yabanitip erişkin sinek (WT) ve Dunce 1 uçar mutant yetişkin öğrenme ile yapılan bir dizi deney sonuçlarını içeren Şekil 3&#39;te gösterilmiştir. 10 PI ortalama ortalama standart hatası (SEM) ile temsil hata çubukları ile beraber sağlanır. Bu sonuçlar abullabut sinekler yabanitip ile kıyasla öğrenme bir azalma gösterdiğini ortaya koymaktadır. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1.jpg" /> Şekil 1. yetişkin deneysel set-up. Sinekler eğitimli ve T labirentinde test edilir. Eğitim elektrik çarpması olmadan ikinci bir koku takiben B elektrik çarpması ile bir koku A sunulması içerir. Orta odanın bir bekleme süresinden sonra, sinekler aynı anda hem de kokuları ile sunulmaktadır. Sinekler sıkışıp kalırlarİki tüplerde toplandı ve öğrenme / hafıza puanları elde etmek sayılır ve. <img alt="Şekil 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2.jpg" /> Şekil 2. yetişkin eğitim protokolü. Sinekler iki adımda eğitiyoruz. Sinekler 60 saniye boyunca bir koku elektrik çarpması (ABD) ile eşleştirilmiş (CS +) almak ilk adım. Bir sonraki adımda sinekler elektrik çarpması olmadan ikinci bir koku (CS) alırsınız. Sinekler sonra CS + ve CS- arasında kendi seçimi için test edilir sonra 90 saniye dinlenmek için izin verilir. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig3highres.jpg" width="400" /> Şekil 3. yetişkin Drosophila Dunce ve yabani tipteki öğrenme gösteren bir temsili grafik. </strong&gt; WT ve ahmak sinekler eğitim tek oturumda ardından test edildi. Ahmak sinekler WT (n = 10) ile karşılaştırıldığında öğrenme bir azalma göstermektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Drosophila Adult Olfactory Shock Learning at JoVE.com

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Anahtar Drosophila birleştirici bellek ölçülmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Tahlil negatif güçlendiricidir (elektrik çarpması) ile sunulan bir koku ilişkilendirmek ve daha sonra bellek ölçülmesine izin verecek, daha sonra bu bilgileri hatırlamak için sinek yeteneği dayanmaktadır.

Drosophila Yetişkin Koku Şok Öğrenme

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

drosophila-adult-olfactory-shock-learning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

27.7K Görüntüleme.  University of Bristol.  Anahtar Drosophila birleştirici bellek ölçülmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Tahlil negatif güçlendiricidir (elektrik çarpması) ile sunulan bir koku ilişkilendirmek ve daha sonra bellek ölçülmesine izin verecek, daha sonra bu bilgileri hatırlamak için sinek yeteneği dayanmaktadır. 

Video: Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of these diseases, including Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's disease are characterized by age-dependent deterioration in learning and memory functions and movement coordination2. Here we use behavioral assays, including the negative geotaxis assay3 and the aversive phototaxic suppression assay (APS assay)4,5, to show that some of the behavior characteristics associated with human neurodegeneration can be recapitulated in flies. In the negative geotaxis assay, the natural tendency of flies to move against gravity when agitated is utilized to study genes or conditions that may hinder locomotor capacities. In the APS assay, the learning and memory functions are tested in positively-phototactic flies trained to associate light with aversive bitter taste and hence avoid this otherwise natural tendency to move toward light. Testing these trained flies 6 hours post-training is used to assess memory functions. Using these assays, the contribution of any genetic or environmental factors toward developing neurodegeneration can be easily studied in flies.

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Behavior assays for measuring locomotor functions, learning, and memory abilities in Drosophila.

Assaying Lokomotor, Öğrenme ve Hafıza Açıkları. Drosophila Nörodejenerasyon, modeller

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Nörobilim

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells in the walls of the lateral ventricle give rise to neuroblasts that migrate for several millimeters along the rostral migratory stream (RMS) to reach and incorporate into the olfactory bulb. To study the different steps and the impact of adult-born neuron integration into preexisting olfactory circuits, it is necessary to selectively label and manipulate the activity of this specific population of neurons. The recent development of optogenetic technologies offers the opportunity to use light to precisely activate this specific cohort of neurons without affecting surrounding neurons4,5. Here, we present a series of procedures to virally express Channelrhodopsin2(ChR2)-YFP in a temporally restricted cohort of neuroblasts in the RMS before they reach the olfactory bulb and become adult-born neurons. In addition, we show how to implant and calibrate a miniature LED for chronic in vivo stimulation of ChR2-expressing neurons.

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Adult-born neurons of the olfactory bulb can be optogenetically controlled using Channelrhodopsin2-expressing lentiviral injection in the rostral migratory stream and chronic photostimulation with an implanted miniature LED.

Kronik Yetişkin doğmuş Koku Nöronlar Seçici Viral İletimi In vivo Optogenetic Uyarım

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including lens-secreting cone cells, pigment cells, a bristle cell and eight photoreceptors (PRs) R1-R8 2. The PRs have specialized microvillar structures, the rhabdomeres, which contain light-sensitive pigments, the Rhodopsins (Rhs). The rhabdomeres of six PRs (R1-R6) form a trapezoid and contain Rh1 3 4. The rhabdomeres of R7 and R8 are positioned in tandem in the center of the trapezoid and share the same path of light. R7 and R8 PRs stochastically express different combinations of Rhs in two main subtypes5: In the 'p' subtype, Rh3 in pR7s is coupled with Rh5 in pR8s, whereas in the 'y' subtype, Rh4 in yR7s is associated with Rh6 in yR8s 6 7 8.
Early specification of PRs and development of ommatidia begins in the larval eye-antennal imaginal disc, a monolayer of epithelial cells. A wave of differentiation sweeps across the disc9 and initiates the assembly of undifferentiated cells into ommatidia10-11. The 'founder cell' R8 is specified first and recruits R1-6 and then R7 12-14. Subsequently, during pupal development, PR differentiation leads to extensive morphological changes 15, including rhabdomere formation, synaptogenesis and eventually rh expression.
In this protocol, we describe methods for retinal dissections and immunohistochemistry at three defined periods of retina development, which can be applied to address a variety of questions concerning retinal formation and developmental pathways. Here, we use these methods to visualize the stepwise PR differentiation at the single-cell level in whole mount larval, midpupal and adult retinas (Figure 1).

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The Drosophila retina is a crystal-like lattice composed of a small number of cell types that are generated in a stereotyped manner 1. Its amenability to sophisticated genetic analysis allows the study of complex developmental programs. This protocol describes dissections and immunohistochemistry of retinas at three discrete developmental stages, with a focus on photoreceptor differentiation.

Larva, Pupa ve Erişkin diseksiyonu ve İmmünohistokimya<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinaları

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

In Koku Reseptör Nöronlar Tüm Dağı ile immün<em&gt; Drosophila</em&gt; Anten

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

Recording Hücre içi Gerilim Yanıtları için Elektrofizyolojik Yöntem<em&gt; Drosophila</em&gt; Işık Uyaranların için Fotoreseptörler ve internöronlar<em&gt; İn Vivo</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar<em&gt; Drosophila</em&gt; Dört kadranda olfactometer içinde

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival. The most obvious application of these chemosenses is to be able to distinguish good food sources from potentially dangerous food sources. Gustation requires physical contact with a chemical compound which is able to signal through taste receptors that are expressed on the surface of neurons. In insects, these gustatory neurons can be located across the animal's body allowing taste to play an important role in many different behaviors. Insects typically prefer compounds containing sugars, while compounds that are considered bitter tasting are avoided. Given the basic biological importance of taste, there is intense interest in understanding the molecular mechanisms underlying this sensory modality. We describe an adult Drosophila taste assay which reflects the preference of the animals for a given tastant compound. This assay may be applied to animals of any genetic background to examine the taste preference for a desired soluble compound.

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste is an important sensory process which facilitates attraction to beneficial substances and avoidance of toxic substances. This protocol describes a simple ingestion assay for determining Drosophila gustatory preference for a given chemical compound.

Yetişkin için tat Tercihi Testi<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.