Мы признаем, Блумингтон фондовых центров для штамма лету. Эта работа была поддержана исследовательского гранта от BBSRC (BB / G008973 / 1).

1 Fly Подготовка <ol><li> Скрещивание всех мутантов, GAL4 / UAS и других линий со штаммом дикого типа, такие как CSw-, по крайней мере, шести поколений до поведенческих экспериментов для контроля генетического фона 26. </li><li> Вырастить мух на стандартной кукурузной муки, дрожжей и мелассы пищевой рацион под 12:12 ч цикле свет-темнота при 25 ° С, если конкретные манипуляции не требуют разную температуру. <ol><li> Для определения влияния трансгенной экспрессии: Использование 18 ° C, чтобы предотвратить экспрессию трансгенов в Gal4 Gal80 TS (целевой системе) через развитие, а затем перейти мух к 30 ° С инкубатор за 1-2 дня до поведенческого эксперимента. Провести эксперимент при 30 ° С, чтобы определить влияние трансгенов выражения 3,4,6,7,14. </li><li> Для экспериментов с использованием активированного нагреванием TRPA1 каналов, чтобы стимулировать нейроны: Повышение мух при 23 ° C, что является температурой известночтобы поддерживать неактивный канал, а затем перейти к поведению комнате при температуре 30 ° С, чтобы активировать TRPA1, экспрессирующих нейронов. </li><li> Для экспериментов с использованием температуры Shibire чувствительную блокировать синаптическую выход 11, 14,24: задний мух при 18 ° С и проводить тестирование при 30 ° С. </li></ol></li><li> Соберите мух 1-2 дня до эксперимента и рассчитывать их в группы по примерно 25 под легкой CO 2 анестезии. Храните мух, по крайней мере O / N в пищевых флаконах (без дрожжей) при 25 ° C (если определенные манипуляции не требуют иной температуры) и 70% относительной влажности в экологически контролируемой комнате с 12:12 ч света: темные условия до времени эксперимента. Примечание: Эта хранения позволяет мухи, чтобы акклиматизироваться к последующему испытанию обучения, проведенного в экологически контролируемой комнате, которая имела оптимальные условия для Drosophila обучения и, главное, удаляет любые ежедневный ENVIщей среды изменения, которые, возможно, повлияли на поведенческий фенотип. </li></ol> 2 Подготовка к эксперименту <ol><li> Выполните эксперименты в заказной плексигласа Т-образном лабиринте (Рисунок 1). </li><li> Регулярно проверяйте трубных фитингов для того, чтобы герметичная прокладка получается во время эксперимента. При необходимости измените уплотнительные кольца, которые запечатывают внутренние отсеки Т-образном лабиринте. </li><li> Поместите на заказ медных сетей внутри учебных труб. Проверить и очистить эти сетки регулярно, и заменить, если окисляется. Прикрепите медные сетки на провода через крокодил, которые работают с коммутационной коробки, подключенного к электрической стимулятора. С помощью вольтметра убедитесь, что аппарат проводить необходимый шок. </li><li> Используйте G-зажимы провести лабиринт плотно, чтобы избежать утечки воздуха. </li><li> Прикрепите Т-лабиринт к трубке, которая работает с воздушным насосом, чтобы позволить запахи, который можно сделать через мух, а затем удаляется из Т-образном лабиринте. Поддержание мягкий воздухтечь в ~ 2 л / мин </li></ol> 3. Запах Растворы <ol><li> Используйте два различных запахов в концентрациях, таких, что мухи показывают одинаковое предпочтение обеих запахов. Используйте 4-метилциклогексанол (1:67) и 3-октанол (1: 100), разбавленного в минеральном масле 7,13. Примечание: Тщательно определить эти концентрации, который будет различным по лаборатории. Например другие используют 1:10 для обеих запахов 24. Другие обычно используемые запахи включают этилацетат и изо-амил ацетат. </li><li> Внесите 30 мкл разбавленного запаха в изготовленном на заказ чашки запаха, помещенного в запаха блока прикрыт пластиковой трубки с перфорированной верхней, что позволяет воздуху быть обращено на запах в чашке, тем самым подвергая мух к запаха шлейфа. </li></ol> 4 Обучение протокола (рисунки 1 и 2) <ol><li> Для взрослого обонятельной ударной кондиционирования, выполнять все эксперименты в тусклом красном свете (т.е.., Красный светодиод), что позволяет исследователю увидеть, но предотвращает эту видеть, что позволяет мухи сконцентрироваться на обоняния, в отличие от визуальных входов. </li><li> Представьте мух в учебный трубки, а затем приложить к Т-образном лабиринте и позволить им адаптироваться к трубе и потока воздуха в течение 90 сек. </li><li> Представить первый запах (4-метилциклогексанол, MCH) с 60-V шока (состоящей из двенадцати 1,25 сек импульсов с 3,75 сек между импульсных интервалов) для общей продолжительностью 60 сек. </li><li> Следуйте шок с периодом отдыха 30 сек без запаха или шока. </li><li> Представить второй запах (3-октанол, октябрь) в течение 60 секунд без шока. </li><li> Следуйте шок с периодом отдыха 30 сек без запаха или шока. </li><li> Перемещение мух от учебного камеры в центральной камере Т-образном лабиринте поворотом Т-лабиринт на бок и осторожно стучать дно Т-лабиринте на мягкой поверхности, например, как старый коврик мыши. Поддержание мух в центральной камере в течение 90 сек. </li><li> Установите выбор трубок в боttom аппарата для формирования Т-образном лабиринте. </li><li> Для измерения обучение, перемещения мух на ваш выбор точки Т-образном лабиринте, где они были одновременно подвергаются обоих запахов и двигаться навстречу друг. Провести тестовый период для 120 сек. </li><li> Ловушка мухи в выборе труб, сдвинув в центральную камеру до тем самым блокируя концы выбор трубок. Соберите мух в каждой руке Т-лабиринт и в центральном отделении в пищевые флаконов и кол. </li><li> Для измерения памяти, собирать мух после тренировки (4.6) и передавать их от Т-образном лабиринте к пищевым флаконах без дрожжей. Магазин летит в темноте при 25 ° С и 70% влажности в течение оставшегося времени, необходимого для определения фазы памяти интереса (см введение). Вновь мух в Т-лабиринте, как в стадии 4.7. </li><li> Для долговременной памяти, использовать индивидуальному заказу лабиринт, который позволяет несколько партий мух обучаться одновременно. Администрирование 5 циклов обучения с 15 мин между цикла интервала (спаCED) или без интервала между цикла (массированная). Поддерживать мух при 18 ° С и 70% влажности в темноте, пока тестирование. Перед тестированием двигаться мух до 25 ° С и дать им возможность акклиматизироваться в течение не менее 1 часа. Оценка долговременной памяти 24 ч после обучения. </li><li> После поведенческих экспериментов, очистить запах чашки горячей водой и без запаха моющего средства. После сушки пальто чашки с 10 мкл sigmacote. Высушите sigmacote при нагревании в микроволновой печи. Периодически очищайте Т-лабиринт плексигласовые трубы и запах блоки с горячей водой и без запаха моющего средства. </li></ol> 5 Расчет этого индекса: Мера памяти мух &quot; <ol><li> Рассчитать Индекс эффективности (PI) для каждого условия, как количество мух избегая ударной паре запах (CS -) минус количество мух, выбирающих ударной паре запах (CS +), деленное на общее количество мух (CS - + CS +) 1. ПеИндекс rformance (PI) = (# CS - мухи - # CS + летит) / (# Всего мухи) </li><li> Рассчитайте окончательное PI эксперимента путем усреднения PI эксперимента, в котором МЧ был шок-парные запах и тот, в котором октября был шок-парные запах. Это удаляет любую предвзятость мух, имеющих более высокую предпочтение одному запаху. </li></ol> 6. сенсомоторной управления <ol><li> Выполните запах зрения путем введения ~ 40-50 мух в Т-лабиринте 6,7,17. </li><li> После 90 секунд, двигаться мух к точке выбора, и позволить им 2 мин выбирать между чистых запахов и воздуха. </li><li> Сбор и подсчет мух. Вычислить процент уклонения путем деления общего количества мух, которые выбрали запах от тех, которые приняли участие в тесте. </li><li> Для ударной реактивности 6,7,17, ввести мух в ударной камере. </li><li> После 90 секунд отдыха, администрировать электрическим током 60-V постоянного тока, от которой мухи могут убежать в аналогичныйтрубка без шока. </li><li> Разрешить 2 мин для мухи выбрать; сбор и подсчет мух. Вычислить процент избегания шока путем деления количества мух, которые избегали шок выброса ударную трубку на общее количество мух в эксперименте. Включите мух, которые остаются в центральной камере в общей сложности те, которые избежали поражения электрическим током. </li></ol>

<ol>
	<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster.">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> Journal of Comparative Physiology A. 157, 263-277 (1985).</li><li>Bolduc, F. V., Tully, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruit+flies+and+intellectual+disability.">Fruit flies and intellectual disability.</a> Fly (Austin). 3, 91-104 (2009).</li><li>McGuire, S. E., Deshazer, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+olfactory+learning+and+memory+research+in+Drosophila+melanogaster.">Thirty years of olfactory learning and memory research in Drosophila melanogaster.</a> Prog Neurobiol. 76, 328-347 (2005).</li><li>Keene, A. C., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+olfactory+memory:+single+genes+to+complex+neural+circuits.">Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits.</a> Nat Rev Neurosci. 8, 341-354 (2007).</li><li>Chiang, H. C., Wang, L., Xie, Z., Yau, A., Zhong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3+kinase+signaling+is+involved+in+Abeta-induced+memory+loss+in+Drosophila.">PI3 kinase signaling is involved in Abeta-induced memory loss in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107, 7060-7065 (2010).</li><li>Kanellopoulos, A. K., Semelidou, O., Kotini, A. G., Anezaki, M., Skoulakis, E. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+deficits+consequent+to+reduction+of+the+Fragile+X+mental+retardation+protein+result+from+metabotropic+glutamate-mediated+inhibition+of+cAMP+signalling+in+Drosophila.">Learning and memory deficits consequent to reduction of the Fragile X mental retardation protein result from metabotropic glutamate-mediated inhibition of cAMP signalling in Drosophila.</a> J Neurosci. 32, 13111-13124 (2012).</li><li>Malik, B. R., Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+and+CaMKII+function+in+the+mushroom+body+a&#8217;/&#223;&#8217;+neurons+during+Drosophila+memory+formation.">CASK and CaMKII function in the mushroom body a&#8217;/&#223;&#8217; neurons during Drosophila memory formation.</a> Front Neural Circuits. 7, 52 (2013).</li><li>Gerber, B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+larva+as+a+model+for+studying+chemosensation+and+chemosensory+learning:+a+review.">The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review.</a> Chem Senses. 32, 65-89 (2007).</li><li>Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+regulates+CaMKII+autophosphorylation+in+control+of+synaptic+growth+and+appetitive+learning.">CASK regulates CaMKII autophosphorylation in control of synaptic growth and appetitive learning.</a> Front Molecular Neuroscience. 6, 27 (2013).</li><li>Apostolopoulou, A. A., Widmann, A., Rohwedder, A., Pfitzenmaier, J. E., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetitive+associative+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae.">Appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (72), e4334 (2013).</li><li>Tonoki, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+impairs+intermediate-term+behavioral+memory+by+disrupting+the+dorsal+paired+medial+neuron+memory+trace.">Aging impairs intermediate-term behavioral memory by disrupting the dorsal paired medial neuron memory trace.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 109, 6319-6324 (2012).</li><li>Yamazaki, D., Horiuchi, J., Nagano, S., Tamura, T., Saitoe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+DCO+mutation+suppresses+age-related+memory+impairment+without+affecting+lifespan.">The Drosophila DCO mutation suppresses age-related memory impairment without affecting lifespan.</a> Nat Neurosci. 10, 478-484 (2007).</li><li>Cavaliere, S., Malik, B. R., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ+channels+regulate+age-related+memory+impairment.">KCNQ channels regulate age-related memory impairment.</a> PLoS One. 8, e62445 (2013).</li><li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly.">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li><li>Isabel, G., Pascual, A., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exclusive+consolidated+memory+phases+in+Drosophila.">Exclusive consolidated memory phases in Drosophila.</a> Science. 304, 1024-1027 (2004).</li><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory.">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr Biol. 23, R752-R763 (2013).</li><li>Tully, T., Preat, T., Bonyton, S. C., Del Vecchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila.">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li><li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila.">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning and memory. 16, 19-27 (2009).</li><li>Le Glou, E., Seugnet, L., Shaw, P. J., Preat, T., Gouguel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+consolidated+memory+retrieval+following+sleep+deprivation+in+Drosophila.">Circadian modulation of consolidated memory retrieval following sleep deprivation in Drosophila.</a> Sleep. 35 (10), 1377-1384 (2012).</li><li>Placais, P. Y., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+favour+survival+under+food+shortage,+the+brain+disables+costly+memory.">To favour survival under food shortage, the brain disables costly memory.</a> Science. 339, 440-442 (2012).</li><li>Hirano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fasting+launches+CRTC+to+faciltate+long-term+memory+formation+in+Drosophila.">Fasting launches CRTC to faciltate long-term memory formation in Drosophila.</a> Science. 339, 443-446 (2012).</li><li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae.">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li><li>Claridge-Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Writing+memories+with+light-addressable+reinforcement+circuitry.">Writing memories with light-addressable reinforcement circuitry.</a> Cell. 139, 405-415 (2009).</li><li>Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+dopamine+pathways+induce+aversive+odor+memories+with+different+stability.">Three dopamine pathways induce aversive odor memories with different stability.</a> PLoS Genetics. 8, e1002768 (2012).</li><li>Connolly, J. B., Tully, T., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a Practical Approach. , 265-319 (1998).</li><li>Connolly, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+disrupted+by+impaired+Gs+signaling+in+Drosophila+mushroom+bodies.">Associative learning disrupted by impaired Gs signaling in Drosophila mushroom bodies.</a> Science. 274, 2104-2107 (1996).</li><li>Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traces+of+Drosophila+memory.">Traces of Drosophila memory.</a> Neuron. 70, 8-19 (2011).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+kenyon+cells+in+situ.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila kenyon cells in situ.</a> J Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Young, J. M., Wessnitzer, J., Armstrong, J. D., Webb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elemental+and+non-elemental+olfactory+learning+in+Drosophila.">Elemental and non-elemental olfactory learning in Drosophila.</a> Neurobiol Learn Mem. 96, 339-353 (2011).</li><li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. .. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+alcohol+reward.">Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li><li>Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+reveals+neural+circuit+mechanisms+of+fly+memory.">Dopamine reveals neural circuit mechanisms of fly memory.</a> Trends Neurosci. 33, 457-464 (2010).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Drosophila взрослых обонятельный шок обучения Анализ, представленный здесь позволяет анализ молекулярных механизмов, лежащих в основе различных фаз памяти, в том числе долговременной памяти 15-17. А также определение влияния циркадных ритмов 18, сна 19, диеты 20,21, старением 11-13, нейродегенеративные заболевания 5 и медикаментозного лечения 5,6,19 на память. Многие мощные подходы были недавно разработаны для функциональной визуализации нейронных цепей, которые обеспечивают обонятельный память у мух 3,4,7,11,16,27. Эти optogenetic методы использовать огромный репертуар различных промоутеров имеющихся у дрозофилы 14,16. Эти промоторы используются, чтобы выразить генетически закодированные кальция и цАМФ журналистам в нейронах памяти 16,27 изучение влияния специфических генных мутаций по следам памяти. Чтэ использование условных промоутеров и мутаций у взрослых позволяет изучение роли пост-развивающего генного продукта в памяти 3,4,6,7,13,14. Изображений и поведенческие подходы могут быть объединены с легких и активированных нагреванием каналов стимулируют или ингибируют различные нейроны в запоминающей схеме 11,14,16,22-24 дальнейшего выяснения их функции. Кроме того, нейроны памяти тела гриба доступны цельноклеточных патч зажим записи 28 и математических и вычислительных методов, которые используются для моделирования Drosophila обонятельный память 29. Эти экспериментальные результаты, в сочетании с различными формами ассоциативных протоколов памяти, представленных здесь, позволяют Drosophila, которые будут использоваться для моделирования молекулярно-и схема изменения уровней в ассоциативной памяти, которые происходят в ответ на вознаграждения, наказания, мотивация, склонность, старения и болезней 5,6,11-13,16,30-31.

Метод, представленный здесь является то, что описывается Талли и Куинн с небольшими изменениями 1. Эксперимент выполняется в два этапа: мухи обучаются на первом этапе, и обученные мухи тестируются на втором этапе. Во время обучения, группа мух одновременно подвергается запах 1 (CS +) и поражение электрическим током (США) в учебном трубки. Мухи затем получить запах 2 (CS -) без поражения электрическим током. Этот сингл спаривание конкретного запаха с током называется обучение 1-цикл, и запахи, которые наиболее часто используются 4-метилциклогексанол (MCH) и 3-октанол (OCT). Обучение Один цикл приводит к образованию лабильного фазы памяти, которая может быть обнаружена в течение 7 ч; Тем не менее, память, как правило, тестирование сразу определить, что называется обучения, приобретение или 2 мин памяти. Память измеряется в 30 мин или 1 ч упоминается как кратковременной памяти, в то время как3 часа памяти называют среднесрочной памяти. Разоблачение мух повторяющихся циклов обучения с промежутками между циклами подготовки (на расстоянии обучение) приводит к консолидированной форме долговременной памяти, которая зависит CREB транскрипция и длится до недели. Обучение без пробелов (массированная подготовка) приводит к образованию анестезии устойчивостью памяти (ARM), который похож на долговременной памяти, как правило, измеряется через 24 часа после 5 циклов обучения 7,13,15-17,20,21. При таком подходе эффект различных генных мутаций на этих различных фаз памяти может быть определена. Промоутер приводом выражение световой или чувствительных к температуре трансгенов, чтобы активировать или блокировать нейронной активности специфических нейронов позволяет исследовать которых нейроны необходимы для приобретения памяти, консолидации и поиска 3,4,11,15,16,20, 22-24. Память на 1 час, как правило, измеряется при изучении возрастной ухудшение памяти, потому что этой фORM памяти появляется особенно уязвимы к воздействию старения 11-13. Полный спектр поведенческих и генетических элементов управления выполняются с экспериментами памяти, например, определить, является ли дефект производительность, потому что из центрального дефекта памяти или периферической сенсорной дефекта, который предотвращает муху от ощущая током или обонятельный кий 5 -7, 1 7, 25,26.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:28px;">Materials</td>
			<td style="width:139px;height:28px;">Source</td>
			<td style="width:116px;height:28px;">Cat. No.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">3-Octanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">218405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">4-Methyl cyclohexanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">15,309-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Benzaldehyde</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">418099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Mineral Oil</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Fluka</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">BP2629-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Hexyl acetate</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">108154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Fructose</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:22px;">Agarose</td>
			<td style="width:139px;height:22px;">Bioline</td>
			<td style="width:116px;height:22px;">BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drosophila adult olfactory shock learning

Drosophila были использованы в классических экспериментах кондиционирования на протяжении более 40 лет, что существенно облегчает наше понимание памяти, в том числе выяснение молекулярных механизмов, вовлеченных в когнитивных заболеваний 1-7. Обучение и память могут быть проанализированы в личинок, чтобы изучить влияние на развитие нервной системы генов 8-10 и у мух, чтобы измерить вклад взрослых генов пластичности 1-7. Кроме того, короткая продолжительность жизни дрозофилы облегчает анализ генов, опосредующих возрастное ухудшение памяти 5,11-13. Наличие многих индуцируемых промоторов, которые подразделяют Drosophila нервную систему, позволяет определить, когда и где интерес ген необходим для нормального памяти, а также реле различных аспектов подкрепления сигнала 3,4,14,16. Изучение памяти у взрослых дрозофил позволяет для детального анализаповедение и схема участие и измерение долговременной памяти 15 -17. Длина взрослой стадии вмещает долгосрочные генетические, поведенческие, диетические и фармакологические манипуляции памяти, в дополнение к определению эффект старения и нейродегенеративных заболеваний на память 3-6,11-13,15-21. Классическая кондиционирования индуцируется одновременного представления нейтральным запахом кия (условного раздражителя, CS +) и армирующей стимула, например., Поражению электрическим током или сахарозы, (безусловный раздражитель, США), что стало ассоциироваться друг с другом животным 1,16. Второй условный раздражитель (CS -) впоследствии представлены без США. На этапе тестирования, Drosophila одновременно представлены CS + и Cs-запахов. После Drosophila предоставляются времени, чтобы выбрать между запахов, распределение животных регистрируется. Эта процедура альминимумы ассоциативным отвращение или аппетитивная кондиционирования чтобы быть надежно оценена без предвзятости, введенной врожденной предпочтение либо условных раздражителей. Различные контрольные эксперименты проводятся также для проверки все генотипы нормально реагируют запахом и арматуры в одиночку.

Индекс производительности (PI), служит мерой памяти. Таблица 1 иллюстрирует характерную вычисление PI. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> МЧ в паре с током </td><td> 3-октябре в паре с током </td></tr><tr><td> Мухи избегая МЧ (в октябре трубки) = 80 Мухи, предпочитающие МЧ (в MCH трубки) = 20 PI 1 - (80-20) / 80 + 20) = 0,6 </td><td> Мухи избегая октября (в MCH трубки) = 75 Мухи, предпочитающие октября (в октябре трубки) = 25 PI 2 = (75-25) / (75 + 25) = 0,5 </td></tr><tr><td> PI эксперимента = (0,6 + 0,5) /2=0.55 </td><td></td></tr></tbody></table> Таблица 1 представитель расчет индекса производительности с использованием наглядных данных. Индексы производительности для различных экспериментов можно сравнить с выяснения эффекта памяти. Как только такаясравнение показано на рисунке 3, который содержит результаты серии экспериментов, выполненных с Canton S дикого типа взрослых мух (WT) и балбес обучения мутантный взрослых мух 1. Средняя из 10 ИП обеспечивается, с барами об ошибках, представляющих стандартную ошибку среднего (SEM). Эти результаты показывают, что Dunce мухи показывают снижение обучения по сравнению с диким типом. <img alt="Рисунок 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1.jpg" /> Рисунок 1 взрослый Экспериментальная установка. Мухи обучены и испытаны в T лабиринт. Обучение включает в себя представляя запах А с электрическим током с последующей второй запаха B без поражения электрическим током. После периода отдыха в средней камере мухи представлены обоих одновременно запахов. Мухи оказались в ловушкев двух труб и собраны и подсчитаны получить баллы обучения / памяти. <img alt="Рисунок 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2.jpg" /> Рисунок 2 Протокол обучение взрослых. Мухи тренируются в два этапа. Первый шаг, где мухи получают запах (CS +) в паре с электрическим током (США) в течение 60 сек. На следующем этапе мухи приема второго запах (CS-) без поражения электрическим током. Мухи затем оставляют на 90 сек, после чего они проверены на их выбор между CS + и CS-. <img alt="Рисунок 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig3highres.jpg" width="400" /> Рисунок 3 Представитель график, показывающий балбес и дикого типа обучения во взрослой дрозофилы. </strong&gt; WT и балбес мухи были протестированы после одного сеанса обучения. Балбес мухи показывают снижение в изучении сравнению с WT (п = 10).

Watch this Scientific Journal Video about Drosophila Adult Olfactory Shock Learning at JoVE.com

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Метод измерения взрослых Drosophila ассоциативной памяти описывается. Анализ основан на способности лету ассоциировать запах, представленный с отрицательным подкреплением (электрическим током), и затем вызвать эту информацию в более позднее время, позволяя памяти должна быть измерена.

Drosophila взрослых Обонятельная Shock Обучение

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

drosophila-adult-olfactory-shock-learning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

27.7K Views.  University of Bristol.  Метод измерения взрослых Drosophila ассоциативной памяти описывается. Анализ основан на способности лету ассоциировать запах, представленный с отрицательным подкреплением (электрическим током), и затем вызвать эту информацию в более позднее время, позволя?...

Video: Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of these diseases, including Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's disease are characterized by age-dependent deterioration in learning and memory functions and movement coordination2. Here we use behavioral assays, including the negative geotaxis assay3 and the aversive phototaxic suppression assay (APS assay)4,5, to show that some of the behavior characteristics associated with human neurodegeneration can be recapitulated in flies. In the negative geotaxis assay, the natural tendency of flies to move against gravity when agitated is utilized to study genes or conditions that may hinder locomotor capacities. In the APS assay, the learning and memory functions are tested in positively-phototactic flies trained to associate light with aversive bitter taste and hence avoid this otherwise natural tendency to move toward light. Testing these trained flies 6 hours post-training is used to assess memory functions. Using these assays, the contribution of any genetic or environmental factors toward developing neurodegeneration can be easily studied in flies.

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Behavior assays for measuring locomotor functions, learning, and memory abilities in Drosophila.

Опорно-двигательного опробование, обучение и память Дефицит Drosophila Модели нейродегенерации

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells in the walls of the lateral ventricle give rise to neuroblasts that migrate for several millimeters along the rostral migratory stream (RMS) to reach and incorporate into the olfactory bulb. To study the different steps and the impact of adult-born neuron integration into preexisting olfactory circuits, it is necessary to selectively label and manipulate the activity of this specific population of neurons. The recent development of optogenetic technologies offers the opportunity to use light to precisely activate this specific cohort of neurons without affecting surrounding neurons4,5. Here, we present a series of procedures to virally express Channelrhodopsin2(ChR2)-YFP in a temporally restricted cohort of neuroblasts in the RMS before they reach the olfactory bulb and become adult-born neurons. In addition, we show how to implant and calibrate a miniature LED for chronic in vivo stimulation of ChR2-expressing neurons.

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Adult-born neurons of the olfactory bulb can be optogenetically controlled using Channelrhodopsin2-expressing lentiviral injection in the rostral migratory stream and chronic photostimulation with an implanted miniature LED.

Селективный Вирусный трансдукция взрослых происхождения обонятельных нейронов при хроническом В естественных условиях Optogenetic Стимуляция

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

Ассоциативный аппетит обонятельного обучения в<em&gt; Drosophila</em&gt; Личинки

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including lens-secreting cone cells, pigment cells, a bristle cell and eight photoreceptors (PRs) R1-R8 2. The PRs have specialized microvillar structures, the rhabdomeres, which contain light-sensitive pigments, the Rhodopsins (Rhs). The rhabdomeres of six PRs (R1-R6) form a trapezoid and contain Rh1 3 4. The rhabdomeres of R7 and R8 are positioned in tandem in the center of the trapezoid and share the same path of light. R7 and R8 PRs stochastically express different combinations of Rhs in two main subtypes5: In the 'p' subtype, Rh3 in pR7s is coupled with Rh5 in pR8s, whereas in the 'y' subtype, Rh4 in yR7s is associated with Rh6 in yR8s 6 7 8.
Early specification of PRs and development of ommatidia begins in the larval eye-antennal imaginal disc, a monolayer of epithelial cells. A wave of differentiation sweeps across the disc9 and initiates the assembly of undifferentiated cells into ommatidia10-11. The 'founder cell' R8 is specified first and recruits R1-6 and then R7 12-14. Subsequently, during pupal development, PR differentiation leads to extensive morphological changes 15, including rhabdomere formation, synaptogenesis and eventually rh expression.
In this protocol, we describe methods for retinal dissections and immunohistochemistry at three defined periods of retina development, which can be applied to address a variety of questions concerning retinal formation and developmental pathways. Here, we use these methods to visualize the stepwise PR differentiation at the single-cell level in whole mount larval, midpupal and adult retinas (Figure 1).

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The Drosophila retina is a crystal-like lattice composed of a small number of cell types that are generated in a stereotyped manner 1. Its amenability to sophisticated genetic analysis allows the study of complex developmental programs. This protocol describes dissections and immunohistochemistry of retinas at three discrete developmental stages, with a focus on photoreceptor differentiation.

Вскрытие и иммуногистохимического личинок, куколок и взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt; Сетчатки

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

Всего Гора иммунного обонятельных рецепторов нейронов в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Антенны

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

Электрофизиологические Способ записи ответов внутриклеточный амперных<em&gt; Drosophila</em&gt; Фоторецепторов и Интернейроны к световой раздражитель<em&gt; В Vivo</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

Обонятельные Поведения, испытываемых Computer Отслеживание<em&gt; Drosophila</em&gt; В четырехквадрантном одориметра

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival. The most obvious application of these chemosenses is to be able to distinguish good food sources from potentially dangerous food sources. Gustation requires physical contact with a chemical compound which is able to signal through taste receptors that are expressed on the surface of neurons. In insects, these gustatory neurons can be located across the animal's body allowing taste to play an important role in many different behaviors. Insects typically prefer compounds containing sugars, while compounds that are considered bitter tasting are avoided. Given the basic biological importance of taste, there is intense interest in understanding the molecular mechanisms underlying this sensory modality. We describe an adult Drosophila taste assay which reflects the preference of the animals for a given tastant compound. This assay may be applied to animals of any genetic background to examine the taste preference for a desired soluble compound.

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste is an important sensory process which facilitates attraction to beneficial substances and avoidance of toxic substances. This protocol describes a simple ingestion assay for determining Drosophila gustatory preference for a given chemical compound.

Вкус Предпочтение анализа для взрослых<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Дрозофила в качестве меры обучения и памяти

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.