Reconocemos centros de acopio en Bloomington para la cepa de mosca. Este trabajo fue apoyado por una beca de investigación del BBSRC (BB / G008973 / 1).

1. Preparación Fly <ol><li> Outcross todos los mutantes, Gal4 / UAS y otras líneas con una cepa de tipo salvaje, como CSw-, durante al menos seis generaciones antes de los experimentos de comportamiento para controlar para el fondo genético 26. </li><li> Crecer moscas en una dieta estándar de alimentos de harina de maíz, la levadura y la melaza en un ciclo de luz-oscuridad de 12:12 horas a 25 ° C, a menos manipulaciones específicas requieren una temperatura diferente. <ol><li> Para determinar los efectos de la expresión transgénica: Uso 18 ° C para evitar la expresión de transgenes en (TARGET) Gal4 GAL80 ct a través de desarrollo y luego pasar las moscas a una incubadora a 30 ° 1-2 días antes del experimento conductual. Llevar a cabo el experimento a 30 ° C para determinar los efectos de la expresión del transgen 3,4,6,7,14. </li><li> Para los experimentos que utilizan canales TRPA1 activados por calor para estimular las neuronas: Levante las moscas a 23 ° C, que es una temperatura conocidapara mantener un canal inactivo, y luego cambiar a una habitación comportamiento a 30 ° C para activar el TRPA1 neuronas que expresan. </li><li> Para experimentos con temperatura Shibire sensibles a bloquear la salida sináptica 11, 14,24: Rear las moscas a 18 ° C y realizar pruebas a 30 ° C. </li></ol></li><li> Recoge las moscas 1-2 días antes del experimento y contarlos en grupos de aproximadamente 25 bajo CO 2 anestesia ligera. Guarde las moscas por lo menos S / N en frascos de comida (sin levadura) a 25 ° C (a menos manipulaciones específicas requieren una temperatura diferente) y una humedad relativa del 70% en una sala de ambiente controlado con luz 12:12 hr: condiciones de oscuridad hasta el momento del experimento. Nota: Este almacenamiento permite que las moscas se aclimaten a prueba el aprendizaje posterior realizado en la sala de ambiente controlado, que tenía las condiciones óptimas para el aprendizaje Drosophila y, sobre todo, elimina cualquier envi diariavariaciones ambientales que podrían haber afectado el fenotipo conductual. </li></ol> 2. Preparación antes del experimento <ol><li> Lleve a cabo los experimentos en un plexiglás T-laberinto a medida (Figura 1). </li><li> Compruebe regularmente el tubo de ajuste para asegurar que se obtiene un sello hermético durante el experimento. Si es necesario, cambiar las juntas tóricas que sellan los compartimentos en el interior de la T-laberinto. </li><li> Coloque rejillas de cobre a la medida interior de los tubos de formación. Revise y limpie estas rejillas regularmente, y reemplazar si es oxidado. Coloque las rejillas de cobre a través de cables de pinzas de cocodrilo que se ejecutan a una caja de interruptor conectado a un estimulador eléctrico. Utilice un voltímetro para asegurarse de que el aparato está entregando el shock necesario. </li><li> Utilizar G-abrazaderas para sujetar firmemente el laberinto para evitar cualquier fuga de aire. </li><li> Conecte el laberinto en T a un tubo que corre a una bomba de aire, para permitir que los olores que se pueden extraer a través de las moscas y posteriormente retirados de la T-laberinto. Mantener el aire levefluir a ~ 2 L / min </li></ol> 3. Olor diluciones <ol><li> Use dos olores diferentes en concentraciones tales que las moscas muestran una preferencia igual para ambos olores. Utilice 4-metilciclohexanol (1:67) y 3-octanol (1: 100) diluido en aceite mineral 7,13. Nota: Determine cuidadosamente estas concentraciones, que variarán por el laboratorio. Por ejemplo otros utilizan 1:10 para ambos olores 24. Otros olores comúnmente usados ​​incluyen acetato de etilo y acetato de iso-amilo. </li><li> Pipetear 30 l de la olor diluido en una taza de olor a medida colocado en un bloque de olor cubierto por un tubo de plástico con una tapa perforada que permite que el aire sea aspirado en el olor en la copa, exponiendo así las moscas a un penacho de olor. </li></ol> 4. protocolo de entrenamiento (Figuras 1 y 2) <ol><li> Para el adulto choque acondicionado olfativa, realizar todos los experimentos bajo una tenue luz roja (es decir., LED rojo), lo que permite al investigador ver pero impide que el fly de ver, permitiendo así que las moscas se concentren en el olfato en contraposición a las entradas visuales. </li><li> Introducir las moscas en el tubo de entrenamiento y luego adjuntar a la T-laberinto y les permiten adaptarse al tubo y el flujo de aire durante 90 segundos. </li><li> Presentar el primer olor (4-metilciclohexanol, MCH) con un choque de 60 V (que consta de doce pulsos 1.25 segundos con intervalos entre pulsos 3,75 seg) para una duración total de 60 segundos. </li><li> Siga el choque con un periodo de descanso de 30 segundos sin un olor o una descarga. </li><li> Presentar el segundo olor (3-octanol, OCT) durante 60 segundos sin un shock. </li><li> Siga el choque con un periodo de descanso de 30 segundos sin un olor o una descarga. </li><li> Mueva las moscas de la cámara de la formación en la cámara central de la T-laberinto girando el laberinto en T en su lado y suavemente golpeando el fondo del laberinto en T en una superficie blanda, como una vieja estera del ratón. Mantener las moscas en la cámara central durante 90 segundos. </li><li> Montar los tubos de elección en el bottom del aparato para formar el laberinto en T. </li><li> Para medir el aprendizaje, mover las moscas hasta el punto de la T-laberinto, donde fueron expuestos simultáneamente a los dos olores elección y avanzar hacia una. Llevar a cabo un período de prueba durante 120 segundos. </li><li> Trampa las moscas en los tubos de elección deslizando la cámara central de este modo hasta el bloqueo de los extremos de los tubos de elección. Recoger las moscas en cada brazo del laberinto en T y en el compartimiento central en viales de alimentos y recuento. </li><li> Para medir la memoria, recoger las moscas después de la formación (4.6) y transferirlos desde el laberinto en T a viales de alimentos sin levadura. Tienda vuela en la oscuridad a 25 ° C y 70% de humedad durante el tiempo necesario restante para determinar la fase de la memoria de interés (véase la introducción). Reintroducir las moscas a la T-laberinto como en la etapa 4.7. </li><li> Para la memoria a largo plazo, utilice un laberinto a la medida que permite a varios lotes de moscas para ser entrenados de forma simultánea. Administrar 5 ciclos de formación con un 15 min entre ciclos intervalo (spaced) o sin un intervalo entre ciclos (masivo). Mantener las moscas a 18 ° C y 70% de humedad en la oscuridad hasta que las pruebas. Antes de la prueba, mover las moscas a 25 ° C y deje que se aclimaten durante al menos 1 hora. Evaluar la memoria a largo plazo 24 horas después del entrenamiento. </li><li> Después de los experimentos de comportamiento, limpiar las tazas de olor con agua caliente y detergente sin olor. Después del secado, capa las tazas con 10 l Sigmacote. Secar la Sigmacote por calentamiento en un horno de microondas. De vez en cuando limpie el laberinto en T de tubos de metacrilato y bloques de olor con agua caliente y detergente sin olor. </li></ol> 5. Cálculo del Índice de Rendimiento: una medida de la memoria de las moscas <ol><li> Calcular el Índice de Rendimiento (PI) para cada condición como el número de moscas evitando el olor de choque-emparejado (CS -) menos el número de moscas que eligen el olor de choque-emparejado (CS +) dividido por el número total de moscas (CS - + CS +) 1. PeÍndice rformance (PI) = (# CS - vuela - # CS + vuela) / (# total de moscas) </li><li> Calcular la PI final del experimento promediando la PI del experimento en el que MCH era el olor de choque-emparejado y uno en el que la tomografía óptica fue el olor de choque-emparejado. Esto elimina cualquier sesgo de las moscas que tienen una mayor preferencia por un olor. </li></ol> 6. Controles sensoriomotora <ol><li> Realizar olor agudeza introduciendo ~ 40-50 moscas en el laberinto en T 6,7,17. </li><li> Después de 90 segundos, mueva las moscas hasta el punto de elección, y les permitirá a 2 min de elegir entre los olores puros y aire. </li><li> Recoger y contar las moscas. Calcular el porcentaje de evitación dividiendo el número total de moscas que optaron por el olor de los que participaron en la prueba. </li><li> Para sorpresa reactividad 6,7,17, introducir las moscas en la cámara de descarga. </li><li> Después de 90 segundos de descanso, administrar una descarga eléctrica de 60 V DC, de la que las moscas pueden escapar a un semejantetubo sin un shock. </li><li> Permita 2 min para las moscas para elegir; recoger y contar las moscas. Calcular el porcentaje evitación de shock dividiendo el número de moscas que evitaron el choque escapando el tubo de choque por el número total de moscas en el experimento. Incluya las moscas que permanecen en la cámara central en el total de los que escaparon de la descarga eléctrica. </li></ol>

<ol>
	<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster.">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> Journal of Comparative Physiology A. 157, 263-277 (1985).</li><li>Bolduc, F. V., Tully, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruit+flies+and+intellectual+disability.">Fruit flies and intellectual disability.</a> Fly (Austin). 3, 91-104 (2009).</li><li>McGuire, S. E., Deshazer, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+olfactory+learning+and+memory+research+in+Drosophila+melanogaster.">Thirty years of olfactory learning and memory research in Drosophila melanogaster.</a> Prog Neurobiol. 76, 328-347 (2005).</li><li>Keene, A. C., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+olfactory+memory:+single+genes+to+complex+neural+circuits.">Drosophila olfactory memory: single genes to complex neural circuits.</a> Nat Rev Neurosci. 8, 341-354 (2007).</li><li>Chiang, H. C., Wang, L., Xie, Z., Yau, A., Zhong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3+kinase+signaling+is+involved+in+Abeta-induced+memory+loss+in+Drosophila.">PI3 kinase signaling is involved in Abeta-induced memory loss in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107, 7060-7065 (2010).</li><li>Kanellopoulos, A. K., Semelidou, O., Kotini, A. G., Anezaki, M., Skoulakis, E. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+deficits+consequent+to+reduction+of+the+Fragile+X+mental+retardation+protein+result+from+metabotropic+glutamate-mediated+inhibition+of+cAMP+signalling+in+Drosophila.">Learning and memory deficits consequent to reduction of the Fragile X mental retardation protein result from metabotropic glutamate-mediated inhibition of cAMP signalling in Drosophila.</a> J Neurosci. 32, 13111-13124 (2012).</li><li>Malik, B. R., Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+and+CaMKII+function+in+the+mushroom+body+a&#8217;/&#223;&#8217;+neurons+during+Drosophila+memory+formation.">CASK and CaMKII function in the mushroom body a&#8217;/&#223;&#8217; neurons during Drosophila memory formation.</a> Front Neural Circuits. 7, 52 (2013).</li><li>Gerber, B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+larva+as+a+model+for+studying+chemosensation+and+chemosensory+learning:+a+review.">The Drosophila larva as a model for studying chemosensation and chemosensory learning: a review.</a> Chem Senses. 32, 65-89 (2007).</li><li>Gillespie, J. M., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CASK+regulates+CaMKII+autophosphorylation+in+control+of+synaptic+growth+and+appetitive+learning.">CASK regulates CaMKII autophosphorylation in control of synaptic growth and appetitive learning.</a> Front Molecular Neuroscience. 6, 27 (2013).</li><li>Apostolopoulou, A. A., Widmann, A., Rohwedder, A., Pfitzenmaier, J. E., Thum, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetitive+associative+olfactory+learning+in+Drosophila+larvae.">Appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (72), e4334 (2013).</li><li>Tonoki, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+impairs+intermediate-term+behavioral+memory+by+disrupting+the+dorsal+paired+medial+neuron+memory+trace.">Aging impairs intermediate-term behavioral memory by disrupting the dorsal paired medial neuron memory trace.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 109, 6319-6324 (2012).</li><li>Yamazaki, D., Horiuchi, J., Nagano, S., Tamura, T., Saitoe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+DCO+mutation+suppresses+age-related+memory+impairment+without+affecting+lifespan.">The Drosophila DCO mutation suppresses age-related memory impairment without affecting lifespan.</a> Nat Neurosci. 10, 478-484 (2007).</li><li>Cavaliere, S., Malik, B. R., Hodge, J. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ+channels+regulate+age-related+memory+impairment.">KCNQ channels regulate age-related memory impairment.</a> PLoS One. 8, e62445 (2013).</li><li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly.">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li><li>Isabel, G., Pascual, A., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exclusive+consolidated+memory+phases+in+Drosophila.">Exclusive consolidated memory phases in Drosophila.</a> Science. 304, 1024-1027 (2004).</li><li>Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shocking+revelations+and+saccharin+sweetness+in+the+study+of+Drosophila+olfactory+memory.">Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory.</a> Curr Biol. 23, R752-R763 (2013).</li><li>Tully, T., Preat, T., Bonyton, S. C., Del Vecchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila.">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li><li>Lyons, L. C., Roman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+short-term+memory+in+Drosophila.">Circadian modulation of short-term memory in Drosophila.</a> Learning and memory. 16, 19-27 (2009).</li><li>Le Glou, E., Seugnet, L., Shaw, P. J., Preat, T., Gouguel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+consolidated+memory+retrieval+following+sleep+deprivation+in+Drosophila.">Circadian modulation of consolidated memory retrieval following sleep deprivation in Drosophila.</a> Sleep. 35 (10), 1377-1384 (2012).</li><li>Placais, P. Y., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+favour+survival+under+food+shortage,+the+brain+disables+costly+memory.">To favour survival under food shortage, the brain disables costly memory.</a> Science. 339, 440-442 (2012).</li><li>Hirano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fasting+launches+CRTC+to+faciltate+long-term+memory+formation+in+Drosophila.">Fasting launches CRTC to faciltate long-term memory formation in Drosophila.</a> Science. 339, 443-446 (2012).</li><li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae.">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li><li>Claridge-Chang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Writing+memories+with+light-addressable+reinforcement+circuitry.">Writing memories with light-addressable reinforcement circuitry.</a> Cell. 139, 405-415 (2009).</li><li>Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+dopamine+pathways+induce+aversive+odor+memories+with+different+stability.">Three dopamine pathways induce aversive odor memories with different stability.</a> PLoS Genetics. 8, e1002768 (2012).</li><li>Connolly, J. B., Tully, T., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a Practical Approach. , 265-319 (1998).</li><li>Connolly, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+disrupted+by+impaired+Gs+signaling+in+Drosophila+mushroom+bodies.">Associative learning disrupted by impaired Gs signaling in Drosophila mushroom bodies.</a> Science. 274, 2104-2107 (1996).</li><li>Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traces+of+Drosophila+memory.">Traces of Drosophila memory.</a> Neuron. 70, 8-19 (2011).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+kenyon+cells+in+situ.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila kenyon cells in situ.</a> J Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Young, J. M., Wessnitzer, J., Armstrong, J. D., Webb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elemental+and+non-elemental+olfactory+learning+in+Drosophila.">Elemental and non-elemental olfactory learning in Drosophila.</a> Neurobiol Learn Mem. 96, 339-353 (2011).</li><li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. .. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+alcohol+reward.">Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li><li>Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+reveals+neural+circuit+mechanisms+of+fly+memory.">Dopamine reveals neural circuit mechanisms of fly memory.</a> Trends Neurosci. 33, 457-464 (2010).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El ensayo de choque de aprendizaje olfativo de Drosophila adulta que aquí se presenta permite el análisis de los mecanismos moleculares que subyacen a las diferentes fases de la memoria, incluyendo la memoria a largo plazo 15-17. Así como la determinación del efecto de los ritmos circadianos del sueño 18, 19, 20,21, dieta senescencia 11-13, enfermedad neurodegenerativa 5 y tratamientos farmacológicos 5,6,19 en la memoria. Muchos enfoques poderosos se han desarrollado recientemente para la obtención de imágenes funcionales de los circuitos neuronales que median la memoria olfativa en moscas 3,4,7,11,16,27. Estas técnicas de optogenética utilizan el vasto repertorio de los diferentes promotores disponibles en Drosophila 14,16. Estos promotores se utilizan para expresar codificados genéticamente de calcio y de AMPc reporteros en las neuronas de la memoria 16,27 para estudiar el efecto de mutaciones genéticas específicas en huellas de la memoria. The uso de promotores condicionales y mutaciones en los adultos permite el estudio de la función de post-desarrollo de un producto génico en la memoria 3,4,6,7,13,14. Imaging y enfoques conductuales se pueden combinar con canales-luz y activados por calor para estimular o inhibir diferentes neuronas en el circuito de memoria 11,14,16,22-24 para dilucidar aún más su función. Además, las neuronas de la memoria del cuerpo de hongo se puede acceder a su conjunto de células grabaciones patch clamp 28, y las técnicas matemáticas y computacionales se utilizan para modelar Drosophila memoria olfativa 29. Estos avances experimentales, combinados con las diferentes formas de protocolos de memoria asociativa introducidas aquí, permiten Drosophila que se utiliza para modelar las-molecular y de nivel de circuito de los cambios en la memoria asociativa que se producen en respuesta a la recompensa, el castigo, la motivación, la adicción, el envejecimiento y la enfermedad 5,6,11-13,16,30-31.

El método presentado aquí es la descrita por Tully y Quinn con algunas modificaciones pequeñas 1. El experimento se realiza en dos fases: las moscas están capacitados en la primera fase, y las moscas entrenadas son probados en la segunda fase. Durante el entrenamiento, un grupo de moscas están expuestos simultáneamente al olor 1 (CS +) y una descarga eléctrica (US) en un tubo de formación. Las moscas luego reciben olor 2 (CS -) sin una descarga eléctrica. Este único emparejamiento de un olor particular, con un choque se llama entrenamiento 1-ciclo, y los olores que se utilizan con mayor frecuencia son de 4 metilciclohexanol (MCH) y 3-octanol (OCT). La formación de un ciclo conduce a la formación de una fase lábil de memoria que puede ser detectado durante un máximo de 7 horas; Sin embargo, la memoria suele ser probado de inmediato para determinar cuál es el aprendizaje denominado, adquisición o memoria de 2 min. Memoria medido a 30 min o 1 hr se refiere como la memoria a corto plazo, mientras3 horas de memoria se conoce como memoria intermedia. La exposición de las moscas a los ciclos de formación repetitivas con huecos entre los ciclos formativos de formación (espacio) conduce a una forma consolidada de la memoria a largo plazo, que es la transcripción CREB dependiente y dura hasta una semana. Formación sin huecos (formación masiva) conduce a la formación de la memoria anestesia resistente (ARM), que similar a la memoria a largo plazo, se mide típicamente 24 h después de 5 ciclos de formación 7,13,15-17,20,21. Con este enfoque, el efecto de diversas mutaciones de genes en estas diferentes fases de la memoria se puede determinar. La expresión promotor impulsado de transgenes-luz o sensibles a la temperatura para activar o bloquear la actividad neuronal de las neuronas específicas permite investigar qué neuronas se requieren para la adquisición de la memoria, la consolidación y recuperación 3,4,11,15,16,20, 22-24. Memoria en 1 hora se mide normalmente en el estudio de trastornos de la memoria relacionada con la edad, porque este form de memoria aparece particularmente vulnerables a los efectos de la edad 11-13. Una gama completa de controles de comportamiento y genéticos se llevan a cabo con los experimentos de memoria, por ejemplo, para determinar si un defecto de rendimiento es debido a un defecto de memoria central o un defecto sensorial periférica que impide la marcha desde la detección de la descarga o referencia olfativa 5 -7, 1 7, 25,26.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:28px;">Materials</td>
			<td style="width:139px;height:28px;">Source</td>
			<td style="width:116px;height:28px;">Cat. No.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">3-Octanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">218405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">4-Methyl cyclohexanol</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">15,309-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Benzaldehyde</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">418099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Mineral Oil</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Fluka</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">BP2629-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Hexyl acetate</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">108154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:20px;">Fructose</td>
			<td style="width:139px;height:20px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;height:20px;">F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:189px;height:22px;">Agarose</td>
			<td style="width:139px;height:22px;">Bioline</td>
			<td style="width:116px;height:22px;">BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drosophila adult olfactory shock learning

Drosophila se han utilizado en experimentos de condicionamiento clásico durante más de 40 años, lo que facilita en gran medida nuestra comprensión de la memoria, incluyendo la elucidación de los mecanismos moleculares implicados en enfermedades cognitivas 1-7. Aprendizaje y la memoria se pueden ensayar en las larvas para estudiar el efecto de los genes del desarrollo neurológico 8-10 y en las moscas para medir la contribución de los genes de plasticidad adultos 1-7. Además, la corta vida de Drosophila facilita el análisis de los genes que median deterioro de la memoria relacionada con la edad 5,11-13. La disponibilidad de muchos promotores inducibles que subdividen el sistema nervioso de Drosophila hace posible determinar cuándo y dónde se requiere un gen de interés para la memoria normal, así como el relé de diferentes aspectos de la señal de refuerzo 3,4,14,16. El estudio de la memoria en adultos Drosophila permite un análisis detallado de lacomportamiento y los circuitos en cuestión y una medida de la memoria a largo plazo 15 -17. La longitud de la etapa adulta acomoda manipulaciones genéticas, de comportamiento, dietéticos y farmacológicos a largo plazo de la memoria, además de determinar el efecto del envejecimiento y la enfermedad neurodegenerativa en la memoria 3-6,11-13,15-21. El condicionamiento clásico es inducida por la presentación simultánea de un olor clave neutra (estímulo condicionado, CS +) y un estímulo de refuerzo, por ejemplo., Una descarga eléctrica o sacarosa, (estímulo incondicionado, EE.UU.), que se asocian entre sí por el animal 1,16. Un estímulo segundo condicionado (EC -) se presentó posteriormente y sin los EE.UU.. Durante la fase de pruebas, Drosophila se presentan simultáneamente con CS + CS y olores. Después de la Drosophila se proporcionan tiempo para elegir entre los olores, se registra la distribución de los animales. Este procedimiento almínimos asociativas condicionamiento aversivo o apetitivo a medir con fiabilidad sin un sesgo introducido por la preferencia innata por cualquiera de los estímulos condicionados. Varios experimentos de control también se realizan para comprobar si todos los genotipos responden normalmente a olor y refuerzo sola.

El índice de rendimiento (PI) sirve como medida de la memoria. La Tabla 1 ilustra un cálculo representante de PI. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> MCH emparejado con una descarga </td><td> 3-OCT emparejado con una descarga </td></tr><tr><td> Las moscas evitando MCH (en tubo de octubre) = 80 Las moscas prefieren MCH (en tubo MCH) = 20 PI 1 - (80-20) / 80 + 20) = 0,6 </td><td> Las moscas evitando octubre (en tubo MCH) = 75 Las moscas prefieren octubre (en tubo de octubre) = 25 PI 2 = (75-25) / (75 + 25) = 0,5 </td></tr><tr><td> PI del experimento = (0,6 + 0,5) /2=0.55 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Un cálculo representante del índice de rendimiento utilizando datos ilustrativos. Índices de rendimiento para diferentes experimentos se puede comparar para dilucidar los efectos de memoria. Una vez que talescomparación se muestra en la Figura 3, que contiene los resultados de una serie de experimentos realizados con Canton S moscas de tipo salvaje (WT) de adultos y de burro aprendizaje mutante moscas adultas 1. Se proporciona la media de 10 inhibidores de la proteasa, con barras de error representan el error estándar de la media (SEM). Estos resultados demuestran que las moscas de burro muestran una reducción en el aprendizaje en comparación con los de tipo salvaje. <img alt="Figura 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig1.jpg" /> Figura 1. El adulto experimental. Las moscas son entrenados y examinados en un laberinto T. La formación consiste en presentar un olor A con descarga eléctrica seguida de una segunda olor B sin descarga eléctrica. Después de un período de descanso en la cámara intermedia las moscas se presentan tanto con los olores de forma simultánea. Las moscas se atrapanen los dos tubos y recogido y contado para obtener puntajes de aprendizaje / memoria. <img alt="Figura 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig2.jpg" /> Figura 2 El protocolo de formación de adultos. Las moscas están entrenando en dos pasos. El primer paso donde las moscas reciben un olor (CS +) emparejado con una descarga eléctrica (EE.UU.) durante 60 segundos. En el siguiente paso moscas reciben una segunda olor (CS) sin descarga eléctrica. Las moscas se dejan descansar durante 90 segundos después de lo cual se ensayaron para determinar su elección entre CS + y CS-. <img alt="Figura 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/50107/50107fig3highres.jpg" width="400" /> Figura 3. Un gráfico representativo que muestra burro y el aprendizaje de tipo salvaje en adultos de Drosophila. </strong&gt; WT y moscas de burro se ensayaron después de una sesión de entrenamiento. Dunce moscas muestran una reducción en el aprendizaje en comparación con el WT (n = 10).

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Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

El método para medir de adultos de Drosophila memoria asociativa se describe. El ensayo se basa en la capacidad de la mosca para asociar un olor presentado con un reforzador negativo (descarga eléctrica) y luego recuperar esta información en un momento posterior, permitiendo que la memoria a medir.

Drosophila Adulto olfativa Choque Aprendizaje

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

drosophila-adult-olfactory-shock-learning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

27.7K vistas.  University of Bristol.  El método para medir de adultos de Drosophila memoria asociativa se describe. El ensayo se basa en la capacidad de la mosca para asociar un olor presentado con un reforzador negativo (descarga eléctrica) y luego recuperar esta información en un momento posterior, permitiendo que la memoria a medir. 

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Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of these diseases, including Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's disease are characterized by age-dependent deterioration in learning and memory functions and movement coordination2. Here we use behavioral assays, including the negative geotaxis assay3 and the aversive phototaxic suppression assay (APS assay)4,5, to show that some of the behavior characteristics associated with human neurodegeneration can be recapitulated in flies. In the negative geotaxis assay, the natural tendency of flies to move against gravity when agitated is utilized to study genes or conditions that may hinder locomotor capacities. In the APS assay, the learning and memory functions are tested in positively-phototactic flies trained to associate light with aversive bitter taste and hence avoid this otherwise natural tendency to move toward light. Testing these trained flies 6 hours post-training is used to assess memory functions. Using these assays, the contribution of any genetic or environmental factors toward developing neurodegeneration can be easily studied in flies.

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Behavior assays for measuring locomotor functions, learning, and memory abilities in Drosophila.

Locomotor ensayo, aprendizaje, memoria y déficit en Drosophila Los modelos de neurodegeneración

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Investigación

Neurociencias

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells in the walls of the lateral ventricle give rise to neuroblasts that migrate for several millimeters along the rostral migratory stream (RMS) to reach and incorporate into the olfactory bulb. To study the different steps and the impact of adult-born neuron integration into preexisting olfactory circuits, it is necessary to selectively label and manipulate the activity of this specific population of neurons. The recent development of optogenetic technologies offers the opportunity to use light to precisely activate this specific cohort of neurons without affecting surrounding neurons4,5. Here, we present a series of procedures to virally express Channelrhodopsin2(ChR2)-YFP in a temporally restricted cohort of neuroblasts in the RMS before they reach the olfactory bulb and become adult-born neurons. In addition, we show how to implant and calibrate a miniature LED for chronic in vivo stimulation of ChR2-expressing neurons.

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Adult-born neurons of the olfactory bulb can be optogenetically controlled using Channelrhodopsin2-expressing lentiviral injection in the rostral migratory stream and chronic photostimulation with an implanted miniature LED.

Transducción viral selectiva de adultos nacidos en las neuronas olfativas de las enfermedades crónicas En vivo Estimulación Optogenetic

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

Apetitivo aprendizaje asociativo olfativa en<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including lens-secreting cone cells, pigment cells, a bristle cell and eight photoreceptors (PRs) R1-R8 2. The PRs have specialized microvillar structures, the rhabdomeres, which contain light-sensitive pigments, the Rhodopsins (Rhs). The rhabdomeres of six PRs (R1-R6) form a trapezoid and contain Rh1 3 4. The rhabdomeres of R7 and R8 are positioned in tandem in the center of the trapezoid and share the same path of light. R7 and R8 PRs stochastically express different combinations of Rhs in two main subtypes5: In the 'p' subtype, Rh3 in pR7s is coupled with Rh5 in pR8s, whereas in the 'y' subtype, Rh4 in yR7s is associated with Rh6 in yR8s 6 7 8.
Early specification of PRs and development of ommatidia begins in the larval eye-antennal imaginal disc, a monolayer of epithelial cells. A wave of differentiation sweeps across the disc9 and initiates the assembly of undifferentiated cells into ommatidia10-11. The 'founder cell' R8 is specified first and recruits R1-6 and then R7 12-14. Subsequently, during pupal development, PR differentiation leads to extensive morphological changes 15, including rhabdomere formation, synaptogenesis and eventually rh expression.
In this protocol, we describe methods for retinal dissections and immunohistochemistry at three defined periods of retina development, which can be applied to address a variety of questions concerning retinal formation and developmental pathways. Here, we use these methods to visualize the stepwise PR differentiation at the single-cell level in whole mount larval, midpupal and adult retinas (Figure 1).

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The Drosophila retina is a crystal-like lattice composed of a small number of cell types that are generated in a stereotyped manner 1. Its amenability to sophisticated genetic analysis allows the study of complex developmental programs. This protocol describes dissections and immunohistochemistry of retinas at three discrete developmental stages, with a focus on photoreceptor differentiation.

La disección e inmunohistoquímica de larva, pupa y adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinas

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

Todo el montaje de Immunolabeling olfativa del receptor de las neuronas en el<em&gt; Drosophila</em&gt; Antena

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

Método electrofisiológico para registrar las respuestas de voltaje intracelular<em&gt; Drosophila</em&gt; Los fotorreceptores y interneuronas a la luz Estímulos<em&gt; En Vivo</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

Comportamientos olfativas ensayó mediante seguimiento informático de<em&gt; Drosophila</em&gt; En un olfatómetro de cuatro cuadrantes

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival. The most obvious application of these chemosenses is to be able to distinguish good food sources from potentially dangerous food sources. Gustation requires physical contact with a chemical compound which is able to signal through taste receptors that are expressed on the surface of neurons. In insects, these gustatory neurons can be located across the animal's body allowing taste to play an important role in many different behaviors. Insects typically prefer compounds containing sugars, while compounds that are considered bitter tasting are avoided. Given the basic biological importance of taste, there is intense interest in understanding the molecular mechanisms underlying this sensory modality. We describe an adult Drosophila taste assay which reflects the preference of the animals for a given tastant compound. This assay may be applied to animals of any genetic background to examine the taste preference for a desired soluble compound.

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste is an important sensory process which facilitates attraction to beneficial substances and avoidance of toxic substances. This protocol describes a simple ingestion assay for determining Drosophila gustatory preference for a given chemical compound.

Ensayo Preferencia gusto por adulto<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Drosophila condicionamiento del corte como una medida de aprendizaje y memoria

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.