نشكر الدكاترة. اراتا Tabuchi وولفغانغ كوبلر (جامعة تورنتو) للتعليم فيما يتعلق المجهر intravital. نشكر أندرو كاهيل (نيكون الآلات) للمساعدة في تصميم وتنفيذ المجهري. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة / NHLBI HL101295 P30 المنح وK08 HL105538 (لEPS).

<ol>
	<li>Negrini, D., Tenstad, O., Passi, A., Wiig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+degradation+of+matrix+proteoglycans+and+edema+development+in+rabbit+lung.">Differential degradation of matrix proteoglycans and edema development in rabbit lung.</a> AJP - Lung Cellular and Molecular Physiology. 290, L470-L477 (2006).</li><li>Schmidt, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pulmonary+endothelial+glycocalyx+regulates+neutrophil+adhesion+and+lung+injury+during+experimental+sepsis.">The pulmonary endothelial glycocalyx regulates neutrophil adhesion and lung injury during experimental sepsis.</a> Nat. Med. 18, 1217-1223 (2012).</li><li>Florian, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heparan+sulfate+proteoglycan+is+a+mechanosensor+on+endothelial+cells.">Heparan sulfate proteoglycan is a mechanosensor on endothelial cells.</a> Circ. Res. 93, e136-e142 (2003).</li><li>Chappell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Glycocalyx+of+the+Human+Umbilical+Vein+Endothelial+Cell:+An+Impressive+Structure+Ex+Vivo+but+Not+in+Culture.">The Glycocalyx of the Human Umbilical Vein Endothelial Cell: An Impressive Structure Ex Vivo but Not in Culture.</a> Circulation Research. 104, 1313-1317 (2009).</li><li>Potter, D. R., Damiano, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hydrodynamically+relevant+endothelial+cell+glycocalyx+observed+in+vivo+is+absent+in+vitro.">The hydrodynamically relevant endothelial cell glycocalyx observed in vivo is absent in vitro.</a> Circ. Res. 102, 770-776 (2008).</li><li>Weinbaum, S., Tarbell, J. M., Damiano, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Structure+and+Function+of+the+Endothelial+Glycocalyx+Layer.">The Structure and Function of the Endothelial Glycocalyx Layer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 121-167 (2007).</li><li>Pittet, M., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Imaging.">Intravital Imaging.</a> Cell. 147, 983-991 (2011).</li><li>Kilpatrick, D. C., Graham, C., Urbaniak, S. J., Jeffree, C. E., Allen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+tomato+(Lycopersicon+esculentum)+lectin+with+its+deglycosylated+derivative.">A comparison of tomato (Lycopersicon esculentum) lectin with its deglycosylated derivative.</a> Biochem. J. 220, 843-847 (1984).</li><li>Smith, M. L., Long, D. S., Damiano, E. R., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-wall+micro-PIV+reveals+a+hydrodynamically+relevant+endothelial+surface+layer+in+venules+in+vivo.">Near-wall micro-PIV reveals a hydrodynamically relevant endothelial surface layer in venules in vivo.</a> Biophys. J. 85, 637-645 (2003).</li><li>Vink, H., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Distinct+Luminal+Domains+for+Macromolecules,+Erythrocytes,+and+Leukocytes+Within+Mammalian+Capillaries.">Identification of Distinct Luminal Domains for Macromolecules, Erythrocytes, and Leukocytes Within Mammalian Capillaries.</a> Circ. Res. 79, 581-589 (1996).</li><li>Marechal, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+glycocalyx+damage+during+endotoxemia+coincides+with+microcirculatory+dysfunction+and+vascular+oxidative+stress.">Endothelial glycocalyx damage during endotoxemia coincides with microcirculatory dysfunction and vascular oxidative stress.</a> Shock. 29, 572-576 (2008).</li><li>Presson, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-Photon+Imaging+within+the+Murine+Thorax+without+Respiratory+and+Cardiac+Motion+Artifact.">Two-Photon Imaging within the Murine Thorax without Respiratory and Cardiac Motion Artifact.</a> The American Journal of Pathology. 179, 75-82 (2011).</li><li>Looney, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilized+imaging+of+immune+surveillance+in+the+mouse+lung.">Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung.</a> Nat. Meth. 8, 91-96 (2011).</li><li>Pearse, D. B., Wagner, E. M., Permutt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ventilation+on+vascular+permeability+and+cyclic+nucleotide+concentrations+in+ischemic+sheep+lungs.">Effect of ventilation on vascular permeability and cyclic nucleotide concentrations in ischemic sheep lungs.</a> J. Appl. Physiol. 86, 123-132 (1999).</li><li>Hossain, M., Qadri, S., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+enhances+leukocyte+rolling+and+adhesion+in+human+microvasculature.">Inhibition of nitric oxide synthesis enhances leukocyte rolling and adhesion in human microvasculature.</a> Journal of Inflammation. 9, 28 (2012).</li><li>Schmidt, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+guanylyl+cyclase+contributes+to+ventilator-induced+lung+injury+in+mice.">Soluble guanylyl cyclase contributes to ventilator-induced lung injury in mice.</a> AJP - Lung Cellular and Molecular Physiology. 295, L1056-L1065 (2008).</li><li>Mead, J., Takishima, T., Leith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+distribution+in+lungs:+a+model+of+pulmonary+elasticity.">Stress distribution in lungs: a model of pulmonary elasticity.</a> J. Appl. Physiol. 28, 596-608 (1970).</li><li>Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+the+murine+pulmonary+microcirculation.">Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation.</a> J. Appl. Physiol. 104, 338-346 (2008).</li><li>Gattinoni, L., Protti, A., Caironi, P., Carlesso, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilator-induced+lung+injury:+the+anatomical+and+physiological+framework.">Ventilator-induced lung injury: the anatomical and physiological framework.</a> Crit. Care Med. 38, 539-548 (2010).</li><li>Tabuchi, A., Kim, M., Semple, J. W., Kuebler, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Lung+Injury+Causes+Pendelluft+Between+Adjacent+Alveoli+In+Vivo.">Acute Lung Injury Causes Pendelluft Between Adjacent Alveoli In Vivo.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 183, A2490 (2011).</li><li>Roebuck, K. A., Finnegan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+intercellular+adhesion+molecule-1+(CD54)+gene+expression.">Regulation of intercellular adhesion molecule-1 (CD54) gene expression.</a> J. Leukoc. Biol. 66, 876-888 (1999).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تتزامن مع التوسع في استخدام المجهر في الجسم الحي، وهناك زيادة التقدير لحجم كل من كبير من ESL وكذلك مساهماته العديدة للعمل الأوعية الدموية. هذه البيانات الناشئة، ومع ذلك، تستمد أساسا من الدراسات من الأوعية الدموية الجهازية. في الواقع، واستخدام المجهر في الجسم الحي في الرئة يمثل تحديا تقنيا، نظرا قطعة أثرية هامة الحركة الرئوي والقلبي. وقد سمح التقدم التقني الأخيرة عدة لتحقيق الاستقرار في الرئة الماوس المتحركة، وتكفل تطبيق أفضل التقنيات intravital إلى دوران الأوعية الدقيقة الرئوي 12 و 13. هذه النهج، ومع ذلك، يحتمل أن تكون مرتبك من التشعبات فيزيولوجي من الجمود الرئة. كما الرئة بشكل غائي جهاز المعدة للحركة مستمرة، وسوف يغير بشكل حدسي الرئة ركود علم وظائف الأعضاء الرئوي. في الواقع، يرتبط الرئة ركود مع بعض التعديلات في البطانية نitric إشارات أكسيد، طريقا لها عواقب عديدة في الرئة المصب على حد سواء صحية وجرح 14، 16. وعلاوة على ذلك، تجميد منطقة واحدة من المواضيع الرئة المحيطة الحويصلات الهوائية لقوى القص الضارة، بما يتفق مع ما يميز &quot;atelectrauma&quot; من التنفس الصناعي لحث على إصابة الرئة 19. هذه وغيرها بعد ليكون التي تم تحديدها من عواقب ركود الرئة من المرجح أن التفسير تفنيد الملاحظات intravital من الاوعية الدموية الدقيقة الرئوي (patho) علم وظائف الأعضاء. ونظرا لهذه المخاوف، سعينا إلى تطوير طريقة يمكن من خلالها دراسة ESL الرئوي في التحرك بحرية والرئة الماوس في الجسم الحي. اخترنا للتكيف مع أسلوب Tabuchi وكوبلر، وهو نهج يسمح التصور طولية من الرئة الماوس بحرية الحركة دون التحريض على إصابة الرئة 18. الأهم من ذلك، يحتوي نهجنا تعديلات خفية عدة من بروتوكول Tabuchi الأصلي، وهذه فتافيتستعقد تطورت من الحاجة إلى استيعاب الظروف الفريدة في مختبرنا. وبالمثل، واعتماد نموذجنا القياس ESL يتطلب التحسين في أماكن أخرى مماثلة لضمان استقرار ديناميكا الدم الماوس، الأوكسجين والتهوية، وعدم وجود إصابة الرئة. اخترنا لاستخدام ديكستران الإقصاء ونهجنا الأساسي لقياس ESL. وهذه التقنية مناسبة تماما لنموذجنا، كما يمكن إجراء قياسات ESL من لحظة واحدة في الوقت المناسب، ويلغي الرئوي القلبي قطعة أثرية الحركة. في حين أن دراسات سابقة من الجملة الوعائية المجهرية النظامية واقترح أن ديكستران استبعاد دقيقة فقط في السفن الصغيرة (&lt;15 ميكرومتر 6)، لاحظنا تغييرات ESL متطابقة في الأوعية تصل إلى 30 ميكرون من القطر. قد تكون هذه التناقضات بسبب الخصائص البصرية محددة إلى السطح الجنبي. في سرير متحرك الأوعية الدموية، فمن الضروري أن brightfield والتصوير الفلورسنت سوccurs في وقت واحد، وإبطاء، حتى وجيزة في الحصول على الصور (مثل إغلاق مصراع بين الصور المتسلسلة) نخلط قاتلة قياسات سمك ESL. بينما التوقف التهوية قد يقلل هذا الخلط، والشهيق وقفة لا يمنع تماما القلب قطعة أثرية الحركة أو قطعة أثرية من الجهاز التنفسي إعادة توزيع الغاز في الرئتين، heterogeneously نفخ المصاب (&quot;سائب&quot;) 20. انتخبنا لاستخدام الصورة الخائن لإرسال الصور في وقت واحد وbrightfield الفلورسنت لكاميرا CCD واحدة. يمكن أن تشمل النهج البديلة المحتملة لاستخدام المرايا في وقت واحد مزدوج اللون لالتقاط الصور ينعكس ضوء الفلورسنت وخلال الفحص المجهري متحد البؤر. والطلب الإضافي الحرجة من نموذجنا هو استخدام الغمر بالمياه الأهداف المتخصصة. يجب أن يكون هذه الأهداف فتحة كبيرة بما فيه الكفاية للسماح العددية حل الخلافات الصغيرة في سفينة بعرض حين لا يزال maintaininز على مسافة كافية تعمل على اختراق كل من النافذة وسطح الصدري الجنبي. هذه الأهداف، في حين المتاحة، هي مكلفة للغاية. استخدام ينعكس تدخل الفرق المجهر الضوئي (DIC) النقيض من ذلك، أن تقنية brightfield يبرز حواف الأنسجة غير ملوثين، أمر مرغوب فيه بالإضافة إلى ذلك، كما يحسن دقة DIC قياسات عرض الأوعية الدموية. تقنيات بديلة موجودة لتحديد عرض ESL الرئوي. في حين لا يمكن أن يؤديها velocimetry المكروية بدقة على سرير متحرك الأوعية الدموية، ويمكن أن تستخدم لاختبار التصاق المكروية غير مباشر الرئوي سلامة الكنان السكري. لقد أظهرنا سابقا أن سليمة وظائف ESL استبعاد تعميم المجهرية من سطح جزيئات الالتصاق البطانية 2. وجود المضادة للالتصاق ICAM-1 المكروية إلى السطح البطانية يشير ذلك إلى فقدان الكنان السكري / ESL النزاهة. هذه التقنية لا تتطلب brightf في وقت واحددرع / الفلورسنت التصوير، ولا مرتفعة الفتحة العددية اللازمة الأهداف. ومع ذلك، واحدة تحذير هام موجود: لزيادة التصاق مكافحة ICAM-1 المكروية للإشارة إلى فقدان الكنان السكري، يجب أن يكون هناك سطح الخلية مماثلة ICAM-1 التعبير بين المجموعتين الضابطة والتجريبية. بينما ICAM-1 التعبير سطح البطانية ظلت مستقرة في وقت مبكر (&lt;45 دقيقة) في الإنتان الناجم عن إصابة الرئة 2، والتعبير سطح زيادة في نهاية المطاف بطريقة NF-كيلوبايت تعتمد 21. استخدام التصاق المكروية كعلامة للسلامة الكنان السكري، وبالتالي، قد لا يكون صحيحا إلا أثناء الالتهاب في وقت مبكر. من المذكرة، في حين لدينا تقنيات الجراحة والفحص المجهري لا تحث على إصابة الرئة 2، فمن غير المؤكد كيف تتطور إصابة الرئة التجريبية (مثل الإصابة الناجمة عن تقطير حمض داخل الرغامى) يؤثر قياسات سمك ESL. يمكن أن تتطور وذمة الرئة نخلط يحتمل القياسات DIC من عرض السفينةو / أو تأثير نفاذية ديكستران. ويمكن التخفيف من هذه الشكوك من خلال استخدام تقنيات متعددة التكميلية لل(مثل ديكستران الاستبعاد، التصاق المكروية، وكذلك تقييم نسيجية مؤكد من محتوى جلايكان السفينة 2) لتأكيد التغيرات الملحوظة في ESL الرئوي. وباختصار، من خلال توسيع نطاق النهج الجراحية ذكرت في البداية من قبل Tabuchi وكوبلر، وضعنا نموذج تجريبي يسمح لرصد تفصيلي للESL الرئوي. ينبغي استخدام هذا النموذج يسمح لفهم أكبر لأهمية الكنان السكري البطانية الوعائية الرئوية لعلم وظائف الأعضاء في الصحة والمرض.

والكنان السكري البطانية هو طبقة من خارج الخلية بروتيوغليكان والجليكوزامينوجليكان المرتبطة بطانة الأوعية الدموية البطانية. في الجسم الحي، والكنان السكري هو رطب للغاية، وتشكيل الطبقة السطحية كبيرة البطانية (ESL) الذي ينظم مجموعة متنوعة من الوظائف بما في ذلك البطانية نفاذية السوائل 1، العدلات البطاني التصاق 2، وmechanotransduction من السوائل 3 إجهاد القص. تاريخيا، كان الكنان السكري بالتقدير نظرا لضلال في الاستعدادات خلايا مستنبتة 4 و 5 و تدهورها خلال تثبيت الأنسجة القياسية وتجهيز 6. تزايد استخدام المجهر 7 من intravital (في الجسم الحي المجهري، IVM) وتزامن مع تزايد الاهتمام العلمي في أهمية ESL إلى وظيفة الأوعية الدموية أثناء الصحة والمرض. وESL غير مرئي إلى المجهر الضوئي ولا يمكن وصفها بسهولة فيفيفو، نظرا لنزوع يكتينس الكنان السكري ملزم الفلورسنت تسبب RBC تراص 8 و الصمات الرئوية المميتة (الملاحظات غير منشورة). ولذلك تم تطوير العديد من الأساليب غير المباشرة للاستدلال ESL سمك (، وبالتالي، الكنان السكري سلامة) في غير متحرك الأسرة الأوعية الدموية مثل microcirculations مشمري والمساريقي. هذه التقنيات تشمل قياس الاختلافات في تعميم سرعة microparticle بوصفها وظيفة من المسافة من غشاء بطانة (microparticle velocimetry صورة 9) وكذلك قياس استبعاد الضخمة التي تحمل علامات علامات fluorescently، الأوعية الدموية (مثل dextrans) من سطح البطانية (ديكستران تقنية استبعاد 10، 11). من هذه التقنيات، إلا ديكستران استبعاد قادر على تقدير ESL سمك من القياسات التي أجريت عند نقطة واحدة في الوقت المناسب. في وقت واحد من خلال قياس الاعراض الأوعية الدموية باستخدام المجهر brightfield (أ عرض فيclusive من ESL &quot;غير مرئية&quot;) والمجهر الفلورسنت من التتبع الأوعية الدموية استبعادها من ESL، يمكن حساب سمك ESL ونصف الفرق بين الاعراض الأوعية الدموية 2. استخدام إجراء فوري من سمك ESL هو مناسبة تماما للدراسة من الكنان السكري الرئوي. المجهر Intravital من الرئة هو أمر صعب، نظرا قطعة أثرية هامة الحركة الرئوي والقلبي. التطورات الحديثة في حين تسمح لتجميد الماوس الرئتين في الجسم الحي 12 و 13، تبقى المخاوف بشأن تأثير فيزيولوجي من ركود الرئة. ويرتبط الجمود الرئة مع انخفاض أكسيد النيتريك مما يشير البطانية 14، مما يشير إلى أن مسار يؤثر كل من التصاق الخلايا المتعادلة 15 و الرئة إصابة 16. وعلاوة على ذلك، تجميد مساحة الرئة يعرض المحيطة الحويصلات الهوائية المحمول لقوى القص الضارة (ما يسمى ب &quot;atelectrauma&quot;)، وفقا للمفاهيم الكلاسيكية الفسيولوجية للالسنخية الترابط 17. في عام 2008، وضعت اراتا Tabuchi، فولفغانغ كوبلر وزملاؤه تقنية جراحية السماح للفحص المجهري intravital من الرئة الماوس بحرية الحركة 18. يمكن تبطل قطعة أثرية الجهاز التنفسي الناجمة عن هذه التقنية باستخدام التصوير عالية السرعة، بما في ذلك قياس وقت واحد من brightfield المجهري والفلورية. في هذا التقرير، إلا أننا بالتفصيل كيف يمكن استخدام التصوير الفوري استبعاد ديكستران لقياس سمك ESL في دوران الأوعية الدقيقة تحت الجنبة من الرئة الماوس بحرية الحركة، في الجسم الحي. ويمكن تعديل هذه التقنية بسهولة لتحديد وظيفة الكنان السكري على وجه التحديد، فإن قدرة على حالها ESL لاستبعاد العناصر المنتشرة من سطح البطانية. وقد استخدمنا هذه التقنيات في الآونة الأخيرة لتحديد أهمية سلامة ESL الرئوي في تطوير إصابة الرئة الحادة الأمراض الالتهابية الجهازية خلال مثل الإنتان 2.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> اسم الكاشف </td></tr><tr><td> FITC-ديكستران (150 كيلو دالتون) </td><td> سيجما </td><td> FD150S </td><td></td></tr><tr><td> TRITC-ديكستران (150 كيلو دالتون) </td><td> سيجما </td><td> T1287 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidin المغلفة الفلورسنت المجهرية </td><td> الانفجارات المختبرات </td><td> CP01F/10428 </td><td> التنين الأخضر مضان (على غرار FITC) </td></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> مور الطبية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> مور الطبية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مكافحة ICAM-1 الضد المعقدة البيروكسيديز </td><td> eBioscience </td><td> استنساخ YN1/1.7.4 </td><td> 1:50 التخفيف </td></tr><tr><td> نمط إسوي الأجسام المضادة المعقدة البيروكسيديز </td><td> eBioscience </td><td> IgG2b eB149/10H5 </td><td> 1:50 التخفيف </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> EQUIPMENT </td></tr><tr><td> الميكانيكية التنفس الصناعي </td><td> جهاز هارفارد </td><td> Inspira </td><td></td></tr><tr><td> القصبة الهوائية القسطرة </td><td> جهاز هارفارد </td><td> 730028 </td><td></td></tr><tr><td> كاو كهربي جهاز </td><td> DRE الطبية </td><td> Valleylab SSE-2L </td><td></td></tr><tr><td> ثنائي القطب الكي ملقط </td><td> أولسن الطبية </td><td> 10-1200I </td><td> 9.9cm ماكفرسون </td></tr><tr><td> درجة الحرارة كنترولل نظام </td><td> أدوات الدقة العالم </td><td> ATC1000 </td><td></td></tr><tr><td> حقنة مضخة </td><td> جهاز هارفارد </td><td> مضخة 11 النخبة </td><td></td></tr><tr><td> المجهر (widefield) </td><td> نيكون </td><td> LV-150 </td><td></td></tr><tr><td> المجهر (مبائر) </td><td> نيكون </td><td> A1R </td><td></td></tr><tr><td> صورة الخائن </td><td> Photometrics </td><td> DV2 </td><td></td></tr><tr><td> CCD كاميرا </td><td> Photometrics </td><td> CoolSNAP HQ2 </td><td></td></tr><tr><td> برنامج معالجة الصور </td><td> نيكون </td><td> عناصر NIS </td><td></td></tr><tr><td> البولي فينيل الغشاء </td><td> كورى نادي الهلالا ف ب </td><td></td><td></td></tr><tr><td> التعميم الغطاء زلة </td><td> Bellco </td><td> 5CIR-1-BEL </td><td> 5 مم، سماكة # 1 </td></tr><tr><td> الغراء (تغطية زلة لغشاء) </td><td> Pattex </td><td> Flussig (السائل) </td><td> للصق زلة غطاء لغشاء </td></tr><tr><td> الغراء (زلة لتغطية الماوس) </td><td> Pattex </td><td> مادة هلامية </td><td> لربط لغشاء الماوس </td></tr><tr><td> أنابيب الجراحية </td><td> Intramedic </td><td> PE50، PE10 </td><td></td></tr><tr><td> خاط </td><td> الصياد </td><td></td><td> 04:00 الحرير </td></tr><tr><td> الحلاقة الكهربائية </td><td> اوستر </td><td> 78997 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط جراحي منحني </td><td> Roboz </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ملقط جراحي مستقيم </td><td> Roboz </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مقص جراحي </td><td> Roboz </td><td></td><td></td></tr><tr><td> microscissors الجراحية </td><td> Roboz </td><td></td><td></td></tr><tr><td> إبرة جراحية سائق </td><td> Roboz </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الشريط الجراحية </td><td> الصياد </td><td></td><td></td></tr><tr><td> اسفنجات المطبخ (مقطعة إلى أسافين) </td><td> مختلف </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo measurement of the mouse pulmonary endothelial surface layer

والكنان السكري البطانية هي طبقة من بروتيوغليكان والجليكوزامينوجليكان المرتبطة بطانة التجويف الأوعية الدموية. في الجسم الحي، والكنان السكري هو رطب للغاية، وتشكيل الطبقة السطحية كبيرة البطانية (ESL) التي تساهم في الحفاظ على وظيفة بطانة الأوعية الدموية. كما الكنان السكري في كثير من الأحيان البطانية الشاذة في المختبر، ويتم فقدان القياسية خلال تقنيات تثبيت الأنسجة، دراسة ESL يتطلب استخدام المجهر intravital. علم وظائف الأعضاء لأفضل تقريبي الجملة الوعائية المجهرية المعقدة للالسنخية، يتم تنفيذ مثالي التصوير intravital الرئوي على الرئة بحرية الحركة. هذه الاستعدادات، ومع ذلك، تعاني عادة من قطعة أثرية الحركة واسعة النطاق. علينا أن نظهر كيف يمكن استخدام مغلقة الصدر المجهر intravital من الرئة الماوس بحرية الحركة لقياس سلامة الكنان السكري عن طريق الاستبعاد من fluorescently ESL التي تحمل علامات عالية الوزن الجزيئي dextrans من سطح البطانية. هذه التقنية غير الجراحية الانتعاش، الأمر الذي يتطلبbrightfield في وقت واحد والتصوير الفلورسنت في الرئة الماوس، ويسمح للمراقبة الطولي للالجملة الوعائية المجهرية تحت الجنبة دون وجود أدلة على إحداث التباس إصابة الرئة.

والمنهج التجريبي وصفها في الخطوات 1-6 تسمح القبض على إطارات متعددة في وقت واحد من مدينة دبي للإنترنت (brightfield) والصور الفلورسنت. لتحديد سمك ESL، يتم مراجعة الصور المسجلة من قبل المراقب أعمى بعد الانتهاء من البروتوكول التجريبي. باستخدام التركيز في الإطار، تم تحديد microvessels تحت الجنبة (&lt;ميكرون قطر 20)؛ توجد عادة لا يقل عن 3 microvessels على إطار واحد (الشكل 10). باستخدام برامج التحليل صورة (عناصر NIS، نيكون)، يتم قياس عرض الأوعية الدموية (بواسطة مراقب أعمى) عن طريق حساب متوسط ​​أطوال اعتراض عمودي ثلاثة في microvessel. كما ESL غير مرئي لتصوير DIC، بعرض الأوعية الدموية DIC تمتد إلى غشاء بطانة الغشاء البطاني وبالتالي فهي تشمل سمك ESL 9 و 10. في المقابل، تم استبعاد FITC-ديكستران (150 كيلو دالتون) من ESL. وبناء على ذلك، بعرض FITC الأوعية الدموية لا تتضمن ESL سمك. على افتراض تساوي ESL سميكةنيس في كل من حواف السفينة، ويمكن بالتالي حجم ESL يحددها نصف الفرق بين مدينة دبي للإنترنت وFITC-ديكستران بعرض الأوعية الدموية. قد العديد من المزالق المحتملة التقنية تتداخل مع تفسير النتائج التجريبية. فإن وجود نزيف في مجال المجهر يحجب كل من مدينة دبي للإنترنت والتصور FITC من الجملة الوعائية المجهرية تحت الجنبة، وبالتالي، يجب الحرص على الحصول على الإرقاء (باستخدام كاو كهربي) خلال نافذة الايداع (5.9). بالإضافة إلى ذلك، قد لا reapproximate الرئة إطار الصدري بعد مناورة التوظيف (5.14)، وهذا يشير عادة التصاق كفافي غير كامل للغشاء حول إطار الصدري. يمكن عادة يتم تصحيح هذا عن طريق إعادة استخدام الغراء في جميع أنحاء نافذة الصدري، تليها مناورة تجنيد تكرار الرئة. وأخيرا، لا بد من الحرص على تجنب الحقن في الوريد عرضية من الهواء في الماوس. الصمات الهواء، حتى ولو لم يكن قاتلا صح التعبير، preferenti<html> السفر إلى حليف الرئة nondependent، ومنع FITC-ديكستران نضح من الجملة الوعائية المجهرية (nondependent) تصور تحت الجنبة. قياس الاعراض ESL يتطلب استخدام وسيلة الخائن الصورة (تكفل في وقت واحد والتصوير DIC الفلورسنت) وكذلك الأهداف المجهر المتخصصة. ويمكن تجنب هذه المطالب المعدات مع بعض التعديلات على بروتوكول لدينا. ويمكن قياس غير مباشر الكنان السكري سلامة من خلال تحديد ESL استبعاد المجهرية يتناقل من سطح السفينة. وجود تدهور ESL، لذلك، يتبين من القبض على زيادة الاوعية الدموية الدقيقة تحت الجنبة من المجهرية التي تستهدف جزيئات الالتصاق سطح البطانية (مثل ICAM-1) (الشكل 11). <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. <html> S &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig5.jpg" alt="الشكل 5" /> الشكل 5. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig6.jpg" alt="الشكل 6" /> الشكل 6. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig7.jpg" alt="الشكل 7" /> الشكل 7. ر &quot;FO: المحافظة على together.within صفحة =&quot; دائما &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig8.jpg" alt="الرقم 8" /> الشكل 8. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig9.jpg" alt="الشكل 9" /> الشكل 9. <img src="/files/ftp_upload/50322/50322fig10.jpg" alt="الشكل 10" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50322/50322fig10highres.jpg"/> الشكل 10. قياس سمك الماوس ESL الرئوي. (أ) في وقت واحد، الممثل التقاط الصور وDIC الفلورسنت من الجملة الوعائية المجهرية الماوس تحت الجنبة (شريط النطاق، 50 ميكرون). يتم قياس عرض Microvessel باستخدام متوسط ​​اعتراض خطي عمودي 3. ويمكن تحديد سمك ESL من نصف الفرق بين مدينة دبي للإنترنت (بما في ذلك ESL) والفلورية (الحصري للESL)microvessel بعرض (ب) تحديد القياسات بدقة DIC تحت الجنبة حدود جدار الوعاء الدموي، كما يتبين من مدينة دبي للإنترنت تقريبا متطابقة والقياسات GFP عرض السفينة التي أجريت في الفئران Tie2-GFP البطانية-الفلورسنت (جاكسون مختبرات). خط متصل يمثل خط الهوية. (ج) يمكن أن يتبع الجملة الوعائية المجهرية تحت الجنبة طوليا، كما يتضح من الفقدان التدريجي لسمك ESL وقع بعد عديد السكاريد الشحمي في الوريد (LPS). ن = 3 الفئران. * P &lt;0.05 بالمقارنة مع الوقت = 0 دقيقة بواسطة ANOVA. الفيلم 1. يمكن تحديد الكنان السكري من خلال تقييم سلامة للانضمام المكروية مكافحة ICAM-1 داخل الجملة الوعائية المجهرية تحت الجنبة. عالية السرعة المجهري متحد البؤر (نيكون A1R) يوضح تمسكا الفلورسنت المجهرية بعد 45 دقيقة عن طريق الوريد LPS (20 ملغ لكل كيلوغرام من وزن الجسم). علما أن يتناقل المجهرية يمكن أن يكون occasionallذ ينظر دوران الأوعية الدقيقة التي تمر عبر. لتحسين التصور من توطين المكروية (الفلورية الخضراء)، في خطوة كانت سابقة التجهيز الفئران مع 6،1 التتبع الأوعية الدموية TRITC-ديكستران (150 كيلو دالتون، 6٪) بدلا من FITC-ديكستران. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50322/50322movie1.wmv" target="_blank">انقر هنا لمشاهدة الفيلم</a> .

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer at JoVE.com

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

ودرس مثالي البطانية الطبقة السطحية الكنان السكري / البطانية باستخدام المجهر intravital. المجهر يمثل تحديا تقنيا Intravital في جهاز متحرك مثل الرئة. علينا أن نظهر كيف يمكن استخدام brightfield المجهري الفلورسنت في وقت واحد والبطانية لتقدير سمك الطبقة السطحية في الانتقال بحرية،<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; الرئة الماوس.

في قياس الجسم الحي من الماوس الرئوي الطبقة السطحية غشائي

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

in-vivo-measurement-of-the-mouse-pulmonary-endothelial-surface-layer

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

14.5K Views.  University of Colorado School of Medicine. ودرس مثالي البطانية الطبقة السطحية الكنان السكري / البطانية باستخدام المجهر intravital. المجهر يمثل تحديا تقنيا Intravital في جهاز متحرك مثل الرئة. علينا أن نظهر كيف يمكن استخدام brightfield المجهري الفلورسنت في وقت واحد والبطانية لتقدير سمك الطبقة السطحية في الانتقال بحرية،

Video: In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

الجوانب الفنية للناسور أبهري أجوفي ماوس

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Automated Measurement of Microcirculatory Blood Flow Velocity in Pulmonary Metastases of Rats

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. However, very few methods exist to date to investigate lung metastases in a dynamic fashion at the microcirculatory level, due to the difficulty to access the lung with a microscope. Here, an intravital microscopy method is presented to functionally image and quantify the microcirculation of superficial pulmonary metastases in rats, using a closed-chest pulmonary window and automated analysis of blood flow velocity and direction. The utility of this method is demonstrated to measure increases in blood flow velocity in response to pharmacological intervention, and to image the well-known tortuous vasculature of solid tumors. This is the first demonstration of intravital microscopy on pulmonary metastases in a closed-chest model. Because of its minimized invasiveness, as well as due to its relative ease and practicality, this technology has the potential to experience widespread use in laboratories that specialize on pulmonary tumor research.

A method is presented to measure microcirculatory blood flow velocity in pulmonary cancer metastases of the pleural surface in rats in an automated fashion, using closed-chest pulmonary intravital microscopy. This model has potential to be used as a widespread tool to perform physiologic research on pulmonary metastases in rodents.

القياس الآلي من الأوعية الدقيقة سرعة تدفق الدم في الرئة الانبثاث من الجرذان

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1). Animal models of COPD are used to identify molecules that contribute to the disease process and to test the efficacy of novel therapies for COPD. Researchers use a number of models of COPD employing different species including rodents, guinea-pigs, rabbits, and dogs(2). However, the most widely-used model is that in which mice are exposed to cigarette smoke. Mice are an especially useful species in which to model COPD because their genome can readily be manipulated to generate animals that are either deficient in, or over-express individual proteins. Studies of gene-targeted mice that have been exposed to cigarette smoke have provided valuable information about the contributions of individual molecules to different lung pathologies in COPD(3-5). Most studies have focused on pathways involved in emphysema development which contributes to the airflow obstruction that is characteristic of COPD. However, small airway fibrosis also contributes significantly to airflow obstruction in human COPD patients(6), but much less is known about the pathogenesis of this lesion in smoke-exposed animals. To address this knowledge gap, this protocol quantifies both emphysema development and small airway fibrosis in smoke-exposed mice. This protocol exposes mice to CS using a whole-body exposure technique, then measures respiratory mechanics in the mice, inflates the lungs of mice to a standard pressure, and fixes the lungs in formalin. The researcher then stains the lung sections with either Gill&#8217;s stain to measure the mean alveolar chord length (as a readout of emphysema severity) or Masson&#8217;s trichrome stain to measure deposition of extracellular matrix (ECM) proteins around small airways (as a readout of small airway fibrosis). Studies of the effects of molecular pathways on both of these lung pathologies will lead to a better understanding of the pathogenesis of COPD.

The goal of this protocol is to provide automated methods to quantify chronic lung pathologies in a murine model of COPD. The protocol includes exposing mice to cigarette smoke (CS), measuring pulmonary function, inflating the lungs, and using morphometry methods to measure emphysema and small airway remodeling in mice.

القياس الآلي للالرئوي وانتفاخ الرئة ومجرى الهواء الصغيرة في إعادة عرض السجائر الفئران المعرضة للدخان

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential phenotypic changes are best assessed by measurement of the changes in lung elasticity. To best understand specific mechanisms underlying such pathologies in mice, it is essential to make functional measurements that can reflect the developing pathology. Although there are many ways to measure elasticity, the classical method is that of the total lung pressure-volume (PV) curve done over the whole range of lung volumes. This measurement has been made on adult lungs from nearly all mammalian species dating back almost 100 years, and such PV curves also played a major role in the discovery and understanding of the function of pulmonary surfactant in fetal lung development. Unfortunately, such total PV curves have not been widely reported in the mouse, despite the fact that they can provide useful information on the macroscopic effects of structural changes in the lung. Although partial PV curves measuring just the changes in lung volume are sometimes reported, without a measure of absolute volume, the nonlinear nature of the total PV curve makes these partial ones very difficult to interpret. In the present study, we describe a standardized way to measure the total PV curve. We have then tested the ability of these curves to detect changes in mouse lung structure in two common lung pathologies, emphysema and fibrosis. Results showed significant changes in several variables consistent with expected structural changes with these pathologies. This measurement of the lung PV curve in mice thus provides a straightforward means to monitor the progression of the pathophysiologic changes over time and the potential effect of therapeutic procedures.

Here we present a protocol to simply and reliably measure the lung pressure-volume curve in mice, showing that it is sufficiently sensitive to detect phenotypic parenchymal changes in two common lung pathologies, pulmonary fibrosis and emphysema. This metric provides a means to quantify the lung&#8217;s structural changes with developing pathology.

قياس منحنى الضغط الحجم في الرئتين ماوس

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

القياس عن بعد داخل الرحم لقياس ماوس مقلص الضغط<em&gt; في فيفو</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular diseases, such as diabetic retinopathy, hypertensive retinopathy, and possibly glaucoma. Therefore, retinal microvascular preparations are pivotal tools for physiological and pharmacological studies to delineate the underlying pathophysiological mechanisms and to design therapies for the diseases. Despite the wide use of mouse models in ophthalmic research, studies on retinal vascular reactivity are scarce in this species. A major reason for this discrepancy is the challenging isolation procedures owing to the small size of these retinal blood vessels, which is ~ &#8804; 30 &#181;m in luminal diameter. To circumvent the problem of direct isolation of these retinal microvessels for functional studies, we established an isolation and preparation technique that enables ex vivo studies of mouse retinal vasoactivity under near-physiological conditions. Although the present experimental preparations will specifically refer to the mouse retinal arterioles, this methodology can readily be employed to microvessels from rats.

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Many vision-threatening ocular diseases are associated with dysfunctional retinal microvessels. Therefore, the measurement of retinal arteriole responses is important to investigate the underlying pathophysiological mechanisms. This article describes a detailed protocol for mouse retinal arteriole isolation and preparation to assess the effects of vasoactive substances on vascular diameter.

خطوات الإعداد لقياس مفاعليه في الماوس الشرايين الشبكية السابقين فيفو

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ultimately lead to new knowledge concerning the causes of or new ways to inhibit or treat plasma extravasation. It is important that researchers have the proper tools, including the best methods available, for studying plasma extravasation. In this article, we describe a protocol, using the Evans blue dye method, for assessing plasma extravasation in the organs of FVBN mice. This protocol is intentionally simple, to as great a degree as possible, but provides high quality data. Evans blue dye has been chosen primarily because it is easy for the average laboratory to use. We have used this protocol to provide evidence and support for the hypothesis that the enzyme neprilysin may protect the vasculature against plasma extravasation. However, this protocol may be experimentally used and easily adapted for use in other strains of mice or in other species, in many different organs or tissues, for studies which may involve other factors that are important in understanding, preventing, or treating plasma extravasation. This protocol has been extensively optimized and modified from existing protocols, and combines reliability, ease of use, economy, and general availability of materials and equipment, making this protocol superior for the average laboratory to use in quantifying plasma extravasation from organs.

In this article, an economical, optimized, and simple protocol is described which uses the Evans blue dye method for assessing plasma extravasation in the organs of FVBN mice that can be adapted for use in other strains, species, and other organs or tissues.

الأزرق إيفانز أمثل البروتوكول لتقييم تسرب الأوعية الدموية في الماوس

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of group 2 PH, due to mitral stenosis (MS), to facilitate the investigation of disease mechanisms and potential therapeutic strategies. We present a novel rat model of pulmonary venous congestion-induced pulmonary venous arterialization and group 2 PH caused by left atrial stenosis (LAS). LAS is achieved by constricting the left atrium using a half-closed titanium clip. After the LAS surgery, a rat model with a transmitral inflow velocity greater than or equal to 2.0 m/s on echocardiography gradually develops pulmonary venous arterialization and group 2 PH over an 8- to 10-week period. In this protocol, we provide the step-by-step procedure of how to perform the LAS surgery. The presented LAS rat model mimics MS in humans and is useful for studying the underlying molecular mechanism of pulmonary venous arterialization and for the preclinical evaluation of therapies for group 2 PH.

Left atrial stenosis (LAS) is a novel surgical technique used for studying group 2 pulmonary hypertension (PH) and mechanisms underlying pulmonary venous arterialization. Here, we present a protocol to constrict the left atrium using a titanium clip to cause pulmonary venous arterialization and moderate PH in a rat.

تضيق أذينية الأيسر الناجم عن أرتيرياليزيشن الوريدي الرئوي وارتفاع ضغط الدم الرئوي المجموعة 2 في الفئران

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...