نشكر كريستين جونسون لعمل الرسوم البيانية.

وتعرض جميع البروتوكولات التي تنطوي على الحيوانات إلى وأقرته اللجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في مستشفى بوسطن للأطفال وتتم وفقا لتوصيات الاتحاد للتقويم والاعتماد من رعاية الحيوان المعملية (AAALAC). تأكد من استخدام أدوات معقمة وtechniqure العقيم أثناء تنفيذ الإجراء. 1. إعداد الكريات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 10 ملغ من sucralfate و 60 ملغ من hydron مع ملعقة unbent معقمة. وضع في أنابيب microcentrifuge منفصلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطعة 1 سم مربع من شبكة إلى العقيمة 10 سم الطبق. عكس ذلك شبكة ترتكز على غطاء الضحلة. توضع جانبا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكرولتر من الإيثانول إلى hydron ودوامة لمدة 10 دقيقة على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة كمية مناسبة من عامل النمو (القياسية: 20 ميكروغرام للbFGF، 50 ميكروغرام للVEGF) إلى sucralfate ودوامة لفترة وجيزة. عامل النمو تخزينها في-80 ° C الفريزر بتركيز 1 ملغ / مل. يجب أن حجم السائل أضاف أن ما لا يقل عن 20 ميكرولتر لضمان sucralfate هو مبلل تماما ولكن يجب أن لا تتجاوز 50 ميكرولتر. أكبر حجم يجعل تبخر السائل في الخطوة التالية صعوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الخليط sucralfate في المبخر الطرد المركزي تعيين على الأقل حتى يصبح الخليط الجاف تماما، وعادة 30-50 دقيقة اعتمادا على حجم السائل المستخدم. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق الخليط لمدة الرطوبة المتبقية مع نهاية مدبب من ملعقة معقمة. الخليط يجب أن يشعر &quot;مقدد&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام نهاية مدبب من ملعقة لتفريق خليط sucralfate داخل الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 ميكرولتر من hydron إلى sucralfate. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نظرا لطبيعة لزجة من hydron، وقطع من نهاية الماصة غيض 200 ميكرولتر ومن ثم رسم والافراج عن 10 ميكرولتر قبل pipetting صعودا مرة أخرى وإضافة إلى sucralfate. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام بسرعة خلاف عازمةالعلا لخلط hydron وsucralfate وإزالتها من الأنبوب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الخليط على طول الجانب السفلي من غيض من ملعقة عازمة ثم تدوير أنبوب أثناء الرسم ملعقة على طول جدار الأنبوب. سوف الخليط يجف بسرعة لذلك يجب أن يتم ذلك خطوة بكفاءة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نشر الخليط على شبكة مستعدة باستخدام ملقط ليثبت في مكانه. يجب أن يكون الخليط حتى طبقة وملء في الثقوب للشبكة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزج ملعقة عازمة في أنبوب يحتوي على hydron واستخدامه معطف كلا الجانبين للشبكة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع شبكة المغلفة متوكئا على الجانب ضد حافة الطبق والسماح للتجفيف في RT لمدة 30-45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع شبكة في الثلاجة -20 درجة مئوية أو الشروع فورا في الخطوة التالية. إبقاء شبكة داخل الطبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 35 مم طبق داخل طبق بتري أكبر، الغطاء. استخدام زوج من ملقط لسحب بعناية الألياف للشبكة بغض النظر على مدى 35 مم طبق. الكريات الضالة جويتم جمعها من الطبق أكبر في نهاية المطاف. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق الكريات عن التوحيد تحت النطاق. عملية ينتج حوالي 250 الكريات بالتالي الجرعة القياسية في بيليه لbFGF وVEGF هو 80 نانوغرام و 200 نانوغرام، على التوالي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر الكريات في 35 مم طبق في الثلاجة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر. </li></ol> 2. زرع الجراحي من الكريات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انشاء منطقة الجراحية تحت المجهر التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع AVERTIN (400-500 مغ / كغ، داخل الصفاق) ووضع مؤشر الماوس تحت المجهر حتى العين مرئيا. أداء قرصة أخمص قدميه لضمان مستوى كاف من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير العين الماوس عن طريق وضع 1 قطرة من حل بروباراكايين فوق مقلة العين. انتظر 20-30 ثانية وربت مع الشاش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Proptose العين الفأر مع # 1 مبلد المجوهرات ملقط يجري المؤكد أن ترك الجلد بين ملقط والعين. من المهم أن نحكم على الضغوط التي مورست بشكل صحيح.60. وعقد العين بقوة أيضا يؤدي إلى أن تصبح حمراء وغضب، بينما تفقد أيضا على عقد سيسمح للتحرك العين أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام microknife 30 درجة إلى إجراء شق في القرنية حوالي 1 ملم من حوف. يجب أن يكون الشق 1-2 ملم في الطول. يجب أن تكون شق عميق بما يكفي لاختراق ما وراء الطبقة الظهارية في midstroma لكن ليس عميق جدا للتمزق العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام سكين فون Graef لجعل جيب عمودي على شق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرك السكين تحت طبقة القرنية في موقع شق والعمل بلطف سكين في وتحريكه على طول شق لتوسيع الفضاء، وبالتالي تشكيل الجيب. فإنه يساعد على تحريك الماوس وكذلك لتكون قادرة على العمل مع انحناء العين. يجب الحرص على عدم دفع نحو الانخفاض مع طرف لتجنب تمزق العين. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرطب ملقط صائغ رقم ​​5 مع بروباراكايين واختيار بيليه للخروج من الطبق. وضع بيليه على العين. </lط&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترطيب سكين فون Graef مع بروباراكايين ونقل بعض من السائل على بيليه لجعله مطاطي ولين العريكة. إزالة الرطوبة الزائدة مع الشاش أو القطن المسحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج بيليه في الجيب باستخدام سكين فون Graef لدفعها داخل تحت طبقة القرنية. مرة واحدة بيليه كله في الداخل، تشغيل الجانب المسطح من سكين فون Graef على الموقع للتأكد من أن بيليه هو آمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معطف العين مع مرهم مضاد حيوي الثلاثي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل الماوس مرارا وتكرار لعملية جراحية في العين المعاكس. </li></ol> 3. الكمي من القرنية اتساع الأوعية الدموية. ترك الحيوانات لتطوير السفن على مدى فترة محددة من الوقت. اليوم سفينة الدرجات يعتمد على عامل النمو المستخدمة. الصف bFGF في يوم 5 وVEGF الأضعف في يوم 6. يوم هو يوم غرس 0. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع AVERTIN (400-500 مغ / كغ، داخل الصفاق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مجهر المصباح الشقي لجرادينغ. بصري واحد لديه شبيكة الشعر، وخطوط داخل العدسة المستخدمة كوسيلة مساعدة لتحديد قياس طول السفينة والمسافة حول محيط العين أن السفن قد ظهرت. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد الماوس أمام نطاقها، وتحديد المواقع الماوس بحيث ينظر إلى العين في العين مع بيليه مباشرة إلى الأمام. استقرار الرأس بين الإبهام والسبابة بحيث يتم تشديد الجلد على الوجه وproptosed العين قليلا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع ذ محور للشبيكة الشعر على طول سفينة الحوفي مباشرة تحت بيليه. قياس طول الأوعية المتفرعة في اتجاه تصاعدي الكريات. يسجل هذا القياس في أعشار من ملليمتر وتعيين طول السفينة (VL) (الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل الماوس أو شبيكة الشعر بحيث تكون المسافة حول العين أن هذه السفن قد ظهرت تصبح واضحة. فمن الأسهل أن نفكر في العين والوجه على مدار الساعة مع فترات من 1 إلى 12. المعين هذه الساعة ساعة عدد (CH) (الشكل 1B). يمكن أن يكون رقما صحيحا أو كسور 0.25 (على سبيل المثال، 2، 2.25، 2.5 أو 2.75). ملاحظة: CH هو ذاتي. على سبيل المثال، البعض قد قياس المسافة حول العين لتشمل جميع السفن ظهرت من حوف حين أن البعض الآخر قد يتوقف قياس عند نقطة حيث طول السفينة هو نصف القصوى. العامل المهم هو أن تكون متسقة مع واحد كيف يختار الصف. </li></ol><img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1.jpg" /> الرقم 1. الكمي لاتساع الأوعية الدموية القرنية. (A) 80 نانوغرام bFGF بيليه مزروع في C57BL / 6J الماوس يظهر المصباح الشقي شبيكة الشعر موجهة لقياس طول السفينة. VL = 0.9 مم. (B) نفس الاداء العين المصباح الشقي شبيكة الشعر استدارة لقياس ساعة على مدار الساعة. CH = 3.25. حساب مساحة سفينة = 1.84 مم 2. هذه الصور تم تعزيز رقميا للسماح لإضافة التخطيطي شبيكة الشعر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" target="_blank">انقر هنا لمشاهدة صورة أكبر.</a> <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب مساحة سفينة (VA) باستخدام الصيغة أدناه، والتي تقوم على مساحة بيضاوي (ملاحظة، فإنه من المفيد أن تضع ذلك في الاعتبار عند الدرجات.) اكسبريس VA في ملليمتر مربع. الصيغة هي كما يلي: سفينة طول × مدار الساعة ساعة X 0.2 = π منطقة السفينة </li></ol>

<ol>
	<li>Gospodarowicz, D., Moran, J., Braun, D., Birdwell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+bovine+vascular+endothelial+cells:+fibroblast+growth+factor+as+a+survival+agent.">Clonal growth of bovine vascular endothelial cells: fibroblast growth factor as a survival agent.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 73, 4120-4124 (1976).</li><li>Glaser, B. M., D'Amore, P. A., Seppa, H., Seppa, S., Schiffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+tissues+contain+chemoattractants+for+vascular+endothelial+cells.">Adult tissues contain chemoattractants for vascular endothelial cells.</a> Nature. 288, 483-484 (1980).</li><li>Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R., Lawley, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+laminin+and+basement+membrane+in+the+morphological+differentiation+of+human+endothelial+cells+into+capillary-like+structures.">Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures.</a> J. Cell Biol. 107, 1589-1598 (1988).</li><li>Montesano, R., Orci, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-promoting+phorbol+esters+induce+angiogenesis+in+vitro.">Tumor-promoting phorbol esters induce angiogenesis in vitro.</a> Cell. 42, 469-477 (1985).</li><li>Korff, T., Augustin, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+endothelial+cells+in+multicellular+spheroids+prevents+apoptosis+and+induces+differentiation.">Integration of endothelial cells in multicellular spheroids prevents apoptosis and induces differentiation.</a> J. Cell Biol. 143, 1341-1352 (1998).</li><li>Nicosia, R. F., Tchao, R., Leighton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histotypic+angiogenesis+in+vitro:+light+microscopic,+ultrastructural,+and+radioautographic+studies.">Histotypic angiogenesis in vitro: light microscopic, ultrastructural, and radioautographic studies.</a> In Vitro. 18, 538-549 (1982).</li><li>Wong, K. H., Chan, J. M., Kamm, R. D., Tien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+models+of+vascular+functions.">Microfluidic models of vascular functions.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14, 205-230 (2012).</li><li>Sandison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+microscopic+study+of+living+growing+tissues+by+the+introduction+of+a+transparent+chamber+in+the+rabbit's+ear.">A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear.</a> Anat. Rec. 28, 281-287 (1924).</li><li>Jain, R. K., Schlenger, K., Hockel, M., Yuan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+angiogenesis+assays:+progress+and+problems.">Quantitative angiogenesis assays: progress and problems.</a> Nat. Med. 3, 1203-1208 (1997).</li><li>Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+cornea+micropocket+angiogenesis+assay.">The mouse cornea micropocket angiogenesis assay.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2545-2550 (2007).</li><li>Gimbrone, M. A., Leapman, S. B., Cotran, R. S., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+in+vivo+by+prevention+of+neovascularization.">Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization.</a> J. Exp. Med. 136, 261-276 (1972).</li><li>Gimbrone, M. A., Cotran, R. S., Leapman, S. B., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+growth+and+neovascularization:+an+experimental+model+using+the+rabbit+cornea.">Tumor growth and neovascularization: an experimental model using the rabbit cornea.</a> J. Natl. Cancer Inst. 52, 413-427 (1974).</li><li>Rohan, R. M., Fernandez, A., Udagawa, T., Yuan, J., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+heterogeneity+of+angiogenesis+in+mice.">Genetic heterogeneity of angiogenesis in mice.</a> FASEB J. 14 (7), 871-876 (2000).</li><li>Chang, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+response+of+FGF-2+for+lymphangiogenesis.">Dose-dependent response of FGF-2 for lymphangiogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (32), 11658-11663 (2004).</li><li>Udagawa, T., Birsner, A. E., Wood, M., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+suppression+of+angiogenesis+following+radiation+exposure+is+independent+of+hematopoietic+reconstitution.">Chronic suppression of angiogenesis following radiation exposure is independent of hematopoietic reconstitution.</a> Cancer Res. 67 (5), 2040-2045 (2007).</li><li>Turner, P. V., Albassam, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+rats+to+corneal+lesions+after+injectable+anesthesia.">Susceptibility of rats to corneal lesions after injectable anesthesia.</a> Med Comp. 55 (2), 175-182 (2005).</li><li>Calderone, L., Grimes, P., Shalev, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reversible+cataract+induced+by+xylazine+and+by+ketamine-xylazine+anesthesia+in+rats+and+mice.">Acute reversible cataract induced by xylazine and by ketamine-xylazine anesthesia in rats and mice.</a> Exp. Eye Res. 42, 331-337 (1986).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

هناك العديد من الخطوات الهامة في إجراء فحص القرنية ناجحة. أول من صنع كريات موحدة قادرة على أن تزرع وتحفيز الأوعية. أهم أجزاء من إعداد بيليه هي 1) باستخدام عامل النمو خالية من الناقل. 2) ضمان وجود مزيج جيد من عامل النمو مع sucralfate وhydron و3) تحريك الخليط النهائي بسرعة ولكن بعن?...

عملية تكوين الأوعية الدموية، وتشكيل الأوعية الدموية الجديدة تشكل تلك الموجودة مسبقا، معقد للغاية وينظم من قبل العديد من العوامل الداخلية التي تتحكم في الخطوات المختلفة لتنتشر السفن والتشكل. يتم تشغيل الأوعية الدموية بسبب حدوث تحول في التوازن بين العوامل المؤيدة والمضادة للعائية، وهو التوازن الذي يحافظ عادة على الأوعية الدموية في حالة سكون. الأوعية الدموية في البالغين يحدث في بعض الظروف الفسيولوجية مثل أثناء دورة المبيض الأنثوية أو في عمليات إصلاح مثل التئام الجروح وتجديد الأنسجة. ومع ذلك، فإنه هو أيضا السمة المميزة للعديد من الأمراض بما في ذلك الأورام الخبيثة، وظروف المناعة الذاتية والأمراض الالتهابية. اشتراك الأوعية الدموية في هذه الظروف الفسيولوجية والمرضية يجعل من موضوع هام للبحث وهدفا جذابا للعلاج. نظرا لتعقيد الأوعية الدموية وإشراك العديد مLLS والعوامل في هذه العملية، بما في ذلك الخلايا البطانية، pericytes، تعميم خلايا والخلايا اللحمية، في المختبر تظل نماذج محدودة ولا يمكن أن ألخص فريدة من نوعها المكروية في الجسم الحي. الرئيسية في فحوصات المختبر من الأوعية الدموية وتركز بشكل كبير على مراقبة الآثار المباشرة على الخلايا البطانية وقياس خطوات معينة في عملية عائية تحت ظروف خاضعة للرقابة. وتشمل هذه المقايسات الكمي من الخلايا البطانية انتشار 1، 2 الهجرة، وتشكيل شبكة 3، تشكيل أنبوب 4 و 5 تنبت من الكروية. خارج الحي النماذج، على عكس تلك الموجودة في المختبر، هي أكثر تعقيدا ودمج أنواع الخلايا الأنسجة المتعددة، على سبيل المثال الراهن حلقة الأبهر فحص 6. ومع ذلك، مثل أنظمة أخرى، فإنه لا يمكن التقاط مساهمة خلايا تعميم وسدى الطبيعي للخلايا البطانية كما موجود في الجسم الحي. محاولاتلدراسة الأوعية الدموية تحت تدفق لتقليد تتم باستخدام أنظمة ميكروفلويديك 7 الإعداد في الجسم الحي، ولكن حتى هذه المقايسات، وإن تحسنت كثيرا، لا تزال غير قادرة على حساب لجميع المقصورات الموجودة في الجسم الحي. بسبب القيود المفروضة على في المختبر، وبحكم نماذج الأوعية الدموية الجسم الحي، في الجسم الحي نماذج تبقى الخيارات أكثر موثوقية للدراسات الأوعية الدموية. أمثلة على هذه النماذج تشمل غرس غرف شفافة، &quot;ويندوز&quot;، التي تسمح التصور من تزايد الأوعية الدموية تحت المجهر 8، يزرع تحت الجلد عن طريق الحقن مثل تشكيل matrigel والسفينة في الأنسجة الطبيعية مثل الماوس الأذن وغشاء مشيمائي الدجاج (CAM ). ومع ذلك، واحد من النماذج الأكثر قبولا الأوعية الدموية والكمية في الجسم الحي هو فحص القرنية micropocket اتساع الأوعية الدموية وصفها هنا، التي تستغل بشكل طبيعي اوعائيالقرنية بمثابة &quot;شاشة&quot; لتصور وتقييم النمو عائية جديد 9. نحن هنا وصف micropocket فحص القرنية وتطويرها في الفئران. في البداية تم استخدام نموذج لقياس المحفزات عائية غير محددة في القرنيات أرنب. وقد تم ذلك عن طريق إدخال قطع الورم في الخلط المائي في الغرفة الأمامية للعين الأرنب ويقاس اتساع الأوعية الدموية التي يسببها الورم 11. ومع ذلك، فقد تطورت الفحص في وقت لاحق لدراسة آثار النمو محدد 10 العوامل لتحديد وتوحيد تأثير عائية أفضل. من أجل الافراج عن عامل النمو في العين، استخدمت الكريات بطء الإفراج تحتوي على كميات معروفة من عوامل النمو عائية بدلا من الأنسجة. توفر تنقية البروتينات المؤتلف عائية مثل bFGF أو VEGF تمكين استخدامها كأهداف محددة من modulaters الأوعية الدموية 12. في البداية، كان الفحصتستخدم إلى حد كبير في الأرانب، والتي هي أسهل للعمل مع نظرا لحجمها ولكن في وقت لاحق وقد ترجم هذا النموذج في الفئران. نموذج حيواني أصغر حجما وأقل تكلفة. التحول من أرنب على الفئران تقدم ميزة هامة لتكون قادرة على استخدام الحيوانات التلاعب وراثيا، مما يخلق مجالا جديدا للبحث في المكونات الوراثية التي تؤثر على الأوعية الدموية 13. بالإضافة إلى استخدام أكثر قبولا من القرنية الفحص في دراسة الأوعية الدموية، ويمكن أيضا عمليات بيولوجية أخرى يجري التحقيق باستخدام فحوصات تعديل. على سبيل المثال، قدمت دراسات lymphangiogenesis ممكن من خلال غرس انخفاض الكريات جرعة bFGF الذي يسمح التصور من الأوعية اللمفاوية من خلال الواسمات الجزيئية محددة 14. وبالإضافة إلى ذلك، قدمت هذا الاختبار وسيلة لتقييم آثار الإشعاع على الأوعية الدموية 15. في الجمع، والقرنية micropocket فحص الأوعية الدموية هو كمي، مندوبroducible، وتقييم مرونة الأوعية الدموية في الجسم الحي. والميزة الرئيسية لهذا الاختبار هي أن قياس السفن الخلفية غير ضروري لأن الأوعية تنمو في الأنسجة اوعائي بشكل طبيعي. نحن هنا وصف بروتوكول من هذا الاختبار في التفاصيل ومناقشة السيناريوهات المختلفة التي يمكن أن تحدث. يتكون الاختبار من 3 قطاعات منفصلة. هنا فإننا سوف تصف إعداد عامل نمو شامل الكريات، وغرس الجراحية لاحقا، وأخيرا الطريقة المستخدمة لقياس النمو التوعية المستحدثة الناتجة عن ذلك.

<table><tbody><tr><td>Section 1: Pellet preparation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sucralfate</td><td>Sigma</td><td>#S0652</td><td></td></tr><tr><td>Hydron (aka Poly(2-Hema))</td><td>Sigma</td><td>#P3932-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Pharmco Products Inc</td><td>#111000200CSGL</td><td></td></tr><tr><td>Growth factors:</td><td></td><td></td><td>Must be carrier-free (no bovine serum albumin(BSA))</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;Fibroblast growth factor (FGF)</td><td>PeproTech</td><td>#AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Vascular endothelial growth factor (VEGF)</td><td>R D Systems</td><td>#293-VE-050/CF</td><td></td></tr><tr><td>35 mm dish</td><td>Becton-Dickson</td><td>#353001</td><td>Used for storage of pellets</td></tr><tr><td>10 cm petri dish</td><td>VWR</td><td>#25384-342</td><td>Used as work surface for preparing pellets</td></tr><tr><td>Mesh</td><td>Sefar America</td><td>#03--300/51</td><td>300 um nitex nylon, cut into cm square pieces and sterilzed in autoclave</td></tr><tr><td>Spatulas</td><td>Fisher Scientific</td><td>#21-401-10</td><td>Use tapered end of one to break up pellet mixture. Bend tapered end of other to help remove mixture from microcentrifuge tube.</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>#05-408-146</td><td>One for hydron, one for sucralfate</td></tr><tr><td>Jewelers forceps, #5</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2315E</td><td>Need 2 for pulling mesh apart</td></tr><tr><td>Centrifugal evaporator</td><td>ThermoSavant</td><td>DNA110 SpeedVac</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Section 2: Surgical implantation of pellets</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Operating microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2.5% Avertin</td><td></td><td></td><td>General anesthetic</td></tr><tr><td>Proparacaine hydrochloride ophthalmic solution 0.5%</td><td>Falcon</td><td>NDC# 6131401601</td><td>Eye anesthetic</td></tr><tr><td>Triple Antibiotic Ophthalmic Ointment</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC# 2420878055</td><td>Contains neomycin, polymixin and bacitracin</td></tr><tr><td>Ophthalmic microknife, 5 mm</td><td>Surgistar</td><td>#924501</td><td>30 degree angle</td></tr><tr><td>von Graef knife</td><td>Ambler Surgical</td><td>#3401E</td><td></td></tr><tr><td>Jewelers forceps, #1</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2301E</td><td>Must be blunted with sharpening stone for proptosing eye</td></tr><tr><td>Jewelers forceps, #5</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2305E</td><td>For picking up pellets and placing on eye</td></tr><tr><td>Small curved scissors</td><td>Ambler Surgical</td><td>#5636E</td><td>For trimming whiskers</td></tr><tr><td>Gauze</td><td></td><td></td><td>For blotting eye after proparacaine</td></tr><tr><td>Section 3: Grading of Corneal Neovascularization</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2.5% Avertin</td><td></td><td></td><td>General anesthetic</td></tr><tr><td>Slit lamp</td><td>Nikon</td><td>FS-2</td><td>Needs an ocular with a reticule to assist in measuring</td></tr></tbody></table>

the corneal micropocket assay: a model of angiogenesis in the mouse eye

الماوس القرنية micropocket الفحص هو فحص قوي والكمي في الجسم الحي لتقييم الأوعية الدموية. باستخدام الكريات بطء الإفراج موحدة تحتوي على عوامل النمو المحددة التي تؤدي إلى نمو الأوعية الدموية في جميع أنحاء القرنية اوعائي بشكل طبيعي، الأوعية الدموية يمكن قياسها كميا و. في هذا الاختبار يتم إنشاء استجابة عائية على مدار عدة أيام، وهذا يتوقف على نوع وجرعة من عامل النمو المستخدمة. يتم تشغيل تحريض اتساع الأوعية الدموية عادة إما عاملا أساسيا نمو الخلايا الليفية (bFGF) أو عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF). من خلال الجمع بين هذه العوامل النمو مع sucralfate وhydron (بولي HEMA (بولي (ميتاكريليت 2 هيدروكسي))) وصب الخليط في الكريات، ويمكن زرعها جراحيا في العين الماوس. هذه الكريات موحدة ببطء الافراج عن عوامل النمو أكثر من خمسة أو ستة أيام (bFGF أو VEGF على التوالي) مما يتيح استجابة عائية الكافية اللازمة لف منطقة السفينةuantification باستخدام المصباح الشقي. هذا الاختبار يمكن استخدامها لمختلف التطبيقات، بما في ذلك تقييم المخدرات المغير عائية أو العلاجات وكذلك المقارنة بين خلفيات وراثية مختلفة تؤثر على الأوعية الدموية. محقق المهرة بعد ممارسة هذا الاختبار يمكن زرع بيليه في أقل من 5 دقائق لكل عين.

وتظهر نتائج نموذجية لbFGF وVEGF في الكريات العادية منخفضة عائية C57BL / 6J الفئران في الشكل 2A و B على التوالي. يبين الشكل 2E التوزيع الطبيعي من منطقة السفينة (VA) في C57BL / سلالة 6J بجرعات متفاوتة من هذه نمو العوامل. 80 الكريات bFGF نانوغرام يؤدي عادة في VA حوا...

Watch this Scientific Journal Video about The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye at JoVE.com

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

يصف بروتوكول الفحص micropocket القرنية كما وضعت في الفئران.

والقرنية Micropocket الفحص: نموذج من الأوعية الدموية في العين ماوس

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

the-corneal-micropocket-assay-a-model-of-angiogenesis-in-the-mouse-eye

Research

JoVE Journal

Neuroscience

16.6K Views.  Boston Children's Hospital.  يصف بروتوكول الفحص micropocket القرنية كما وضعت في الفئران. 

Video: The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are administered 1. This uniqueness has made the cornea pocket assay one of the most used models for angiogenesis studies. The cornea composes multiple layers of cells. It is therefore possible to embed a pellet containing the angiogenic factor of interest in the cornea to investigate its angiogenic effect 2,3. Here, we provide a step by step demonstration of how to (I) produce the angiogenic factor-containing pellet (II) embed the pellet into the cornea (III) analyze the angiogenesis induced by the angiogenic factor of interest. Since the basic fibroblast growth factor (bFGF) is known as one of the most potent angiogenic factors 4, it is used here to induce angiogenesis in the cornea.

The cornea is unique in that it lacks vascular tissues. However, robust blood vessel growth and survival can be induced in the cornea by potent angiogenic factors. Therefore, the cornea can provide with us a valuable tool for angiogenic studies. This protocol demonstrates how to perform the mouse model of cornea pocket assay and how to assess the angiogenesis induced by angiogenic factors using this model.

نموذج الفأر من القرنية الفحص جيب للدراسة الأوعية الدموية

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Medicine

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Angiogenesis is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting of new blood vessels from a pre-existing vessel network. Angiogenesis plays a key role not only in normal development of organs and tissues, but also in many diseases in which blood vessel formation is dysregulated, such as cancer, blindness and ischemic diseases. In adult life, blood vessels are generally quiescent so angiogenesis is an important target for novel drug development to try and regulate new vessel formation specifically in disease. In order to better understand angiogenesis and to develop appropriate strategies to regulate it, models are required that accurately reflect the different biological steps that are involved. The mouse neonatal retina provides an excellent model of angiogenesis because arteries, veins and capillaries develop to form a vascular plexus during the first week after birth. This model also has the advantage of having a two-dimensional (2D) structure making analysis straightforward compared with the complex 3D anatomy of other vascular networks. By analyzing the retinal vascular plexus at different times after birth, it is possible to observe the various stages of angiogenesis under the microscope. This article demonstrates a straightforward procedure for analyzing the vasculature of a mouse retina using fluorescent staining with isolectin and vascular specific antibodies.

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

The neonatal murine retina provides a well characterized physiological model of angiogenesis, which permits investigations of the roles of different genes or drugs that modulate angiogenesis in an in vivo context. Immunofluorescent staining to accurately visualize the vascular plexus is pivotal to the success of these types of studies.

كله جبل تلوين مناعي للشبكية الفأر حديثي الولادة المعنية بالتحقيق في الأوعية الدموية<em&gt; في الجسم الحي</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

والقلوي حرق الإصابات نموذج من القرنية اتساع الأوعية الدموية في ماوس

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

نموذج الفأر ليزر بفعل اتساع الأوعية الدموية المشيمية

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

الفئران الفحص مساريق الأوعية الدموية

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Biology

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

نيوفاسكولاريزيشن آيريس المستحثة بثقب كنموذج الفأر من إيريديس روبيوسيس

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

تطوير نموذج تجريبي غير باضع بمساعدة الليزر لفقدان الخلايا الانهوفية القرنية

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

An Ex Vivo Choroid Sprouting Assay of Ocular Microvascular Angiogenesis

Pathological choroidal angiogenesis, a salient feature of age-related macular degeneration, leads to vision impairment and blindness. Endothelial cell (EC) proliferation assays using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs) or isolated primary retinal ECs are widely used in vitro models to study retinal angiogenesis. However, isolating pure murine retinal endothelial cells is technically challenging and retinal ECs may have different proliferation responses than choroidal endothelial cells and different cell/cell interactions. A highly reproducible ex vivo choroidal sprouting assay as a model of choroidal microvascular proliferation was developed. This model includes the interaction between choroid vasculature (EC, macrophages, pericytes) and retinal pigment epithelium (RPE). Mouse RPE/choroid/scleral explants are isolated and incubated in growth-factor-reduced basal membrane extract (BME) (day 0). Medium is changed every other day and choroid sprouting is quantified at day 6. The images of individual choroid explant are taken with an inverted phase microscope and the sprouting area is quantified using a semi-automated macro plug-in to the ImageJ software developed in this lab. This reproducible ex vivo choroidal sprouting assay can be used to assess compounds for potential treatment and for microvascular disease research to assess pathways involved in choroidal micro vessel proliferation using wild type and genetically modified mouse tissue.

This protocol presents choroid sprouting assay, an ex vivo model of microvascular proliferation. This assay can be used to assess pathways involved in proliferating choroidal micro vessels and assess drug treatments using wild type and genetically modified mouse tissue.

Ex Vivo Choroid فحص من تكوين الأوعية الأوعية الدموية الدقيقة

Pathological choroidal angiogenesis, a salient feature of age-related macular degeneration, leads to vision impairment and blindness. Endothelial cell ...

دراسة تكوين الأوعية باستخدام هجرة الجروح الخدش ومقايسات تنبت كروية

Investigating Angiogenesis on a Functional and Molecular Level by Leveraging the Scratch Wound Migration Assay and the Spheroid Sprouting Assay

Angiogenesis plays a crucial role in both physiological and pathological processes within the body including tumor growth or neovascular eye disease. A detailed understanding of the underlying molecular mechanisms and reliable screening models are essential for targeting diseases effectively and developing new therapeutic options. Several in vitro assays have been developed to model angiogenesis, capitalizing on the opportunities a controlled environment provides to elucidate angiogenic drivers at a molecular level and screen for therapeutic targets.
This study presents workflows for investigating angiogenesis in vitro using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). We detail a scratch wound migration assay utilizing a live cell imaging system measuring endothelial cell migration in a 2D setting and the spheroid sprouting assay assessing endothelial cell sprouting in a 3D setting provided by a collagen matrix. Additionally, we outline strategies for sample preparation to enable further molecular analyses such as transcriptomics, particularly in the 3D setting, including RNA extraction as well as immunocytochemistry. Altogether, this framework offers scientists a reliable and versatile toolset to pursue their scientific inquiries in in vitro angiogenesis assays.

تسليط الضوء على المؤلف: التحقيق في تولد الأوعية من خلال التحديات والابتكارات في تطوير الفحص

This study presents the two-dimensional (2D) scratch wound migration assay and the three-dimensional (3D) spheroid sprouting assay, along with their respective downstream analysis methods, including RNA extraction and immunocytochemistry, as suitable assays to study angiogenesis in vitro.

التحقيق في تكوين الأوعية الدموية على المستوى الوظيفي والجزيئي من خلال الاستفادة من مقايسة هجرة جرح الخدش ومقايسة تنبت كروية

Angiogenesis plays a crucial role in both physiological and pathological processes within the body including tumor growth or neovascular eye disease. A ...

والقرنية Micropocket الفحص: نموذج من الأوعية الدموية في العين ماوس

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

نموذج الفأر من القرنية الفحص جيب للدراسة الأوعية الدموية

كله جبل تلوين مناعي للشبكية الفأر حديثي الولادة المعنية بالتحقيق في الأوعية الدموية

والقلوي حرق الإصابات نموذج من القرنية اتساع الأوعية الدموية في ماوس

نموذج الفأر ليزر بفعل اتساع الأوعية الدموية المشيمية

الفئران الفحص مساريق الأوعية الدموية

نيوفاسكولاريزيشن آيريس المستحثة بثقب كنموذج الفأر من إيريديس روبيوسيس

تطوير نموذج تجريبي غير باضع بمساعدة الليزر لفقدان الخلايا الانهوفية القرنية

Ex Vivo Choroid فحص من تكوين الأوعية الأوعية الدموية الدقيقة

التحقيق في تكوين الأوعية الدموية على المستوى الوظيفي والجزيئي من خلال الاستفادة من مقايسة هجرة جرح الخدش ومقايسة تنبت كروية

التحقيق في تكوين الأوعية الدموية على المستوى الوظيفي والجزيئي من خلال الاستفادة من مقايسة هجرة جرح الخدش ومقايسة تنبت كروية