يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم الأجنة والعلاج الجيني وزرع الخلايا الجذعية. ميزة لهذه التقنية هو أنه يتيح تحليل آثار العلاجات التجريبية المختلفة على الأجنة مورين. سوف يكون هذا الإجراء الأطباء نيكولاس آهن، وباربرا كونز، والأطباء والزملاء الباحثين في مختبرنا.
قبل البدء في العملية، إسقاط خمسة إلى 10 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني معقم داخل وخارج طرف إبرة جراحية، مرتين إلى ثلاث مرات لمسحه من أي حطام ممكن. المقبل ملء الإبرة مع كاشف الفائدة في حجم التجريبية المناسبة والتركيز. واضغط على زر الوضع ثلاث مرات على حاقن الصغرى للتقدم إلى شاشة معايرة الحقن.
أضف فواصل زمنية من 10 أو 100 مللي ثانية لضبط وقت الحقن، واضغط على زر الوضع مرتين إضافيتين. اضغط على زر التوازن واضغط على دواسة القدم مرة واحدة. ثم اضغط على دواسة مرة أخرى وتقييم ما حجم حل يتم إفراغها من الإبرة لكل دفع.
عندما يتم معايرة الحقن الدقيق إلى حجم التجريبية المناسبة، وملء الإبرة إلى المستوى الصحيح للحقن. عندما تم تنظيف جميع الإبر، تأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع إصبع القار الحامل من عمرها شهرين إلى ستة أشهر. حلق البطن ، مع الحرص على عدم تلف الحلمات ، ونقل الحيوان إلى وسادة التدفئة في موقف سوبين.
ضع مرهم على عيون الحيوان وأقفل الأطراف على وسادة التدفئة مع الشريط. وتطهير الجلد المكشوف. ثم حقن التخدير الموضعي مثل 100 ميكرولترات من 0.25٪ Bupivacaine تحت الجلد.
المقبل، وجعل شق الجلد سنتيمتر واحد إلى اثنين بحيث الحدود السفلية ليست أقرب من سنتيمتر واحد إلى التطفل، وتحديد خط الوسط من اللفافة، مع الحرص على عدم إصابة الأوعية شرسوفية المحيطة بها. باستخدام ملقط Adson، قرصة اللفافة دون الاستيلاء على أي من الأجهزة أو الأجنة الكامنة، وفتح الأنسجة مع مقص. مرة واحدة بأمان داخل تجويف البطن، وتوسيع شق اللفافة إلى طول شق الجلد، واستخدام تطبيقات طرف القطن لنقل الأمعاء إلى الجزء العلوي من البطن لفضح الرحم الجرافيد.
استخراج الرحم من خلال شق بعناية تحديد المبايض الأيمن واليسرى لضمان أن يتم حساب جميع الأجنة. ضع الرحم الأيسر مرة أخرى في البطن بحيث يتعرض فقط الرحم الأيمن ، للحفاظ على الأجنة غير المحقونة دافئة. و بهدوء في كيس السلوي الجانبي بين أصابع الإبهام و المؤشر من اليد غير المهيمنة.
ضع مجهر التشريح فوق الحيوان وضبط التركيز والإضاءة للحصول على تصور أفضل للجنين عند الضرورة. للحقن في الوريد تدوير الرحم بحيث vitelline عبثا، ليتم حقنها موازية لتلميح إبرة. ووضع الإبرة على الرحم في زاوية خمس درجات لاختراق جدار الرحم.
مع طرف بين جدار الرحم وكيس السلوي، وضع الطرف مباشرة فوق عبثا vitelline وزاوية عرضية تقريبا، تنزلق الإبرة على عبثا حتى يتقدّم شطبة في السفينة. من الضروري أن تبقى الزاوية منخفضة حتى لا تخترق الإبرة الجدار الخلفي للسفينة. عندما يتم ملاحظة بقعة من الدم في طرف إبرة، للضغط على دواسة القدم لحقن الحجم الكامل للمواد ذات الاهتمام في السفينة.
بالنسبة للحقن داخل السلوي، قم بتدوير الكيس الأمنيوسي حتى يتم العثور على موقع خالٍ من الأوعية. نقطة إبرة عمودي على جدار الرحم وثقب الإبرة من خلال كيس صفار الرحم، وساك السلى مع الحرص لا تخترق أي أنسجة الجنين. ثم حقن الحجم المناسب من المواد المطلوبة.
بعد أي نوع من الحقن، سحب الإبرة من موقع الحقن مرة واحدة يتم تسليم وحدة التخزين المطلوب. و انتقل إلى الجنين التالي حتى تم حقن كل أجين قرن الرحم الصحيح. ثم العودة الحق في قرن الرحم في البطن.
و أخرجي قرن الرحم الأيسر من البطن عندما تم حقن جميع الأجنة في القرن الأيسر إعادة الرحم بأكمله إلى البطن، مع الحرص على تجنب volvulus الرحم أو الأمعاء. استخدام ماصة نقل المتاح للاستغناء عن حوالي ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيمة في البطن، لتحل محل أي خسائر غير قابلة للحساسية.
واستخدام 4-0 البوليجلاكتين 910 الغرز لإغلاق اللفافة والبطن في طبقة واحدة مستمرة. ثم نقل الماوس إلى قفص نظيف تحت مصباح الحرارة مع مراقبة حتى إعادة شغل كامل. في هذه التجربة التدريبية أظهرت أكباد الأجنة التي تلقت زرع الرحم من قبل متدرب مستويات فلورية أقل بعد 24 ساعة من الحقن ، بسبب انخفاض عدد خلايا GFP المزروعة ، مقارنة بالكبد التي حقنها مدرب من ذوي الخبرة.
تحليل التدفق السيتوميتري للخلايا المانحة الإيجابية GFP يرتبط أيضا مع انخفاض مستوى الفلورسنت لوحظ تحت المجهر الفلورسنت. قدرة ناقلات الفيروسية تسليمها عبر الطريق داخل السلوي إلى الخلايا عبر الظهر في اتصال مع السائل الأمنيوسي. ويتمثل في تحويل الخلايا الظهارية 48 ساعة بعد الحقن في الرحم من الفيروس أدينو تحمل transgene GFP في يوم الحمل 12.5 الأجنة.
مرة واحدة يتقن هذه التقنية يمكن أن تكتمل في 15-25 دقيقة لكل فأرة حامل. بعد مشاهدة هذا الفيديو يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقديم علاجات مختلفة بأمان وفعالية لأجنة الماوس.
