이 프로토콜은 순환 사망 후 기증 된 심장의 사용을 허용하기 위해 다른 심장 보호 컨디셔닝 전략의 평가를 촉진하여 제한된 이식 기관 공급 문제를 대상으로합니다. 동물을 중간 크기로 설정된 가열 패드에 놓습니다. 마취 된 성인 쥐의 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 직장 온도 프로브를 삽입.
경피 펄스 산소계 센서를 뒷발에 부착하고 흡수 패드로 쥐를 덮어 체온을 유지합니다. 목에 3-4센티미터 의 중간 선 피부 절개를 하고 무딘 팁 곡선 가위를 사용하여 피하 조직을 무딘 해부하여 올바른 스테르노히드 근육을 노출시하십시오. 비 외상성 집게를 사용하여, 오른쪽 경동맥, 경정맥 및 미주 신경이 확인될 때까지 근육을 측면으로 움직입니다.
가위를 사용하여 미주 신경을 경동맥과 조심스럽게 분리하십시오. 오른쪽 경정맥에 헤파린킬로그램당 2, 000개의 국제 유닛을 주입하고, 혈중 누출을 피하기 위해 바늘 회수 후 주사 부위에 압력을 가한다. 곡선 된 집게를 사용하여 경동맥 주위에 두 개의 5-0 실크 봉합사를 전달합니다.
노출된 동맥의 우수한 양상에서 경동맥을 가리고 근위 봉합사를 풀어 놓고, 쥐를 스테레오 현미경 아래에 놓는 다산 봉합사를 단단히 부착한다. 그런 다음 미세 수술 가위를 사용하여 경동맥의 전방 벽에 1밀리미터 절개를 조심스럽게 만들고 대동맥 아치쪽으로 22 게이지, 1인치 폐쇄된 정맥 카테터를 삽입합니다. 배율 및 미세 절 도구의 사용은 이 단계에 매우 좋습니다.
깨끗한 필드는 출혈을 피하기 위해 근위 봉합사를 긴장시킴으로써 달성 될 수있다. 심장 기증은 전 생체 내 심폐 장치를 조립하는 데 필요합니다. DCD 프로토콜을 시작하려면 먼저 동물을 추방한 다음 모기 집게를 사용하여 기관진을 고정하여 고뇌 단계를 시작합니다.
피크 수축기 혈압이 30밀리미터 이하의 수은 또는 아시스톨 또는 심실 세동이 나타날 때 기능적인 WIT를 계산하기 시작합니다. WIT의 끝에서, 내측 스테르노절제술을 수행, 필요한 경우 Alm re트랙터와 흉부오픈을 유지. 폐 정맥 및 기타 흉부 구조에서 심장을 분리하여 카르디절제술을 완료합니다.
얼음이 차가운 크렙스 솔루션에 심장을 즉시 잠급하여 전 생체 시스템으로 의 신속한 수송을 합니다. 2-0 실크 봉합사를 사용하여 대어타를 랑엔도르프 장치에 단단히 고정한 다음 스톱콕을 엽니다. 이제 캐뉼라로의 흐름을 완전히 열고 초기 재관전 및 안정화 시간을 시작합니다.
심혼을 회전하여 아리아가 압력 센서를 향하도록 하고, 필요한 경우 좌심실 심방 개구부를 넓히기 위해 폐 정맥을 해부합니다. 다음으로 압력 센서에 연결된 라텍스 풍선을 삽입하여 풍선이 심실 내부에 완전히 배치되었는지 확인합니다. 끝 확장기 압력이 15밀리미터의 수은에 도달할 때까지 풍선을 식염수로 천천히 채웁니다.
관상 동맥 혈관을 뚫지 않고 심장의 전방 면에 속도 전극을 삽입합니다. 자발적인 구타가 관찰되면, 분당 300 비트로 속도를 설정합니다. 안정화 10분 후, 연속 심실 압력 측정 기록을 시작하여 재조정 및 평가 단계를 시작합니다.
1시간 후 랑엔도르프 장치에서 심장을 제거하고 직선 고탄소 강철 블레이드를 사용하여 아리아를 제거합니다. 오른쪽 심실이 아래로 향하고, 1~ 2밀리미터 두께의 횡선 심실 조각을 잘라. 조직의 세 번째 조각에서 오른쪽 심실을 소비하고, 스냅다운 스트림 생화학 분석을 위해 왼쪽 심실을 동결.
PBS에서 새로 준비된 5%TTC 솔루션의 나머지 섹션을 섭씨 37도에서 10분 동안 잠급니다. 다음 아침, 신선한 PBS에서 샘플을 두 번 세척하고 이미징을 위해 신선한 PBS에 샘플을 담급합니다. 실행 가능한 조직은 색상에 벽돌 빨간색 나타납니다.
추방 후 혈압은 예측 가능한 패턴으로 급격히 떨어지고 사망할 것으로 예상되는 시간은 5분 미만입니다. 여기서는 WIT의 0, 10, 15분 에 이어 재조정 시작 시 평균 압력 대 시간 곡선이 표시됩니다. 수축 기능은 시간이 지남에 따라 개선되며, 짧은 기간의 WIT 를 사용하면 수축이 정상으로 돌아갈 수 있으며 형태학적 손상을 감지할 수 없습니다.
심폐증과 안정화 단계에서 첨가된 컨디셔닝 제를 사용하면 이 모델에서 15분의 WIT에 의해 생성된 손상이 심장 보호제에 의해 변조될 수 있음을 보여주었다. 이 기술은 모든 관련 변수및 약리학적 및 비약학적 개입 테스트를 완전히 제어할 수 있으며 더 큰 모델에서 재현하여 임상 번역을 용이하게 합니다.
