循环死亡后心脏捐献的临床前模型

该协议针对有限的移植器官供应问题，促进对不同心脏保护调节策略的评估，允许使用循环死亡后捐赠的心脏。将动物放在设置为中等的加热垫上。在确认麻醉成年大鼠对手趾捏没有反应后，插入直肠温度探针。

将透皮脉冲血氧计传感器连接到后爪，用吸水垫盖住大鼠以保持体温。在颈部做一个三到四厘米的中线皮肤切口，并使用钝尖弯曲剪刀钝解解皮下组织，暴露右胸肌。使用非创伤钳，横向移动肌肉，直到右肌动脉，血管和迷走神经被识别。

用剪刀小心地将迷走神经与心肌动脉分开。每公斤肝素注射2000国际单位到右血管中，在针头缩回后向注射部位施加压力，以避免血液泄漏。使用弯曲钳子在胡萝卜动脉周围传递两个 5-0 的丝绸缝合线。

将外露缝合牢固地固定在外露动脉的上部，保持近近缝合，将大鼠置于立体显微镜下。然后使用显微外科剪刀在胡萝卜动脉前壁上小心地切口一毫米，并将一个 22 量、一英寸的封闭静脉导管插入主动脉拱门。强烈建议使用这些步骤使用放大和微剖工具。

通过张紧近近缝合线以避免出血，可以实现清洁的田地。心脏捐赠是组装外体心肺功能痛器械所必需的。要启动 DCD 协议，首先对动物进行排泄，然后使用蚊子钳夹住气管，开始前一阶段。

当峰值收缩压降至30毫米以下的汞或囊肿或心室颤动时，开始计算功能 WIT，以先到者为准。在 WIT 结束时，执行中伸骨切除术，如有必要，使用 Alm 缩回器保持胸部打开。将心脏与肺静脉和其他胸腔结构分离，以完成切除术。

立即将心脏淹没在冰冷的 Krebs 解决方案中，快速运输到外体系统。使用2-0丝线，将大道紧贴在兰根多夫仪器上，然后打开塞子。现在完全打开流到管，并开始初始再灌注和稳定时间。

旋转心脏，使动脉面对压力传感器，并解剖肺静脉，以扩大左心室心房开口，如有必要。接下来，插入连接到压力传感器的乳胶气球，确保气球完全位于心室内。慢慢地用盐水填充气球，直到最终舒张压达到15毫米汞。

将起搏电极插入心脏前脸，而不刺穿冠状动脉血管。观察到自发跳动后，将起搏设置为每分钟 300 次。稳定10分钟后，启动连续的机内压力测量记录，开始修复和评估阶段。

一小时后，从兰根多夫仪器上取出心脏，并使用直高碳钢刀片取出阿克里斯。右心室朝下，切割一到两毫米厚的横向心室切片。从第三片组织中切除右心室，并捕捉冻结左心室，进行下游生化分析。

将其余部分在 PBS 中新准备的 5%TTC 溶液中，在 37 摄氏度下 10 分钟。第二天早上，将样品用新鲜 PBS 洗涤两次，将样品淹没在新鲜 PBS 中进行成像。可行的组织将显示砖红色的颜色。

分流后，血压以可预测的模式迅速下降，预计死亡时间不到五分钟。此处显示了 WIT 零、10 和 15 分钟后修复开始时的平均压力与时间曲线。收缩功能将随着时间的推移而改善，使用短期的WIT将允许收缩恢复正常，形态损伤将不能检测。

使用与心痛一起添加的调理剂，在稳定阶段表明，此模型中 15 分钟 WIT 产生的损伤可经心保护剂调节。该技术允许完全控制所有相关变量和药理学和非药理干预测试，并可以在更大的模型中复制，促进临床翻译。