طفيليات الملاريا مثل التي يقابلها البعوض التي تلعب دورا رئيسيا في انتشار المرض. وحتى الآن، كان من المستحيل تربية بعوض الملاريا بدون دم. وللتغلب على هذا القيد، يصف بروتوكولنا نظامًا غذائيًا بديلًا للدم قادرًا على دعم تكاثر البعوض في الحشرات.
استخدام نظام غذائي خال من الدم مفيد للغاية على الدم. لا يملك نظام غذائي خال من الدم القيود الأخلاقية مثل استخدام الدم البشري، أو الحيوانات التجريبية. استبدال الحيوانات على التجريب هو جزء من سياسة لدينا ثلاثة R.
استبدال، والحد، وصقل. عدم استخدام الدم يقلل من التكاليف، والخدمات اللوجستية المرتبطة بجمع وتخزين وصيانة الدم الأحمر. استخدام الوجبات الغذائية الاصطناعية يمكن أن تسهل اختبار جزيئات مضادة البلازموديوم.
حتى الآن، اختبرنا وجباتنا الغذائية باستخدام أنواع مختلفة من الأنوفيل. في كل منهم، وكان النظام الغذائي بشكل جيد من قبل الإناث وسمح إنتاج البيض ووضع. ونحن نعتقد أن هذا النظام الغذائي له إمكانية استخدام لتربية أنواع البعوض الأخرى.
في الواقع، نحن الآن نختبره للكشف عن الـ(ا وهم ناقل للعديد من الأمراض مثل حمى الضنك، فيروس زيكا، أو الحمى الصفراء). الحفاظ على anopheles coluzzii سلالة البعوض yaonde في غرفة في 26 درجة مئوية، والرطوبة 75٪، وتحت دورة داكنة خفيفة 12 ساعة إلى 12 ساعة. البعوض المنزل باستخدام الظروف الحشرية القياسية في قفص واحد لضمان التزاوج.
استخدام ماصة بلاستيكية لجمع خادر البعوض في حاوية مياه صغيرة. ضع الحاوية داخل قفص بعوضة للسماح للبعوض البالغ بالظهور والتزاوج. توفير 10٪ محلول تغذية الجلوكوز في القفص.
بعد ثلاثة أيام من ظهور, استخدام الطامح لجمع العدد اللازم من الإناث من قفص الأوراق المالية في كوب من الورق. للتمييز، الإناث أكبر والذكور لديهم proboscis أوسع وريش. قبل يوم واحد من مسارات التغذية، قم بإزالة محلول التغذية بنسبة 10٪.
في اليوم التالي، أعدّي حمية سائلة اصطناعية في ظروف معقمة في خزانة تدفق اللامينات وفقاً للمخطوطة. إضافة جميع المكونات إلى أنبوب من البلاستيك. تخلط جميع المكونات جيدا وتصفية باستخدام 0.45 ميكرون ميكرون.
ملء حقنة معقمة 1 ملليلتر مجهزة بإبرة قياس نصف بوصة مع 100 ميكرولترات من ملليغرام واحد لكل ملليلتر الهيبارين. ثم تخدير ستة إلى ثمانية أسابيع من العمر CD واحد الفئران الإناث مع الكيتامين والزيلازين باستخدام الطريق بين البريتوني. تقييم ما إذا كان الماوس يعرض أي رد فعل العضلات والاستجابة للمحفزات البدنية المختلفة.
قم بإجراء ثقب القلب. ثم جمع الدم من الفأرة الى أنبوب صغير والحفاظ على الدم في 37 درجة مئوية في حمام مائي. بعد ذلك، جمع ما يقرب من 30 البعوض الإناث من قفص الأسهم باستخدام الطامح.
نقل البعوض الإناث إلى 500 ملليلتر أكواب ورقية وتغطية مع شبكة ناموسية غرامة حتى لا يتمكنوا من الفرار. تمتد غشاء بارا فيلم عبر الفم من المغذية الزجاج لاحتواء وجبة. تطبيق جهاز التغذية الاصطناعية جرس الزجاج متصلة أنابيب بلاستيكية إلى الجزء العلوي من كل كوب.
توفير تدفق المياه المستمر إلى أنابيب اسطوانية وتغذية بحيث يتم الاحتفاظ في درجة الحرارة داخل في حوالي 37.5 درجة مئوية. تطبيق ملليلتر واحد من النظام الغذائي السائل قبل الدفء في 37 درجة مئوية أو دم الماوس الطازجة في تغذية الزجاج. إطعام البعوض لمدة 60 دقيقة في الظلام في 26 درجة مئوية.
بعد التغذية الاصطناعية ، يُجري تخدير البعوض البارد عند درجة حرارة 20 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. ثم ضع البعوض في طبق بيتري المبرد. تسجيل عدد البعوض الإناث المتقنة بالكامل.
فصل 30 أنثى منغمسة بالكامل ووضعها في قفص جديد. الآن، ضع ورقة تصفية مرطبة في الجزء السفلي من كل قفص. إبقاء البعوض في 26 درجة مئوية، 75٪ الرطوبة، وتحت دورة داكنة خفيفة 12 ساعة إلى 12 ساعة مع 10٪ جلوكوز الإعلانية libitum.
في 96 ساعة و 120 ساعة بعد التغذية، عد البيض بمساعدة عدسة مكبرة محمولة. الفيضانات ورقة مرشح مع الماء المقطر لجمع البيض في الصواني مليئة بالماء المقطر. تغذية اليرقات يوميا مع ما يقرب من 13 ملليغرام من الغذاء السمك المطحون في علبة.
إزالة الخادر الميت واليرقات مع ماصة بلاستيكية يوميا. عندما تتطور جميع الخوابر إلى بالغين، تحسب عدد الذكور والإناث البالغين، وتسجل تواريخ الفقس والوفاة، وتحسب معدلات الوفيات. لاختبار طول العمر، جمع 15 من الذكور البالغين و 15 أنثى بالغة من جيل F1 من كل مجموعة حمية في كوب من الورق.
إطعام البالغين مع 10٪ حل الجلوكوز الإعلانية libitum. استخدم ملاقط أو فرشاة لإزالة البالغين الموتى يوميًا. الحفاظ على البعوض في نفس درجة الحرارة والرطوبة وظروف دورة الضوء ونظام التغذية السكر.
سجل تواريخ الوفاة واحسب طول العمر. لقياس طول الجناح، تخدير بارد خمسة أيام من العمر F1 البعوض البالغ من الذكور والإناث من كل مجموعة من الوجبات الغذائية في 20 درجة مئوية لمدة 90 ثانية. تحت منظار مجسم، فهم بلطف الصدر من كل البعوض مع ملقط، ووضعها الجانب البطني.
جمع كلا الجناحين باستخدام مشرط، ووضعها على شريحة المجهر نظيفة تحتوي على قطرة المجففة من المتوسطة تصاعد لمزيد من القياس باستخدام العينة تخرج. قياس طول الجناح مع منظار مجسم باستخدام ميكرومتر. في هذه الدراسة ، تم مقارنة أداء البعوض الأنثوي المغذٍ على الوجبة الاصطناعية الغنية المصاغة والبعوض الذي يتغذى على النظام الغذائي السائل الأولي ، أو وجبة دم طازجة.
وكان عدد البعوض الإناث المُغرّى الذي يتغذى على وجبة اصطناعية غنية بنسبة 89 في المائة أعلى بكثير من عدد الإناث المُغرّعات اللواتي يغذين على الدم بنسبة 56 في المائة وكان لجيل F1 من البعوض الذي يتغذى إما على الدم أو الوجبة الاصطناعية الغنية معدلات وفيات وبقاء مماثلة. وكان التباين أعلى في البعوض الذي يتغذى على الدم بالنسبة للبعوض الذي يتغذى على الوجبة الاصطناعية الغنية. من حيث حجم الجسم البالغ ، كان بعوض الـ F1 المغذى بالوجبة الاصطناعية الغنية ضمن النطاق المتوقع ، وكان مشابهًا للبعوض الحشري الذي يتم تغذيته بالدم.
في رأيي، من المهم جدا لتجميع مغذيات بشكل صحيح مع parafilm لتجنب انها تمزق. إذا لم يكن الغشاء موصولًا جيدًا بالمغذيات الزجاجية ، فيمكنك فقدان الوجبة وربما فقدان بعض البعوض حيث يمكن تغطيتها من قبل الوجبة وتموت. نود أن إجراء اختبار جاذبية الاختيار المزدوج، على سبيل المثال باستخدام olfactometer حتى نتمكن من تقييم ما إذا كانت الإناث أكثر جذبا إلى النظام الغذائي الاصطناعي أو الدم.
أيضا، نحن الآن التجمّع الحمية الاصطناعية ودراسة استقراره بين درجات الحرارة المختلفة لفترة طويلة. بالإضافة إلى التحسينات الواضحة على الاستقرار والتخزين التي كنا نعمل عليها ، يجب التحقيق في استخدام النظام الغذائي على المدى الطويل على اللياقة البدنية للبعوض وعلم وظائف الأعضاء. وأعتقد أن إنتاج anopheles دون الدم سوف تسهل البحوث ناقلات هائلة وتنفيذ أدوات المكافحة التي تعتمد على عدد كبير من البعوض.
