Sıtma parazitleri gibi sivrisinekler tarafından karşılanan hastalığın yayılmasında önemli rol oynamaktadır. Şimdiye kadar, sıtma sivrisineklerini kansız yetiştirmek imkansızdı. Ve bu sınırlamayı aşmak için, protokolümüz, insectory sivrisinek üreme destek mümkün bir kan yerine diyet açıklar.
Kansız diyet kullanımı kan üzerinde son derece avantajlıdır. Kansız bir diyet insan kanı, ya da deneysel hayvanların kullanımı gibi etik kısıtlamalar yok. Deneyde hayvanların değiştirilmesi üç R politikamızın bir parçasıdır.
Değiştirin, küçültün, rafine edin. Kan kullanılmaması maliyetleri ve kırmızı kanın toplanması, depolanması ve bakımıyla ilişkili lojistiği azaltır. Yapay diyetler kullanımı anti plazmodium moleküllerinin test kolaylaştırabilir.
Şimdiye kadar, farklı anopheles türleri kullanarak bizim diyetler test ettik. Hepsinde, diyet iyi dişiler tarafından tıkanmış ve yumurta üretimi ve döşeme izin verildi. Bu diyetin diğer sivrisinek türlerinin yetiştirilmesinde potansiyel bir kullanıma sahip olduğuna inanıyoruz.
Aslında, şimdi aedes, dang humması, zika virüsü veya sarı humma gibi birçok hastalığın bir vektör için test ediyoruz. 26 derece santigrat, % 75 nem ve 12 saat 12 saat açık karanlık döngüsü altında bir odada anopheles coluzzii yaonde zorlanma sivrisinek koruyun. Çiftliği garanti etmek için tek bir kafeste standart insectory koşulları kullanarak ev sivrisinekler.
Küçük bir su kabıiçine sivrisinek pupa toplamak için plastik bir pipet kullanın. Yetişkin sivrisinek ler ortaya ve çiftleşmek için bir sivrisinek kafes içinde konteyner yerleştirin. Kafeste %10 glikoz besleme çözeltisi sağlayın.
Ortaya çıktıktan üç gün sonra, bir kağıt bardak içine stok kafesten kadın gerekli sayıda toplamak için bir aspiratör kullanın. Ayırt etmek için, dişiler daha büyük ve erkekler daha geniş ve tüylü hortum var. Beslenme yollarından bir gün önce%10 glikoz besleme çözeltisini çıkarın.
Ertesi gün, el yazmasına göre laminar akış dolabında steril koşullar altında yapay sıvı diyetler hazırlayın. Plastik bir tüp için tüm malzemeyi ekleyin. Tüm malzemeleri iyice karıştırın ve 0,45 mikron mikrofiltre kullanarak filtre uygulayın.
Mililitre heparin başına bir miligram 100 mikrolitre ile 27 gauge yarım inç iğne ile donatılmış steril 1 mililitreşşüş doldurun. Sonra, intra periton rotakullanarak ketamin ve ksilazin ile altı ila sekiz haftalık CD bir kadın fareler anestezi. Farenin farklı fiziksel uyaranlara herhangi bir kas reaksiyonu ve tepkisi gösterip görüntülemeyini değerlendirin.
Kardiyak delinme yapın. Sonra bir mikro tüp içine fareden kan toplamak ve bir su banyosunda 37 santigrat derece kan korumak. Sonra, bir aspiratör kullanarak stok kafesyaklaşık 30 kadın sivrisinek toplamak.
Dişi sivrisinekleri 500 mililitrelik kağıt bardaklara aktarın ve kaçabilmeleri için ince bir sivrisinek ağı örgüsünü kapatın. Yemek içerecek şekilde cam besleyiciağız boyunca parafilm membran germek. Her fincan üstüne plastik tüpler bağlı bir cam çan yapay besleme cihazı uygulayın.
Silindirik boru ve besleyiciye sabit bir su akışı sağlayın, böylece içindeki sıcaklık yaklaşık 37,5 santigrat derecede tutulur. Bir cam besleyici içine 37 santigrat derece veya taze fare kanı önceden ısıtılmış sıvı diyet bir mililitre uygulayın. Sivrisinekleri karanlıkta 60 dakika boyunca 26 derecede besleyin.
Yapay beslenmeden sonra, soğuk 30 saniye boyunca 20 santigrat derecede sivrisinek anestezi. Sonra, bir buzdolabında Petri kabına sivrisinek yerleştirin. Tamamen tıkanmış dişi sivrisineklerin sayısını kaydedin.
30 dişi tam tıkanmış dişileri ayırın ve onları yeni bir kafese koyun. Şimdi, her kafesin altına nemlendirilmiş bir filtre kağıdı yerleştirin. 26 santigrat derece, % 75 nem ve 12 saat 12 saat açık karanlık döngüsü altında% 10 glikoz reklam libitum ile sivrisinek tutun.
96 saat ve 120 saat sonra besleme, bir el büyüteç yardımıyla yumurta saymak. Yumurtaları distile su yla dolu tepsilere toplamak için filtre kağıdını distile suyla doldurun. Tepsi başına yaklaşık 13 miligram yer balığı maması ile larvaları her gün besleyin.
Her gün plastik bir pipet ile ölü pupa ve larvaları çıkarın. Tüm pupayetişkinler haline geldi, yetişkin erkek ve kadın sayısını saymak, kuluçka ve ölüm tarihlerini kayıt ve ölüm oranlarını hesaplamak. Uzun ömürlü test etmek için, bir kağıt fincan içine her diyet grubunun F1 nesil 15 yetişkin erkek ve 15 yetişkin kadın toplamak.
Yetişkinleri %10 glikoz çözeltisi reklam libitumla besleyin. Her gün ölü yetişkinleri çıkarmak için cımbız veya fırça kullanın. Aynı sıcaklıkta sivrisinek korumak, nem, ışık döngüsü koşulları ve şeker besleme rejimi.
Ölüm tarihlerini kaydedin ve uzun ömürlü olun. Kanat uzunluğunu ölçmek için, soğuk 90 saniye boyunca 20 santigrat derece her diyet grubundan beş günlük F1 erkek ve kadın yetişkin sivrisinek anestezi. Bir stereoskop altında, yavaşça forceps ile her sivrisinek toraks kavramak ve onları ventral tarafı kadar yerleştirin.
Bir neşter kullanarak her iki kanat toplamak ve mezun bir gözlük kullanarak daha fazla ölçüm için montaj ortamı kurutulmuş bir damla içeren temiz bir mikroskop slayt üzerine yerleştirin. Bir mikrometre kullanarak bir stereoskop ile kanat uzunluğunu ölçün. Bu çalışmada, formüle edilmiş zengin yapay yemek ve sivrisinekler ilk sıvı diyet, ya da taze kan yemek beslenen beslenen kadın anopheles sivrisinek performansı karşılaştırıldı.
%89'da zengin yapay yemekle beslenen tıkanmış dişi sivrisinek lerin sayısı%56'da kanla beslenen tıkanmış dişi sivrisinek lerin sayısından önemli ölçüde daha yüksekti Kanla beslenen F1 kuşağı nın ya kanla ya da zengin yapay yemekten beslenen sivrisineklerin sayısı benzer ölüm oranı ve sağkalım oranlarına sahipti. Zengin yapay yemekile beslenen sivrisineklere göre kanla beslenen sivrisineklerde değişkenlik daha yüksekti. Yetişkin vücut büyüklüğü açısından, Zengin yapay yemek ile beslenen F1 anopheles sivrisinekler beklenen aralığında oldu ve kan insectory sivrisinek beslenen benzerdi.
Bence, bu kopma önlemek için parafilm ile düzgün besleyiciler monte etmek çok önemlidir. Membran iyi cam besleyici bağlı değilse, yemek kaybedebilir ve muhtemelen bazı sivrisinek ler yemek ile kaplı olabilir ve ölmek gibi kaybedebilirsiniz. Çift seçenekli bir çekim tahlili yapmak istiyoruz, örneğin bir olfactometre kullanarak, böylece kadınlarımızın yapay diyete mi yoksa kana mı daha fazla ilgi duyduğunu değerlendirebiliriz.
Ayrıca, şimdi yapay diyet lyophilizing ve uzun bir süre farklı sıcaklıklar arasında istikrar çalışma vardır. Üzerinde çalıştığımız istikrar ve depolama için bariz gelişmelerin yanı sıra, sivrisinek fitness ve fizyolojisi üzerinde diyet uzun vadeli kullanımı araştırılmalıdır. Anopheles'i kansız üretmek, çok sayıda sivrisinek olan kontrol araçlarının son derece vektör araştırmasını ve uygulanmasını kolaylaştıracağına inanıyorum.
