질병의 퍼짐에 중요한 역할을 하는 모기에 의해 만나는 것과 같은 말라리아 기생충. 지금까지, 혈액 없이 말라리아 모기를 양육하는 것은 불가능했습니다. 그리고 이 한계를 극복하기 위하여는, 우리의 프로토콜은 부속품에 있는 모기 사육을 지원할 수 있는 혈액 대체 규정식을 기술합니다.
혈액이 없는 식단의 사용은 혈액보다 매우 유리합니다. 혈액이 없는 식단은 인간의 혈액 또는 실험 동물의 사용으로 윤리적 제약이 없습니다. 실험에 동물을 교체하는 것은 우리의 세 가지 R 정책의 일부입니다.
교체, 감소, 정제. 혈액을 사용하지 않는 것은 비용을 절감하고 적혈구의 수집, 보관 및 유지 보수와 관련된 물류를 줄입니다. 인공 식단의 사용은 항 플라스모듐 분자의 테스트를 용이하게 할 수 있습니다.
지금까지, 우리는 다른 폐경 종을 사용하여 우리의 규정식을 시험했습니다. 그들 모두에서, 규정식은 잘 여성에 의해 유혹하고 계란 생산 및 누워를 허용했습니다. 우리는 이 규정식이 그밖 모기 종의 양육을 위한 잠재적인 사용이 있다고 믿습니다.
실제로, 우리는 지금 뎅기열, Zika 바이러스, 또는 황열병과 같은 많은 질병의 벡터인 aedes를 위해 그것을 시험하고 있습니다. 섭씨 26도, 습도 75%, 12시간에서 12시간 에서 12시간 정도의 가벼운 어두운 주기 아래에서 요안 콜루지 야오데 균주 모기를 실내에 보관하십시오. 결합을 보장하기 위해 단일 케이지에서 표준 구역 조건을 사용하여 모기를 집.
플라스틱 파이펫을 사용하여 작은 물 용기에 모기 새끼를 수집합니다. 성인용 모기가 나타나서 짝짓기를 하기 위해 용기를 모기 케이지 안에 놓습니다. 케이지에 10%의 포도당 공급 용액을 제공합니다.
출현 후 3 일, 지독기를 사용하여 종이 컵에 스톡 케이지에서 필요한 여성의 수를 수집합니다. 구별하기 위해, 여성은 더 크고 남성은 넓고 깃털 proboscis가 있습니다. 먹이 길 의 하루 전에, 제거 10% 포도당 공급 솔루션.
다음 날, 원고에 따라 라미나르 흐름 캐비닛의 멸균 조건하에서 인공 액체 식단을 준비합니다. 모든 재료를 플라스틱 튜브에 추가합니다. 모든 성분을 완전히 섞고 0.45 미크론 마이크로 필터를 사용하여 필터링하십시오.
밀리리터 헤파린 당 1밀리그램의 1밀리리터100 마이크로리터가 장착된 멸균 1 밀리리터 주사기를 채우습니다. 이어서, 각성 복막 경로를 사용하여 케타민과 자일라진을 가진 6~8주 된 CD 1명의 암컷 마우스를 마취한다. 마우스가 다른 물리적 자극에 대한 근육 반응과 반응을 표시하는지 평가합니다.
심장 구멍을 수행합니다. 그런 다음 마우스에서 마이크로 튜브로 혈액을 수집하고 수조에서 섭씨 37도에서 혈액을 유지합니다. 다음으로, 흡구를 사용하여 스톡 케이지에서 약 30마리의 암컷 모기를 수집합니다.
암컷 모기를 500 밀리리터 종이 컵으로 옮기고 미세한 모기장 메쉬로 덮어 탈출할 수 없습니다. 식사를 포함 하기 위해 유리 피더의 입에 걸쳐 파라 필름 멤브레인스트레칭. 각 컵의 상단에 플라스틱 튜브에 연결된 유리 종 인공 공급 장치를 적용합니다.
원통형 튜브 및 피더에 일정한 물 흐름을 제공하여 내 온도를 섭씨 37.5도 에 유지합니다. 섭씨 37도또는 신선한 마우스 혈액에서 예열된 액체 식단 1밀리리터를 유리 피더에 넣습니다. 26섭씨에서 어둠 속에서 60분 동안 모기를 먹이세요.
인공 먹이 후, 감기는 30 초 동안 섭씨 20도에서 모기를 마취시합니다. 그런 다음, 냉장 페트리 접시에 모기를 배치합니다. 완전히 유혹 된 여성 모기의 수를 기록합니다.
30 명의 완전히 입회한 암컷을 분리하고 새로운 케이지에 넣습니다. 이제 각 케이지 의 하단에 가습 필터 용지를 놓습니다. 모기를 섭씨 26도, 습도 75%, 10%의 포도당 광고 리비툼으로 12시간에서 12시간 에서 12시간 정도의 가벼운 암흑 주기 이하로 유지하십시오.
96 시간 및 120 시간 후 먹이에서, 휴대용 돋보기의 도움으로 계란을 계산합니다. 필터 용지에 증류수로 홍수를 통해 계란을 증류수로 가득 찬 트레이에 넣습니다. 트레이 당 약 13 밀리그램의 생선 음식으로 매일 유충을 먹이.
매일 플라스틱 파이펫으로 죽은 강아지와 애벌레를 제거합니다. 모든 강아지가 성인으로 발전했을 때, 성인 남성과 여성의 수를 계산, 부화와 죽음의 날짜를 등록, 사망률을 계산. 장수를 테스트하려면 각 다이어트 그룹의 F1 세대에서 성인 남성 15 명과 성인 여성 15 명을 종이 컵으로 수집하십시오.
10%의 포도당 용액 광고 로 성인에게 먹이를 주시면 됩니다. 핀셋이나 브러쉬를 사용하여 매일 죽은 성인을 제거하십시오. 동일한 온도, 습도, 가벼운 주기 조건 및 설탕 공급 정권에서 모기를 유지합니다.
사망 날짜를 등록하고 장수를 계산합니다. 날개 길이를 측정하기 위해, 감기는 90 초 동안 20섭씨20도에서 각 규정식 단에서 5 일 오래된 F1 남성과 여성 성인 모기를 마취합니다. 스테레오스코프 아래에서 각 모기의 흉부에 집게를 부드럽게 잡고 복부 쪽을 위로 놓습니다.
메스를 사용하여 두 날개를 수집하고, 졸업 한 접피스를 사용하여 추가 측정을위해 장착 매체의 말린 방울을 포함하는 깨끗한 현미경 슬라이드에 배치합니다. 마이크로미터를 사용하여 스테레오스코프로 날개 길이를 측정합니다. 이 연구에서는, 공식화된 풍부한 인공 식사와 모기가 초기 액체 식단에 공급하거나 신선한 혈액 식사를 먹는 여성 식욕 부진 모기의 성능을 비교했습니다.
89%에서 풍부한 인공 식사로 먹인 여성 모기의 수는 56%에서 혈액에 공급된 여성의 수보다 현저히 높았으며, F1 세대의 모기는 혈액이나 풍부한 인공 식사에 먹이를 주었으며 사망률과 생존율이 비슷했습니다. 풍부한 인공 식사로 먹이는 모기에 비해 혈액 먹이 모기에서 가변성이 더 높았습니다. 성인 신체 크기면에서, 풍부한 인공 식사로 공급되는 F1 아나플 모기는 예상 범위 내에 있었고, 혈액 공급 부속 모기와 유사했다.
내 의견으로는, 파열을 피하기 위해 파라 필름과 함께 피더를 제대로 조립하는 것이 매우 중요합니다. 막이 유리 공급에 잘 부착되지 않은 경우, 당신은 식사를 잃고 아마 그들이 식사에 의해 덮여 죽을 수 있기 때문에 모기의 일부를 잃을 수 있습니다. 우리는 이중 선택 매력 분석, 예를 들어 olfactometer를 사용하여 우리가 실제로 우리의 여성이 인공 식단이나 혈액에 더 끌리는 경우 평가 할 수 있도록하고 싶습니다.
또한, 우리는 지금 인공 식단을 lyophilizing 하 고 오랜 시간 다른 온도 중 안정성 공부. 안정성과 저장에 명백한 개선 이외에 우리가 일 했습니다., 모기 피트 니스와 생리학에 다이어트의 장기 사용 조사 해야. 혈액없이 anopheles를 생성하는 것은 엄청난 벡터 연구와 모기의 많은 수의 의존 제어 도구의 구현을 용이하게 할 것이라고 생각합니다.
