病気の蔓延に大きな役割を果たす蚊に会うなどのマラリア原虫。これまでのところ、マラリア蚊を血液なしで飼育することは不可能でした。そして、この制限を克服するために、私たちのプロトコルは、セクター別の蚊の繁殖をサポートすることができる血液代替食を記述します。
血液を含まない食事の使用は、血液よりも非常に有利です。血液を含まない食事は、人間の血液や実験動物の使用として倫理的制約を持っていません。実験時に動物を置き換えることは、私たちの3つのRポリシーの一部です。
交換、削減、絞り込み。血液を使用しないとコストが削減され、赤血の採取、貯蔵、メンテナンスに関連する物流が減少します。人工食餌の使用は、抗プラスモジウム分子のテストを容易にすることができます。
これまで、私たちは異なるアノフェレス種を使って食事をテストしてきました。それらのすべてにおいて、食事はメスによってよく魅了され、卵の生産と産卵を可能にしました。私たちは、この食事は他の蚊の種の飼育のための潜在的な使用を持っていると信じています。
実際には、デング熱、ジカウイルス、黄熱病などの多くの病気のベクターであるaedesについてテストしています。26°C、湿度75%、12時間から12時間の明るい暗いサイクルの下で部屋にアノフェレスコルジヤオンデひずみ蚊を維持します。交配を保証するために単一のケージで標準的なセクター条件を使用して蚊を収容する。
プラスチック製のピペットを使用して、蚊の子犬を小さな水容器に集めます。蚊の中に容器を置いて、成虫の蚊が出現して交尾させます。ケージに10%グルコース供給溶液を提供する。
出現の3日後、吸引器を使用してストックケージから必要な数のメスを紙コップに集めます。区別するために、女性はより大きく、男性はより広く羽毛のプロボシスを持っています。トレイルを供給する前の1日前に、10%のグルコース供給溶液を取り除きます。
翌日、原稿によると、薄層流れキャビネットで無菌条件下で人工液体食を準備する。すべての材料をプラスチックチューブに加えます。すべての材料を十分に混合し、0.45ミクロンのマイクロフィルターを使用してフィルター。
1ミリリットルヘパリンあたり1ミリグラムの100マイクロリットルで27ゲージ半インチ針を装備した無菌1ミリリットルの注射器を充填します。次いで、6〜8週齢のCD1匹の雌マウスをケタミンとキシラジンを用いて腹腔内経路を用いて麻酔を行う。マウスが筋肉の反応と異なる物理的刺激に対する応答を表示しているかどうかを評価します。
心臓穿刺を行います。その後、マイクロチューブにマウスから血液を収集し、水浴中に摂氏37度で血液を維持します。次に、吸引器を使用してストックケージから約30匹のメスの蚊を採取します。
メスの蚊を500ミリリットルの紙コップに移し、細かい蚊の網で覆い、逃げないようにします。ガラスフィーダーの口を横切ってパラフィルム膜を伸ばして、食事を含みます。プラスチック管に接続されたガラスベル人工給餌装置を各カップの上部に塗布します。
円筒状のチューブとフィーダーに一定の水の流れを提供し、内部の温度は約37.5°Cに保たれます。37°Cの温め込み済み液体食を1ミリリットル、新鮮なマウスの血液をガラスフィーダーに塗布します。26°Cの暗闇の中で60分間蚊に餌を与えます。
人工授乳後、冷たい麻酔で蚊を摂氏20度で30秒間加熱します。その後、冷蔵ペトリ皿に蚊を入れます。完全にエングレージされた雌の蚊の数を記録します。
30人の完全に魅惑的な女性を分離し、新しいケージに置きます。次に、各ケージの下部に加湿したフィルターペーパーを置きます。蚊を摂氏26度、湿度75%、10%グルコースアドリビタムで12時間から12時間の明るい暗いサイクルの下に保ちます。
96時間と120時間の給餌で、ハンドヘルド虫眼鏡の助けを借りて卵を数えます。濾紙に蒸留水を入れ、蒸留水で満たされたトレイに卵を集めます。トレイあたり約13ミリグラムの挽いた魚の食べ物を毎日幼虫に食べさせます。
毎日プラスチックピペットで死んだ子犬と幼虫を取り除く。すべての子犬が成人に発展したら、成人男性と女性の数を数え、孵化と死亡の日付を登録し、死亡率を計算します。長寿をテストするには、各ダイエット群のF1世代から15人の成人男性と15人の成人女性を紙コップに集めます。
10%グルコース溶液アドリビタムを有する成人を養う。毎日死んだ大人を取り除くためにピンセットやブラシを使用してください。同じ温度、湿度、軽サイクル条件と糖供給体制で蚊を維持します。
死亡日を登録し、長寿を計算します。翼の長さを測定するために、冷たい麻酔は90秒間摂氏20度で各ダイエットグループから5日齢のF1オスとメスの成虫の蚊を麻酔します。ステレオスコープの下で、各蚊の胸郭を鉗子でそっとつかみ、腹側を上に置きます。
メスを使用して両方の翼を収集し、さらに卒業した接眼を使用して、さらに測定するために、取り付け媒体の乾燥した滴を含むきれいな顕微鏡スライド上に置きます。マイクロメーターを使用して、ステレオスコープで翼の長さを測定します。本研究では、最初の流動食で与えられた豊かな人工食事と蚊に与えられた雌のアノフェレス蚊の性能、または新鮮な血液食事を比較した。
89%で豊かな人工食事を与えられた魅惑的な雌の蚊の数は、血液または豊かな人工食事のいずれかに供給された蚊のF1世代が同等の死亡率と生存率を有していた56%で血液に供給される魅惑的な女性の数よりも有意に高かった。豊かな人工食事を与えられた蚊に比べて、血液供給蚊の変動性が高かった。成人の体の大きさに関しては、豊かな人工食事を与えられたF1アノフェレス蚊は期待される範囲内にあり、血液供給された皮内蚊に似ていた。
私の意見では、それが破裂するのを避けるためにパラフィルムでフィーダーを適切に組み立てることは非常に重要です。膜がガラスフィーダーにうまく取り付けられていない場合は、食事を失い、おそらく蚊の一部を失う可能性があります。私たちは、例えば、私たちの女性が人工食事や血液にもっと惹かれているかどうかを実際に評価できるように、例えば嗅分計を使用して、二重選択の魅力アッセイを行いたいと思います。
また、人工食を凍結乾燥させ、長い間異なる温度の間で安定性を研究しています。私たちが取り組んできました安定性と貯蔵の明らかな改善に加えて、蚊のフィットネスと生理学に対する食事の長期的な使用を調査する必要があります。血液を使わずにアノフェレスを生産することは、大量の蚊に依存する制御ツールの非常にベクター研究と実装を促進すると信じています。
