טפילי מלריה כגון נפגשו על ידי יתושים לשחק תפקיד מרכזי על התפשטות המחלה. עד כה, זה היה בלתי אפשרי לגדל יתושים מלריה ללא דם. ולהתגבר על מגבלה זו, הפרוטוקול שלנו מתאר דיאטה תחליף דם כי הוא מסוגל לתמוך הרבייה יתושים בחרקים.
השימוש בתזונה נטולת דם הוא יתרון רב על פני דם. תזונה נטולת דם אין את האילוצים האתיים כמו השימוש בדם אנושי, או בעלי חיים ניסיוניים. החלפת בעלי חיים בניסויים היא חלק ממדיניות שלושת ה-R שלנו.
החלף, הפחת, מקד. אי שימוש בדם מפחית עלויות, והלוגיסטיקה הקשורה לאיסוף, אחסון ותחזוקה של דם אדום. השימוש בדיאטות מלאכותיות יכול להקל על בדיקות של מולקולות נגד פלסמודיום.
עד עכשיו, בדקנו את הדיאטות שלנו באמצעות מינים שונים של אנופלס. בכולם, הדיאטה הייתה שקועה היטב על ידי הנקבות ואיפשרה ייצור והטלת ביצים. אנו מאמינים כי דיאטה זו יש שימוש פוטנציאלי לגידול של מיני יתושים אחרים.
למעשה, אנו בודקים אותו כעת עבור aedes, וקטור של מחלות רבות כגון קדחת דנגה, וירוס זיקה, או קדחת צהובה. שמרו על יתושים בזן אנופלס קולוצי יאנדה בחדר בטמפרטורה של 26 מעלות צלזיוס, 75% לחות ותחת מחזור חושך בהיר של 12 שעות עד 12 שעות. יתושים בבית באמצעות תנאי חרקים סטנדרטיים בכלוב אחד כדי להבטיח הזדווגות.
השתמש פיפטה פלסטיק כדי לאסוף גלמים יתושים לתוך מיכל מים קטן. מניחים את המיכל בתוך כלוב יתושים כדי לאפשר ליתושים בוגרים לצאת ולהזדווג. ספק 10% פתרון הזנת גלוקוז בכלוב.
שלושה ימים לאחר הופעתה, השתמשו בהשראה כדי לאסוף את המספר הדרוש של נקבות מכלוב המניות לתוך נייר. כדי להבחין, הנקבות גדולות יותר ולזכרים יש פרובוסיס רחב יותר ונוצה. יום אחד לפני האכלת שבילים, הסר את פתרון האכלת 10%glucose.
למחרת, להכין דיאטות נוזליות מלאכותיות בתנאים סטריליים בארון הזרימה למינאר על פי כתב היד. מוסיפים את כל החומרים לצינור פלסטיק. מערבבים את כל החומרים ביסודיות ומסננים באמצעות מיקרו-פילטר 0.45 מיקרון.
מלא מזרק סטרילי 1 מיליליטר מצויד במחט 27 מד חצי אינץ ' עם 100 microliters של מיליגרם אחד לכל הפרין מיליליטר. לאחר מכן, הרדמה שישה עד שמונה שבועות תקליטור אחד עכברים נקבה עם קטמין ו xylazine באמצעות המסלול הבין-דורי. להעריך אם העכבר מציג כל תגובת שרירים ותגובה לגירויים פיזיים שונים.
בצע את הנקב הלב. ואז לאסוף דם מהעכבר לתוך צינור מיקרו ולשמור על דם ב 37 מעלות צלזיוס באמבט מים. לאחר מכן, לאסוף כ 30 יתושים נקבה מכלוב המניות באמצעות שאפה.
מעבירים את היתושים הנשיים ל-500 כוסות נייר מיליליטר ומכסים ברשת רשת עדין של כילה נגד יתושים כדי שלא יוכלו להימלט. למתוח קרום פרפילם על פני הפה של מאכיל הזכוכית כדי להכיל את הארוחה. יש למרוח על פעמון זכוכית מנגנון הזנה מלאכותי המחובר לצינורות פלסטיק על החלק העליון של כל.
לספק זרימת מים מתמדת צינורות גליליים מאכיל כך הטמפרטורה בתוך נשמר בערך 37.5 מעלות צלזיוס. יש למרוח מיליליטר אחד של תזונה נוזלית לפני המלחמה ב-37 מעלות צלזיוס או דם עכבר טרי לתוך מאכיל זכוכית. להאכיל את היתושים במשך 60 דקות בחושך ב 26 מעלות צלזיוס.
לאחר האכלה מלאכותית, הרדמה קרה של היתושים ב-20 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות. לאחר מכן, מניחים את היתושים בצלחת פטרי בקירור. רשום את מספר היתושים הנשיים במלואם.
להפריד 30 נקבות במלואן ולשים אותם על כלוב חדש. עכשיו, מניחים נייר מסנן לח בתחתית כלוב. שמרו על היתושים בטמפרטורה של 26 מעלות צלזיוס, 75% לחות ותחת מחזור חושך בהיר של 12 שעות עד 12 שעות עם 10% גלוקוז עד ליביטום.
ב 96 שעות ו 120 שעות לאחר האכלה, לספור את הביצים בעזרת זכוכית מגדלת כף יד. להציף את נייר המסנן במים מזוקקים כדי לאסוף את הביצים למגשים מלאים במים מזוקקים. להאכיל את הזחלים מדי יום עם כ 13 מיליגרם של מזון דגים טחונים לכל מגש.
הסר גלמי מתים וזחלים עם פיפטה פלסטיק מדי יום. כאשר כל הגלמים התפתחו למבוגרים, לספור את מספר הזכרים והנקבות הבוגרים, לרשום את תאריכי הבקיעה והמוות, ולחשב את שיעורי התמותה. כדי לבדוק אריכות ימים, לאסוף 15 זכרים בוגרים ו 15 נקבות בוגרות מדור F1 של כל קבוצת דיאטה לתוך נייר.
להאכיל מבוגרים עם 10% גלוקוז פתרון עד ליביום. השתמש פינצטה או מברשת כדי להסיר את המבוגרים המתים מדי יום. לשמור על היתושים באותה טמפרטורה, לחות, תנאי מחזור אור משטר האכלת סוכר.
רשום את תאריכי המוות וחשב את תוחלת החיים. כדי למדוד את אורך הכנף, הרדמה קרה בת חמישה ימים F1 זכר ונקבה יתושים בוגרים מכל קבוצת דיאטה ב 20 מעלות צלזיוס במשך 90 שניות. תחת סטריאוסקופ, תופסים בעדינות את בית החזה של כל יתוש במדפים, ומ מניחים אותם בצד הגחוני למעלה.
לאסוף את שתי הכנפיים באמצעות אזמל, ולה מניחים אותם על מגלשת מיקרוסקופ נקי המכיל טיפה מיובשת של מדיום הרכבה למדידה נוספת באמצעות עינית מדורגת. למדוד את אורך הכנף עם סטריאוסקופ באמצעות מיקרומטר. במחקר זה, הביצועים של יתושים אנופלס נקבה ניזונים ארוחה מלאכותית עשירה מנוסח יתושים ניזונים דיאטה נוזלית הראשונית, או ארוחת דם טרי הושווה.
מספר היתושים הנשיים המוזנים מארוחה מלאכותית עשירה בשיעור של 89% היה גבוה משמעותית ממספר הנקבות הסגורות שניזונו מדם בשיעור של 56% מדור היתושים F1 שניזון מהדם או מהארוחה המלאכותית העשירה בשיעורי תמותה והישרדות דומים. השונות הייתה גבוהה יותר בדם שניזון מיתושים ביחס ליתושים שניזונו מהארוחה המלאכותית העשירה. במונחים של גודל גוף מבוגר, יתושים אנופלס F1 ניזון ארוחה מלאכותית עשירה היה בטווח הצפוי, והיה דומה יתושים חרקים האכילו בדם.
לדעתי, חשוב מאוד להרכיב את המאכילים כראוי עם הפרפילם כדי למנוע את הקרע. אם הממברנה אינה מחוברת היטב למאכיל הזכוכית, אתה יכול לאבד את הארוחה וכנראה לאבד חלק מהיתושים כפי שהם יכולים להיות מכוסים על ידי הארוחה ולמות. ברצוננו לבצע בדיקה כפולה של משיכה, למשל באמצעות מד אולדקאט כדי שנוכל להעריך אם הנקבות שלנו נמשכות יותר לתואטה המלאכותית או לדם.
כמו כן, אנו עכשיו lyophilizing הדיאטה המלאכותית ולומדים את היציבות שלה בין טמפרטורות שונות זמן רב. מלבד השיפורים הברורים ביציבות ובאחסון שאנחנו עובדים עליו, יש לחקור את השימוש ארוך הטווח בתזונה על כושר ופיזיולוגיה של יתושים. אני מאמין כי ייצור anopheles ללא דם יקל מאוד מחקר וקטורי ויישום של כלי בקרה התלויים במספר רב של יתושים.
