باستخدام مقايسة البقعة الخفيفة ، يمكن تتبع سلوك اليرقات قبل وأثناء وبعد دخول منطقة الضوء مما يسمح بتحليل تفاصيل حركة اليرقات. هذا الفحص بسيط وسهل الأداء. يتم اختبار استجابة الضوء مرة واحدة فقط ، بحيث يمكن استبعاد أي تأثير محتمل للتكيف الخفيف.
لإعداد لوحات أجار، ببطء وبشكل متكافئ تغطية الجزء السفلي من طبق بيتري 15 سنتيمترا مع طبقة سمكها حوالي أربعة ملليمترات من الساخن 1٪ أجار. السماح للطبق لتبرد في درجة حرارة الغرفة حتى agar قد توطدت. لإعداد نظام التحفيز البصري، قم بقص مصدر ضوء LED معد على إطار حديدي، مع الحرص على أن الضوء يُسقط نحو سطح المكتب.
إمالة الاسطوانة قليلا حتى الزاوية بين الطائرة اسطوانة والطائرة العمودية حوالي 10 درجة. قم بتوصيل ضوء LED الأزرق 470 نانومتر إلى المكونات LED واحد من محرك التشغيل LED عالية الطاقة وتشغيل السائق. بدوره مقبض الباب في الزاوية اليمنى العليا من برنامج التشغيل لتحديد قناة 470 نانومتر وانقر على الصمام.
عندما تعرض الشاشة فحصًا، ستظهر بقعة زرقاء على سطح المكتب. انقر فوق موافق وتحويل مقبض الباب لضبط شدة الضوء. نقل موقف مصدر الضوء صعودا وهبوطا لضبط قطر بقعة الضوء إلى سنتيمترين.
تدوير مقبض الباب لتحديد شدة الضوء وفقا لمتطلبات التجريبية. استخدم وحدة تحكم مقياس طاقة مدمجة مع مستشعر طاقة الصمام الثنائي الضوئي القياسي لقياس أقصى حد من الطاقة الضوئية والحد الأدنى في البقعة. قوة الضوء تحتاج إلى قياس في الظلام في التجربة الفعلية.
ثم سجل قوة الضوء، وقياس ثلاث مرات واستخدام متوسط القيمة. لإعداد نظام التخيل، المشبك كاميرا ويب عالية الدقة مع مقطع حديدي حوالي 10 سم فوق بقعة الضوء على سطح المكتب وضبط اتجاه عدسة الكاميرا نحو سطح المكتب. قم بتوصيل الكاميرا بجهاز كمبيوتر يعمل بنظام التشغيل Windows 7 من خلال واجهة USB ووضع لوحة agar على سطح المكتب مباشرة أسفل الكاميرا.
فتح برنامج AMCap 9.22، سيتم تلقائياً عرض بقعة الضوء في إطار AMCap. حرك الكاميرا قليلاً إلى اليسار أو اليمين للتأكد من أن بقعة الضوء بالقرب من وسط النافذة. استخدم مقطعًا لإصلاح 850 زائدًا أو ناقصًا ثلاثة فلتر ة شريطية نانومتر في خمسة إلى سبعة ملليمترات أسفل الكاميرا مباشرةً.
ضع ثلاثة ضوء الأشعة تحت الحمراء توليد المصابيح مع الطول الموجي المركزي من 850 نانومتر بالتساوي حول لوحة أجار حوالي خمسة سنتيمترات بعيدا عن حافة لوحة ومع عدسات LED في زاوية 70 درجة تواجه نحو لوحة. ثم قم بتوصيل المصابيح بمصدر طاقة من خلال محولات AC إلى DC. في قائمة برنامج AMCap، حدد الخيارات وجهاز الفيديو وتنسيق الالتقاط وقم بتعيين حجم البيكسل للفيديو الملتقط إلى 800 في 600 ومعدل الإطارات إلى 60 إطارًا في الثانية.
قم بإزالة عامل التصفية ووضع مسطرة تحت الكاميرا. ضبط تركيز الكاميرا حتى يصبح خط المقياس واضحًا ومتوازيًا مع عرض حقل الفيديو للعرض وانقر على التقاط وإعداد والتقاط الفيديو لتحديد مسار الحفظ. ثم انقر فوق بدء التسجيل لتسجيل المسافة الفعلية المقابلة لل 600 بكسل وحساب نسبة كل بكسل إلى المسافة الفعلية.
قبل إدخال اليرقة إلى إعداد التصوير ، احصل على فيديو قصير لوضع الضوء وتسمية منطقة ضوء الفيديو الخلفية غير المصفاة. ضع المرشح مرة أخرى على عدسة الكاميرا واشعل ضوءًا بعيدًا عن الجهاز التجريبي عند أقل مستوى ممكن مع السماح بملاحظة اليرقات بوضوح. استخدم ملعقة لإزالة بعض اليرقات من وسط الثقافة وحدد بلطف يرقة ثالثة.
اغسل اليرقة في الماء المقطر ووضع اليرقة في وسط صفيحة أجار. إزالة بلطف أي الماء الزائد من اليرقة وإيقاف ضوء الغرفة. السماح لليرقة بالتأقلم لمدة دقيقتين في البيئة المظلمة قبل تشغيل ضوء LED بالأشعة تحت الحمراء.
يجب إجراء تجربة سلوك تجنب الضوء التالية في الظلام. لراحة مظاهرة صورنا في الضوء الساطع. فرشاة بلطف يرقة إلى مركز لوحة.
عندما تبدأ اليرقة في الزحف مباشرة ، قم بتدوير اللوحة لجعل رأس اليرقة نحو بقعة الضوء. انقر فوق التقاط وإعداد والتقاط الفيديو لتحديد مسار الحفظ وانقر فوق بدء التسجيل للتسجيل. اسمح لليرقة بالزحف نحو نقطة الضوء وإدخالها وتركها حتى تصبح خارج مجال الرؤية تقريبًا، وانقر على إيقاف التسجيل.
حرك الفلتر بعيدًا عن الكاميرا واستحوذ على فيديو قصير عن موضع البقعة الضوئية. ثم اسم آخر فحص منطقة ضوء الفيديو غير المصفاة اثنين وقارن هذا الفيديو مع ضوء منطقة فيديو واحد لضمان عدم تغيير موضع بقعة الضوء. هنا ، يمكن ملاحظة منحنيات الوقت لسرعة الذيل ، زاوية الانحناء الجسم وسرعة الزاوي للجسم من اليرقة التمثيلية.
حجم يلقي رئيس اليرقات، وبالتالي، يتم تقليل زاوية الانحناء الجسم القصوى بشكل كبير في اليرقات الثالثة مع الخلايا العصبية الأخطبوطية التي تمنعها التعبير السام الكزاز مقارنة مع الضوابط الأبوية تشير إلى أن الخلايا العصبية Tdc2-Gal4 ضرورية للاستجابة العادية للضوء اليرقات. لمعالجة الصور بنجاح، تأكد من أن الكاميرا لا تمنع الضوء وأن بقعة الضوء مستديرة وقريبة من وسط النافذة. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء علم الوراثة البصرية لمراقبة كيفية تفاعل اليرقات عند تنشيط خلايا عصبية محددة.
باستخدام هذا الفحص ، يمكن تحليل تفاصيل حركة اليرقات مما يسمح بدراسة التأثير البعيد للعوامل البيئية والداخلية على سلوك تجنب الضوء اليرقات.
