البعوض midgut الموانئ مجتمع معقد من الميكروبات التي تؤثر على التمثيل الغذائي المضيف، والتكاثر، واللياقة البدنية، وكفاءة الطبيب البيطري. مع كل ميكروب الأمعاء هو تأثير مختلف. يقدم هذا الفيديو الإجراء لدراسة الدور الخاص بكل سلالة بكتيريا أو علم وظائف الأعضاء المضيف.
للحصول على ثقافة من المستعمرات البكتيرية الأمعاء، تشريح البعوض منتصف تحت حالة معقمة. الأرض تشريح منتصف، serotologinate، وتنتشر على لوحة أجار. اختيار مستعمرات واحدة من لوحة، وتحديد الأنواع البكتيريا عن طريق تسلسل الجينات SRNA 16 بهم.
تغذية البعوض مع النقش COD التي تحتوي على المضادات الحيوية لمدة ثلاثة أيام متتالية لإزالة ميكروبيوتا الأمعاء. يمكن تأكيد فعالية العلاج بالمضادات الحيوية عن طريق تشريح منتصف البعوض المتعفن لمعلاج وحدة تشكيل المستعمرة قبل المتطرفين اللاحقين. ثم إعادة إدخال أنواع بكتيريا محددة كانت معزولة سابقًا عن الأمعاء البعوضية عن طريق فحص التغذية الفموية.
ويمكن تقييم تأثير البكتيريا على فسيولوجيا المضيف من خلال مقارنة البعوض غير المعالج، والبعوض المعالج بالمضادات الحيوية، والبعوض إعادة إدخال ضبط النفس محددة. تشريح منتصف و البكتيريا القابلة للزراعة العزلة. في البداية ، جمع البعوض في قفص مع pirator وخلية البعوض في مربع جمع.
تخدير البعوض عن طريق تعريضه لدرجة حرارة 4 درجة لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. الحفاظ على البعوض تخدير عن طريق وضعها في طبق بيتري الجليد الباردة. تطهير مقاعد البدلاء، تشريح المجهر، والملاط عن طريق رش 75٪ الإيثانول لتجنب التلوث بالبكتيريا من البيئة.
سطح تعقيم البعوض عن طريق تسجيل وتهز لهم في 75٪ الإيثانول لمدة ثلاث دقائق وشطف مرتين مع المخزن المؤقت PBS. تقسيم البعوض بشكل منفصل على شريحة زجاجية معقمة تحتوي على قطرة من برنامج تلفزيوني. إزالة بعناية الساقين والأجنحة ورأس البعوض باستخدام ملقط.
المشبك الصدر البعوضة والقسم الأخير من البطن كان ملقط وسحب بعيدا لعزل الجهاز الهضمي. استخدام ملقط لإزالة المحاصيل وأنبوب malpighian من الجهاز الهضمي. يتم وضع المحصول في الجزء الخلفي من منتصف الوطيس والانتفاخات بعد تناول ماء السكر.
أنابيب Malpighian هي مجموعة من أنابيب مطرح مرهف على تقاطع منتصف و hindgut. وضع ماكياج تشريح في أنبوب EP مع 200 microliters معقم PBS العازلة وطحنه مع القس طحن العقيمة في مقاعد البدلاء نظيفة. الحبوب لتحميل متجانسة إلى ثلاثة أوهام الإيقاع في 50 ميكرولترات من كل وهم إلى لوحة LB أجار وطبقة يائسة.
احتضان لوحة ك 37 درجة لمدة يوم واحد إلى يومين حتى المستعمرات واحدة قابلة للتنفيذ. اختيار مستعمرات واحدة في 150 ملليلتر قارورة مخروطية تحتوي على 50 ملليلتر رطل حمالات الصدر المتوسطة. يهز البكتيريا في 37 درجة بين عشية وضحاها.
تحديد الأنواع. استخراج توتو الحمض النووي بواسطة طقم بناء الحمض النووي الجينومي البكتيري وتضخيم 16 SRDNA من قبل PCR. استعادة وتنقية شظايا الحمض النووي من منتجات PCR بواسطة Ambrose هلام electrophoresis ومجموعة الانتعاش قاد.
إجراء تسلسل الحمض النووي على شظايا الحمض النووي المنقى ليكون تسلسل سلسلة البكتيريا التي تم تحقيقها. تشغيل البحث عن الانفجار إلى استعلام تسلسل الجينات SRNA 16 من تحديد البكتيريا ضد البكتيريا وararaea وقاعدة البيانات. تم تعريف مستوى الأنواع على أنه أكبر من أو يساوي 99٪ 16 تشابه تسلسل SRDNA إلى أقرب دخول البنك الفريق.
تم تعيين العزلة إلى المقابلة، جنس عندما هو تسلسل 16 SRDNA، وكان التشابه أقل من 99٪، وأكبر من أو يساوي 95٪ العلاج بالمضادات الحيوية والبكتيريا إعادة إدخال. تزن الكمية المطلوبة من سكروز البنسلين وstreptomycin لإعداد لنا 10٪ محلول السكروز، بما في ذلك محاولة 20 وحدة من البنسلين و 20 ميكروغرام من ستريبتوميسين لكل ملليلتر. التسلل إلى كرات القطن في محلول السكروز الذي يحتوي على المضادات الحيوية ووضعها على الجزء العلوي من كوب الورق التي تحتوي على البعوض.
تغطية الكرة القطنية مع طبق بيتري 10 سنتيمترا لمنع الواجهة البحرية من التبخر. استبدال كرات القطن مرتين في اليوم وتغذية البعوضة لمدة ثلاثة أيام متتالية. البعوض ينقسم إلى مجموعتين.
وضعت المجموعة الأولى في كوب البعوض دون أي علاج، أي كرات القطن الطبيب مع 10٪ لذلك عبر أعطيت يوميا. وعولج الفريق الثاني بالمضادات الحيوية وجرى تقديمها لمدة ثلاثة أيام. في كل مجموعة، تم تشريح البعوض سيرجي.
تم استخراج ميكا لاستخراج الحمض النووي الكلي وتم تنفيذ QPCR باستخدام التمهيديات البكتيريا العالمية، ويظهر الشكل الأول التعبير عن 16 SRNA في مجموعة التحكم ومجموعة العلاج بالمضادات الحيوية. تظهر النتائج أن تكلفة أو تحقيق البنسلين وstreptomycin كانت ناجحة. إعداد حل بكتيرية، وتدابير حل البكتيريا في الفيروس مع مطياف، إضافة تعليق واحد البكتيريا OT في أنبوب EP.
الطرد المركزي تعليق في 5، 000 RCA لمدة خمس دقائق في أربع درجات تجاهل supernatant، وغسل البليت البكتيريا يحاول مع عازلة برنامج تلفزيوني عقيمة. إعادة تعليق البليت البكتيرية مع 200 microliters معقمة PBS العازلة إضافة 600 ميكرولتر، 10٪ محلول السكروز، 200 مصغرة ATP و 200 تعليق الجرثومي microliter في أنبوب جديد AP ومزيج جيد. بدلا من ذلك، يمكن إعادة تعليق البكتيريا في الحرارة في تنشيط الدم.
إعداد تسخين الدم المنشط. تجلط الدم الطازج مع أنبوب مضاد التخثر، واتخاذ 2-3 ملليلتر من الدم الطازج. في أجهزة الطرد المركزي 1000 لمدة 10 دقائق في أربع درجات لفصل البلازما وخلايا الدم.
جمع البلازما في أنبوب EP جديد وتفعيل هنا تفعيلها في 56 درجة لمدة ساعة واحدة. غسل انفجار المنزل من خلال الأوقات الخاصة بك مع المخزن المؤقت برنامج تلفزيوني عقيمة. شطف منزل الانفجار المعلقة مع التدفئة تنشيط البلازما.
تجميع الغشاء ونظام التغذية. سحب مرض الفيلم إلى أقصى حد. إصلاح مع حلقة بلاستيكية وparfilm مكان العمل لتجنب تسرب ببطء إضافة حل البكتيرية المعدة لوحدة التغذية، إلى أقصى محفظة.
لتجنب فقاعة سقطت من اتجاه واحد وختم وحدة التغذية. قم بتوصيل مصدر الطاقة. انتظر حتى تصل درجة الحرارة إلى 37 درجة تثبيت وحدة التغذية مع حل البكتيريا على وحدة التغذية.
قبل تغذية البعوض البكتيريا يجب وقف لمدة 24 ساعة لاستقلاب المضادات الحيوية. لوحدة التغذية على كوب الورق مع البعوض، ثم السماح التغذية لمدة 90 دقيقة. ويمكن انتقاء البعوض الذي تم تشجيعه بالكامل لإجراء المزيد من الدراسات.
نتائج تمثيلية. الرقم الثاني يبين لنا متوسط الأوسمة لكل بعوضة. بعد مؤامرة تغذية المضادات الحيوية معالجة البعوض نرى السحايا.
ويبين الشكل الثالث التعبير عن الجينات ذات الصلة التطور المتغير 24 ساعة بعد وجبة الدم التي تحتوي على السحايا C. تظهر النتائج أنه لا يوجد أي تغيير كبير في إنتاج البيض للمجموعة المراقبة والمجموعة الباهتة. شكرا لاهتمامك بالبكتيريا أو مقال التغذية مع البعوض المعالجة بالمضادات الحيوية.
