Bu protokol, kanser metastaz alanında önemli bir soruyu cevaplamasına izin veriyor. Tümör hücrelerinin akciğeri nasıl kolonileştirdiği de dahil mi? Tümör hücreleri nasıl hareketsiz kalır?
Ve onları uyuşukluluştan çıkmaya ve sonunda metastaz yapmaya teşvik eden şey. Bu protokolün temel avantajı, dinamik metastatik sürecin doğrudan in vivo, gerçek zamanlı olarak, gerçek bir mikroçevrim içinde çalışılabilmesidir. Bu yöntem birkaç akciğer hastalığı hakkında fikir verebilir, ancak özellikle metastazın yaygın bir bölgesi olan akciğere yayılan bireysel tümör hücrelerinin davranışını anlamak için yararlıdır.
Başlamak için 22 kalibrelik bir kateterin tabanına bir düğüm bağlamak için 2-0 ipek dikiş kullanın ve 2 inç uzunluğunda kuyruklar bırakın. Fare tamamen uyuşturulduktan sonra, fareyi işlem masasına taşıyın, fareyi entübe edin ve ardından 2-0 ipek dikişi farenin snout'unun etrafına bağlayarak entübasyon kateterini sabitleyin. Ventilatörü entübasyon kateterine bağlayın.
Kağıt bant kullanarak, ön kranially ve arka uzuvları ısıtılmış cerrahi aşamaya kaudally sabitleyin. Cerrahi alana maruz kalmayı en üst düzeye çıkarmak için farenin sırtı boyunca bir kağıt bant yerleştirin. Deriyi forsepsle kaldırın ve yaklaşık 7 mm solda sternuma ve yaklaşık 7 mm'de altkostal kenardan yaklaşık 7 mm daha üstün yaklaşık 10 mm dairesel kesi yapın.
Kaburgaların üzerine gelen yumuşak dokuyu aşın. Altıncı ve yedinci kaburgayı esipler kullanarak yükseltin. İntratorasik alana girmek için altıncı ve yedinci kaburgalar arasındaki interkostal kası dikkatlice delmek için akciğere doğru yuvarlatılmış tarafı olan künt mikro diseksiyon makasının tek bir bıçağını kullanın.
Akciğeri çökertmek ve akciğeri göğüs duvarından ayırmak için komprese hava bidonlarını kusurda hassas bir şekilde boşalttı. İyatrojenik akciğer yaralanmasını önlemek için basınçlı havayı kısa aralıklarla ateşleyin. Biyopsi delme aracını kesici aletin üzerine yerleştirin ve kesici aletin tabanını interkostal kesiden dikkatlice manevra yaparak yerleştirin.
Kesici takım tabanını göğüs duvarına paralel olarak yönlendirin ve göğüs kafesine 5 mm dairesel bir delik açın. 5-O ipek dikiş kullanarak, delikten yaklaşık 1 mm uzaklıktaki bir çanta ip dikişini çevreye yerleştirin. Ardından, pencere çerçevesini, pencere oluğu içinde yakalanan dairesel kusurun kenarlarıyla göğüs duvarına yerleştirin.
5-O ipek dikişi sıkıca bağlayarak implante edilen pencereyi güvenli bir şekilde kilitleyin. Akciğeri kurutmak için yaklaşık 10 ila 20 saniye boyunca sabit ve yumuşak bir basınçlı hava akışı uygulayın. Pencere çerçevesini dış kenarından kavramak için ön ayaklarını kullanın ve akciğerin pencere çerçevesinin yüzey altı yüzeyinden ayrılmasını sağlamak için hafifçe kaldırın.
Optik pencere çerçevesinin yüzey altı boyunca ince bir siyanoakrilat yapıştırıcı tabakası dağıtın. Optik pencere çerçevesini bağlanmak için 10 ila 20 saniye boyunca akciğer dokusuna hafifçe ama sıkıca bastırın. Dikdörtgen bir kapak fişine 5 mm'lik bir yapışkan damlası dağıtın.
5 mm'lik bir kapak fişi almak için vakum toplama aracını kullanın. Kapak fişinin yüzey altı kısmını yapıştırıcıya batırın ve daha sonra kapak kayması üzerinde çok ince bir yapıştırıcı tabakası yapmak için dikdörtgen kapak kaymasının yanına üç kez fazla yapıştırıcıyı kazıyın. Kapak kaymasını, optik pencere çerçevesinin ortasında, akciğer dokusunun hemen üstünde, girinti içinde bir açıyla dikkatlice konumlandırın.
Pozitif basınç oluşturmak için ventilatörü kısaca kenetleyin, akciğeri hiper şişirin. Kapak kaymasını akciğer dokusuna paralel olarak yönlendirin, akciğer yüzeyi ile kapak kaymasının yüzey altı arasında doğrudan biriktirme oluşturmak için dönen hareketi kullanarak. Siyanoakrilat yapıştırıcısını ayarlamak için yaklaşık 25 saniye boyunca hafif basıncı koruyun.
Kapak fişini vakum toplama aracından kanatlarla ayırın. 5-O ipek dikiş kullanarak cilt kesisinin kesme kenarından 1 mm'den daha az, çevresel olarak bir çanta dize dikişi oluşturun. Pencereyi kilitleme düğümleriyle sıkıca bağlamadan önce fazla derileri pencere çerçevesinin dış kenarının altına sıkıştırın.
Kapak fişi ve pencere çerçevesi arasında hava geçirmez bir sızdırmazlık sağlamak için metal cam arayüzünde az miktarda yapıştırıcı dağıtın. Steril iğneyi 1 ml'lik bir insülin şırıngasına takın. İğneyi xiphoid işleminin altına yerleştirin, sol omuza doğru ilerleyin, diyaframdan torasik boşluğa girin.
Torasik boşluktan kalan havayı çıkarmak için şırınnayı hafifçe geri çekin. Tek bir akciğer bölgesinin multifotonin intravital görüntülemesi, mikrovaskülerin art arda üç gün içinde yer değiştirebileceğini gösterdi. Tek bir gemiden tanımlanabilir dal noktası her gün ardışık olarak tanımlanmıştır.
Etiketlenmemiş eritrositler daha büyük kaplarda akarken gölgeler yarattı. Dal noktalarının gemiye göre açısı eritrosit akış hızlarını hesaplamak için kullanılabilir. Eritrosit hızı da fareye floresan mikroküreler enjekte ederek ölçüldü ve iz uzunlukları çerçeve alma süresine bölünerek ölçüldü.
Sabit ve akan mikroküreler ayırt edilebilirdi. Yayılan tümör hücrelerinin kaderi, akciğerin yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi için pencere kullanılarak birkaç gün boyunca seri görüntüleme ile izlendi. Tümör hücresi ilk gün akciğer damarı'na ulaştı ve saplandı.
Bununla birlikte, hücre ikinci ve üçüncü günlerde akciğer vaskülatında tespit edildi, bu da devridaim veya ekstravazasyonu gösteriyordu. Akciğerde metastatik ilerlemenin doruğa ulaşan basamakları tümör hücresinin gelişinden başlayarak, tümör hücresinin akciğer parenkimine ekstravazasyonu ve makro metastaz oluşturmak için çoğalması ile görselleştirildi. Optik pencere çerçevesi yerleşimi sırasında akciğerde travmayı önlemeye özen göster.
Akciğer kanamaya eğilimlidir, bu da daha sonra yerleştirme sırasında kapak kayması yapışmasını engeller. Bu işlemi takiben gerçekleştirilebilecek diğer yöntemler arasında, mikrokartografiye değiştirilmiş bir yaklaşımla çalıştırıldığında, tekrarlanan görüntüleme için ilgi alanlarının hassas bir şekilde yeniden haline getirilmesine izin veren intravital mikroskopi sayılabilir. Bu protokol, metastaz mekanizması hakkında önemli bir sorunun araştırılmasında akciğerin görselleştirilmesine izin verildi.
Bu çalışma kanser hastaları için yeni bir tedaviyi yeniden inşa etme potansiyeli taşımaktadır.
