تستخدم هذه الدراسة الفئران BALB / c لإنشاء نموذج NEC ، والذي سيكون مفيدا لأبحاث الأمراض على الخلايا التائية. في اليوم الخامس ، لا تظهر المجموعتان أي فرق كبير في حجم الجسم. ومع ذلك ، في اليوم 10 كانت الفئران NEC أرق من الفئران الضابطة بشكل كبير.
زاد وزن الفئران في مجموعة NEC ببطء ، وانخفض معدل البقاء على قيد الحياة تدريجيا خلال الأيام الخمسة من إنشاء النموذج. يمكن أن يكون نموذج NEC مفيدا لدراسة استقطاب الخلايا التائية. سيوضح الإجراء يان تيان ، وهو خريج من مختبري.
قم بتجفيف الفئران ب 20 إلى 30 ميكرولتر من LPS ، وأطعمها ب 40 إلى 50 ميكرولتر من الصيغة في اليوم الخامس. من اليوم الخامس فصاعدا ، ضعها في جهاز نقص الأكسجة بنسبة 5٪ من الأكسجين لمدة 90 ثانية ، وأعد أكسجتها لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك ، ضع الفئران في بيئة أربع درجات مئوية لمدة 15 دقيقة وانقلها إلى حاضنة.
راقب عن كثب جميع الفئران ، ووزنها كل يوم ، وسجل بقاء الفئران خلال فترة الحث وسجل ما إذا كان برازها دمويا ولزجا. عند الإمساك بأنبوب المعدة في اليد اليمنى ، قم بتثبيت رأس الماوس بإصبع السبابة على رأس الماوس الذي تم الضغط عليه بلطف للخلف ولأسفل. أدخل أنبوب المعدة من الزاوية اليسرى من الفم وحركه ببطء من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات إلى وسط الفم.
ادفع 40 إلى 50 ميكرولتر من الصيغة أو 20 إلى 30 ميكرولتر من LPS إلى الجهاز الهضمي. إذا كان لدى الفأر منعكس قوي للقيء ودخل أنبوب المعدة إلى القصبة الهوائية ، فاسحب بلطف واسمح للفأر بالراحة قبل محاولة القذف مرة أخرى. اغمر أنسجة إيلوم الفئران الطازجة في الفورمالين بنسبة 10٪ ، وقم بتضمين الأنسجة في البارافين وقطعها من أربعة أقسام ميكرومتر.
لإزالة البارافينات من الأقسام ، ضعها في الزيلين. انقع لمدة خمس دقائق بنجاح في الإيثانول المطلق ، 95 ٪ الإيثانول ، 80 ٪ الإيثانول ، 70 ٪ الإيثانول والماء المقطر. بعد ذلك ، قم بتلطيخ الأقسام بمحلول الهيماتوكسيلين لمدة خمس دقائق ، وقم بتمييزها في 1٪ من حمض الهيدروكلوريك و 70٪ من الكحول لمدة خمس ثوان.
أخيرا ، قم بتلطيخها بمحلول الإيوسين لمدة دقيقة واحدة ، وفحص الأنسجة المرضية للأنسجة المعوية عند تكبير 40 مرة. أظهرت الصور المجهرية لنتيجة علم الأمراض المعوية من صفر إلى أربعة الغشاء المخاطي السليم والطبيعي ، وفصل خفيف تحت المخاط والصفيحة بروبريا ، وفصل معتدل تحت المخاط والصفيحة بروبريا ، وفصل تحت المخاط الحاد والصفيحة بروبريا ، واختفاء الزغابات المعوية مع نخر الأمعاء. كانت درجة علم الأمراض المعوية أعلى بكثير في مجموعة NEC مما كانت عليه في السيطرة مع قيمة P أقل من 0.001.
تم تسجيل البراز من الصفر مع الكريات جيدة التكوين إلى ثلاثة مع البراز السائل. في اليوم 10 ، كانت درجات البراز لمجموعات NEC أعلى بكثير في مجموعة NEC بقيمة P أقل من 0.001. في اليوم الخامس، لم تظهر المجموعتان أي فرق كبير في حجم الجسم.
ومع ذلك ، في اليوم 10 ، كانت الفئران في مجموعة NEC أرق بكثير وأصغر من الرأس إلى الذيل من الفئران في المجموعة الضابطة. زاد وزن الفئران في مجموعة NEC ببطء وانخفض معدل البقاء على قيد الحياة تدريجيا خلال الأيام الخمسة لإنشاء النموذج. أظهرت منطقة اللفائفي المقطوعة من الأنسجة المعوية من مرضى NEC نخرا في الأنسجة المخاطية المعوية.
في هذه الدراسة ، طورت الفئران في مجموعة NEC أيضا نزيفا ونخرا لفائفيا. عند تحريك الفأر ، تأكد من أن الماوس لا يكافح لتجنب التأثير على إدخال أنبوب المعدة. قم بفحص الفئران ب 20 إلى 30 ميكرولتر من LPS وإطعامها ب 40 إلى 50 ميكرولتر من الصيغة في اليوم الخامس.
من اليوم الخامس فصاعدا ، ضعه في جهاز نقص الأكسجة بنسبة 5٪ من الأكسجين لمدة 90 ثانية وأعد أكسجته لمدة ثلاث دقائق. يمكن أن يكون هذا النموذج مفيدا لأبحاث مرض NEC على الخلايا التائية وقد يساعد في دراسة استجابات خلايا Th2 في NEC.
