Questo studio utilizza topi BALB / c per stabilire il modello NEC, che sarà utile per la ricerca sulla malattia sulle cellule T. Il quinto giorno, i due gruppi non mostrano differenze significative sulle dimensioni del corpo. Tuttavia, il giorno 10 i topi NEC erano significativamente più sottili dei topi di controllo.
Il peso dei topi nel gruppo NEC è aumentato lentamente e il tasso di sopravvivenza è gradualmente diminuito durante i cinque giorni di creazione del modello. Il modello NEC potrebbe essere vantaggioso per studiare la polarizzazione delle cellule T. A dimostrare la procedura sarà Yan Tian, un post-laurea del mio laboratorio.
Gavage i topi con 20-30 microlitri di LPS e nutrirli con 40-50 microlitri di formula il quinto giorno. Dal quinto giorno in poi, metterli in un dispositivo per ipossia al 5% di ossigeno per 90 secondi e riossigenarli per tre minuti. Quindi, posizionare i topi in un ambiente a quattro gradi Celsius per 15 minuti e trasferirli in un'incubatrice.
Osservare da vicino tutti i topi, pesarli ogni giorno, registrare la sopravvivenza dei topi durante il periodo di induzione e registrare se le loro feci sono sanguinolente e appiccicose. Tenendo il tubo gastrico nella mano destra, fissare la testa del mouse con l'indice sulla testa del topo premuto delicatamente all'indietro e verso il basso. Inserire il tubo gastrico dall'angolo sinistro della bocca e spostarlo lentamente di due o tre centimetri al centro della bocca.
Spingere da 40 a 50 microlitri di formula o da 20 a 30 microlitri di LPS nel tratto digestivo. Se il topo ha un forte riflesso di vomito e il tubo gastrico entra nella trachea, estrarre delicatamente e lasciare riposare il topo prima di tentare di nuovo il gavage. Immergere il tessuto fresco dell'illum di topo nel 10% di formalina, incorporare i tessuti nella paraffina e tagliarli di quattro sezioni micrometriche.
Per deparaffinizzare le sezioni, metterle in xilene. Immergere per cinque minuti con successo in etanolo assoluto, 95% etanolo, 80% etanolo, 70% etanolo e acqua distillata. Quindi, colorare le sezioni con soluzione di ematossilina per cinque minuti e differenziarle in acido cloridrico all'1% e alcool al 70% per cinque secondi.
Infine, macchiarli con una soluzione di eosina per un minuto ed esaminare l'istopatologia del tessuto intestinale a 40 volte l'ingrandimento. Le fotomicrografie del punteggio di patologia intestinale da zero a quattro hanno mostrato mucosa intatta e normale, lieve separazione sottomucosa e lamina propria, moderata separazione sottomucosa e lamina propria, grave separazione sottomucosa e lamina propria e scomparsa dei villi intestinali con necrosi intestinale. Il punteggio di patologia intestinale era significativamente più alto nel gruppo NEC rispetto al controllo con un valore P inferiore a 0,001.
Lo sgabello è stato valutato da zero con pellet ben formati a tre con feci liquide. Il giorno 10, i punteggi delle feci dei gruppi NEC erano significativamente più alti nel gruppo NEC con un valore P inferiore a 0,001. Il quinto giorno, i due gruppi non hanno mostrato differenze significative nelle dimensioni del corpo.
Tuttavia, il giorno 10, i topi nel gruppo NEC erano significativamente più sottili e più piccoli dalla testa alla coda rispetto ai topi del gruppo di controllo. Il peso dei topi nel gruppo NEC è aumentato lentamente e il tasso di sopravvivenza è gradualmente diminuito durante i cinque giorni di creazione del modello. L'area ileocecale resecata del tessuto intestinale da pazienti NEC ha mostrato necrosi del tessuto della mucosa intestinale.
In questo studio, i topi del gruppo NEC hanno anche sviluppato emorragia ileocecale e necrosi. Quando si imbavaglia il mouse, assicurarsi che il mouse non abbia difficoltà a evitare di effettuare l'inserimento del tubo gastrico. Gavage i topi con 20-30 microlitri di LPS e nutrirli con 40-50 microlitri di formula il quinto giorno.
Dal quinto giorno in poi, mettere poi in un dispositivo ipossia al 5% di ossigeno per 90 secondi e riossigenarli per tre minuti. Questo modello potrebbe essere utile per la ricerca sulla malattia NEC sulle cellule T e potrebbe aiutare a studiare le risposte delle cellule Th2 nel NEC.
