本研究使用BALB / c小鼠建立NEC模型,这将有助于T细胞的疾病研究。在第五天,两组在体型上没有显着差异。然而,在第10天,NEC小鼠明显比对照组小鼠瘦。
NEC组小鼠体重缓慢增加,在模型建立5 d内存活率逐渐下降。NEC模型可能有利于研究T细胞极化。演示该程序的将是我实验室的研究生Yan Tian。
用20至30微升LPS饲锻小鼠,并在第五天用40至50微升配方奶喂养它们。从第五天开始,将它们放在缺氧装置中,在5%氧气下放置90秒,然后重新充氧三分钟。接下来,将小鼠置于四摄氏度的环境中15分钟,然后将其转移到培养箱中。
密切观察所有小鼠,每天称量,记录诱导期间小鼠的存活情况,并记录其粪便是否血腥和粘稠。右手握住胃管,用食指轻轻地向后和向下按压鼠标头部,固定鼠标头部。将胃管从口腔左角插入,并将其缓慢移动到口腔中心两到三厘米。
将40至50微升配方奶粉或20至30微升LPS推入消化道。如果小鼠具有很强的呕吐反射,并且胃管进入气管,请轻轻拉出并让小鼠休息,然后再尝试强饲。将新鲜的小鼠组织浸入10%福尔马林中,将组织嵌入石蜡中,并将其切成四微米切片。
要使切片脱蜡,请将它们放入二甲苯中。在无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中成功浸泡五分钟。接下来,用苏木精溶液染色切片五分钟,并在1%盐酸和70%酒精中区分它们五秒钟。
最后,用曙红溶液染色它们一分钟,并以40倍放大镜检查肠道组织的组织病理学。肠道病理学评分的显微照片显示,黏膜完整且正常,轻度黏膜下和本体层分离,中度黏膜下和本体层分离,重度黏膜下和固有层分离,以及肠绒毛消失伴肠坏死。NEC组的肠道病理学评分显著高于对照组,P值小于0.001。
粪便从形状良好的颗粒的零到液体粪便的三个评分。第10天,NEC组的粪便评分显著高于NEC组,P值小于0.001。在第五天,两组在体型上没有显着差异。
然而,在第10天,NEC组的小鼠比对照组的小鼠从头到尾明显更薄,更小。NEC组小鼠体重缓慢增加,存活率在建立模型的5 d内逐渐下降。NEC患者切除的肠组织回盲区显示肠粘膜组织坏死。
在这项研究中,NEC组的小鼠也出现了回盲出血和坏死。当加牙时,确保鼠标不会挣扎,以避免影响胃管插入。用20至30微升LPS饲锻小鼠,并在第五天用40至50微升配方奶喂养它们。
从第五天开始,然后放入缺氧装置中,在5%氧气下放置90秒,然后重新加氧三分钟。该模型可能有助于T细胞的NEC疾病研究,并可能有助于研究NEC中的Th2细胞反应。