Este estudo utiliza camundongos BALB/c para estabelecer o modelo NEC, que será útil para pesquisas sobre doenças em células T. No quinto dia, os dois grupos não mostram diferença significativa no tamanho do corpo. No entanto, no 10º dia, os camundongos nec eram mais finos do que os ratos de controle significativamente.
O peso dos camundongos no grupo NEC aumentou lentamente, e a taxa de sobrevivência diminuiu gradualmente durante os cinco dias de estabelecimento do modelo. O modelo NEC pode ser vantajoso para estudar a polarização celular T. Demonstrando o procedimento será Yan Tian, um pós-graduado do meu laboratório.
Gavage os ratos com 20 a 30 microliters de LPS, e alimente-os com 40 a 50 microliters de fórmula no quinto dia. A partir do quinto dia, coloque-os em um dispositivo de hipóxia a 5% de oxigênio por 90 segundos, e re-oxigene-os por três minutos. Em seguida, coloque os ratos em um ambiente de quatro graus Celsius por 15 minutos e transfira-os para uma incubadora.
Observe minuciosamente todos os ratos, pese-os todos os dias, regise a sobrevivência dos ratos durante o período de indução e regisse se suas fezes estão ensanguentadas e pegajosas. Segurando a sonda gástrica na mão direita, fixar a cabeça do rato com o dedo indicador na cabeça do mouse suavemente pressionado para trás e para baixo. Insira a sonda gástrica do canto esquerdo da boca e mova-a lentamente de dois a três centímetros para o centro da boca.
Empurre de 40 a 50 microliters de fórmula ou 20 a 30 microliters de LPS no trato digestivo. Se o rato tiver um forte reflexo de vômito e a sonda gástrica entrar na traqueia, puxe suavemente e deixe o rato descansar antes de tentar gavage novamente. Mergulhe o tecido illum do rato fresco em 10%, incorpore os tecidos em parafina e corte-os de quatro seções de micrômetros.
Para desparafinar as seções, coloque-as em xileno. Mergulhe por cinco minutos com sucesso em etanol absoluto, 95% etanol, 80% etanol, 70% etanol e água destilada. Em seguida, colorir as seções com solução de hematoxilina por cinco minutos, e diferenciá-las em ácido 1% clorídrico e 70% de álcool por cinco segundos.
Finalmente, manche-os com solução de eosina por um minuto, e examine a histopatologia do tecido intestinal a 40 vezes a ampliação. Fotomicrogramas do escore da patologia intestinal de zero a quatro apresentaram mucosa intacta e normal, leve separação submucosal e lamina propria, separação submucosal e lamina propria moderada, separação submucosal e lamina propria grave, e desaparecimento de villi intestinal com necrose intestinal. O escore de patologia intestinal foi significativamente maior no grupo NEC do que no controle com valor P inferior a 0,001.
O banco foi marcado do zero com pelotas bem formadas para três com fezes líquidas. No dia 10, as pontuações dos bancos dos grupos NEC foram significativamente maiores no grupo NEC com um valor P inferior a 0,001. No quinto dia, os dois grupos não apresentaram diferença significativa no tamanho do corpo.
No entanto, no dia 10, os camundongos do grupo NEC eram significativamente mais finos e menores da cabeça à cauda do que os ratos do grupo controle. O peso dos camundongos no grupo NEC aumentou lentamente e a taxa de sobrevivência diminuiu gradualmente durante os cinco dias de estabelecimento do modelo. A área ileocecal ressecizada do tecido intestinal dos pacientes da NEC mostrou necrose do tecido mucosal intestinal.
Neste estudo, os camundongos do grupo NEC também desenvolveram hemorragia ileocecal e necrose. Ao gavaging o mouse, certifique-se de que o rato não se esforça para evitar a inserção da sonda gástrica. Gavage os ratos com 20 a 30 microliters de LPS e alimente-os com 40 a 50 microliters de fórmula no quinto dia.
A partir do quinto dia, coloque-o em um dispositivo de hipóxia a 5% de oxigênio por 90 segundos e reoxigená-los por três minutos. Este modelo pode ser útil para a pesquisa da doença nec em células T e pode ajudar a estudar respostas de células Th2 na NEC.
