本研究では、BALB/cマウスを用いてNECモデルを確立し、T細胞の疾患研究に役立てる。5日目に、2つのグループは体の大きさに有意差を示さなかった。しかし、10日目のNECマウスは、対照マウスよりも有意に痩せていた。
NEC群のマウスの体重はゆっくりと増加し、生存率はモデル確立の5日間で徐々に減少した。NECモデルは、T細胞分極の研究に有利である可能性があります。手順を実演するのは、私の研究室の大学院生であるYan Tianです。
マウスに20〜30マイクロリットルのLPSを経食し、5日目に40〜50マイクロリットルのフォーミュラを投与する。5日目以降、酸素濃度5%の低酸素装置に90秒間入れ、3分間再酸素化します。次に、マウスを摂氏4度の環境に15分間置き、インキュベーターに移す。
すべてのマウスを注意深く観察し、毎日体重を量り、誘導期間中のマウスの生存を記録し、便が血まみれで粘着性があるかどうかを記録する。右手に胃管を持ち、マウスの頭に人差し指を当ててマウスの頭を前後に静かに押して固定します。胃管を口の左隅から挿入し、ゆっくりと口の中心まで2〜3センチ動かします。
40〜50マイクロリットルのフォーミュラまたは20〜30マイクロリットルのLPSを消化管に押し込みます。マウスの嘔吐反射が強く、胃管が気管に入った場合は、優しく引き抜いてマウスを休ませてから、再度経管栄養を試みてください。新鮮なマウスのイルム組織を10%ホルマリンに浸し、組織をパラフィンに埋め込み、4マイクロメートルの切片でスライスする。
セクションを脱パラフィンするには、キシレンに入れます。無水エタノール、95%エタノール、80%エタノール、70%エタノール、蒸留水に5分間浸漬することに成功しました。次に、切片をヘマトキシリン溶液で5分間染色し、1%塩酸と70%アルコールで5秒間区別する。
最後に、それらをエオジン溶液で1分間染色し、40倍の倍率で腸組織の組織病理学を調べた。ゼロから4までの腸病理スコアの顕微鏡写真は、無傷および正常な粘膜、軽度の粘膜下および粘膜固有層分離、中等度の粘膜下および粘膜固有層分離、重度の粘膜下および粘膜固有層分離、ならびに腸壊死を伴う腸内絨毛消失を示した。腸管病理スコアは、NEC群において、P値が0.001未満の対照群よりも有意に高かった。
便は、整形ペレットで0から液体便で3にスコアを付けました。10日目のNEC群の便スコアは、P値が0.001未満のNEC群で有意に高かった。5日目に、2つの群は体の大きさに有意な差を示さなかった。
しかし、10日目に、NEC群のマウスは、対照群のマウスよりも頭から尾まで有意に痩せ細り、小さかった。NEC群のマウスの体重はゆっくりと増加し、生存率はモデル確立の5日間で徐々に減少した。NEC患者から腸組織の回腸領域を切除したところ、腸粘膜組織の壊死が見られた。
本研究では、NEC群のマウスも回腸出血および壊死を発症した。マウスを経管栄養処理するときは、マウスが胃管の挿入に影響するのを避けるために苦労していないことを確認してください。マウスに20〜30マイクロリットルのLPSを経食し、5日目に40〜50マイクロリットルのフォーミュラを投与する。
5日目以降、酸素濃度5%の低酸素装置に90秒間入れ、3分間再酸素化します。このモデルは、T細胞に関するNEC疾患研究に役立つ可能性があり、NECにおけるTh2細胞応答の研究に役立つ可能性がある。
