Ce protocole décrit une méthode non invasive pour induire des maux de dos chroniques chez la souris jusqu’à 10 semaines, qui peut être effectuée rapidement et de manière fiable avec un minimum d’entraînement. L’aspect le plus difficile de cette technique est de reconnaître comment l’injection de ligament se sent par rapport à l’injection de muscle. La sensation d’une résistance au contact indique une injection ligamentaire.
L’absence de résistance signifie que l’aiguille pourrait se trouver dans le muscle ou la cavité abdominale. Pour commencer, prenez une surface plane stérile pour placer la souris. Ensuite, placez une station de récupération de coussin chauffant à côté de la configuration chirurgicale pour transférer immédiatement les souris après l’injection.
Ensuite, préparez l’urokinase et une seringue Hamilton. Dessinez la solution au préalable pour minimiser le temps que la souris passe sous anesthésie. Après avoir anesthésié la souris, utilisez deux doigts pour localiser les segments rachidiens lombaires en L2 et L3 sous la cage thoracique et vérifiez le site d’injection.
Placez l’embout de la seringue Hamilton à côté de la colonne vertébrale. Placez la seringue à un angle d’environ 45 degrés dans le ligament immédiatement adjacent à l’os. Insérez la pointe de l’aiguille doucement, mais fermement, dans le ligament et injectez lentement jusqu’à ce que les cinq microlitres aient été injectés.
Retirez l’aiguille doucement et lentement. Ensuite, placez la souris dans la station de récupération de chaleur jusqu’à ce qu’elle se réveille et devienne mobile. Examinez les souris pendant une heure après la chirurgie pour vous assurer que toutes les fonctions motrices normales se poursuivent.
Après la chirurgie, vérifiez le poids et le site d’injection des souris tous les jours pendant une semaine pour éviter toute infection ou complication. Avant l’essai, déplacez chaque animal dans une cabine transparente séparée sur la table d’essai avec un dessus d’écran. Ensuite, stimulez le coussinet plantaire avec le filament Von Frey de 3,61 qui suscite quatre grammes de force.
Un retrait du pied de trois à cinq stimuli est considéré comme une réponse positive. Maintenant, appliquez le filament le plus faible suivant de la série jusqu’à ce que l’animal cesse de répondre à la stimulation mécanique. Utilisez le filament le plus élevé jusqu’à ce qu’une réponse soit obtenue, puis revenez au filament inférieur.
À l’aide d’un algorithme d’ajustement de courbe, calculez le seuil de retrait mécanique, qui est la quantité minimale de force nécessaire pour obtenir une réponse dans 50 % des cas. Pour effectuer le test de Hargreaves, placez les souris dans des cabines sur une surface en verre chauffée par le bas par un émetteur infrarouge. Mesurez le temps écoulé entre l’application d’un stimulus de lumière infrarouge sur la patte arrière de la souris et le retrait sous forme de latence du pied.
Pour le test de la plaque froide, placez les souris sur l’appareil de la plaque froide refroidie à moins neuf degrés Celsius. Enregistrez le temps qu’il faut à la souris pour lever son pied après avoir été placée sur l’appareil comme latence pour retirer le pied. Pour effectuer le test d’anxiété, placez chaque animal dans la boîte de test de préférence de place avec un passage entre deux chambres.
Une chambre de l’appareil doit être bien éclairée, tandis que le côté opposé doit rester sombre. À l’aide d’un ordinateur, surveillez les temps d’occupation et les transitions de l’animal pendant un test de 10 minutes. Ensuite, placez les rongeurs modèles ou les animaux naïfs sur le labyrinthe zéro, ou utilisez le test de préférence de lieu clair ou sombre à deux chambres.
Évaluez le temps passé dans les zones fermées et ouvertes du labyrinthe à l’aide d’un chronomètre. Pour le test de dépression des éclaboussures de saccharose, vaporisez une solution de 10 à 30 % de saccharose sur le code dorsal et notez la fréquence, la durée et la latence du toilettage pendant 10 minutes. Pour effectuer de nouveaux tests d’objets, acclimatez les souris individuellement à une cage en plastique transparent avec un dessus ouvert pendant une heure.
Ajoutez deux mini-figurines identiques dans les coins opposés de la cage pendant cinq minutes. Acclimatez les animaux le jour du test pendant une heure et placez les deux mini-figurines identiques dans les mêmes positions de la cage pendant cinq minutes avant de les ramener dans la cage d’accueil. Ensuite, remplacez l’une des figures originales par un nouvel objet nettement différent.
Après quatre heures, remettez les souris dans la cage d’essai et notez le temps passé à explorer les objets. Pour l’évaluation de la fonction motrice, construisez un tunnel à partir d’un tube d’essuie-tout coupé dans le sens de la longueur sur un bord. Étalez le tunnel sur un morceau de papier d’imprimante propre.
Tenez doucement les souris jusqu’à ce qu’elles soient calmes. Appliquez de l’encre de Chine non toxique sur les pattes d’une souris en les plaçant dans un encrier, un tampon encreur ou à l’aide d’un coton-tige. Relâchez les souris à l’entrée du tunnel.
Laissez-les courir dans le tunnel et capturez-les à la fin. Marquez les empreintes de pattes en fonction de la longueur de la foulée, de la largeur de la foulée et de l’écartement des orteils. Des tests d’hypersensibilité mécanique et thermique ont démontré que les souris souffrant de maux de dos chroniques présentaient une sensibilité mécanique, thermique et froide significativement accrue par rapport aux témoins naïfs.
L’analyse de l’anxiété a montré que le temps total passé dans la chambre lumineuse de la boîte claire et sombre et le nombre d’événements d’élevage étaient significativement plus faibles chez les souris souffrant de maux de dos chroniques, indiquant une anxiété. Au cours du test d’éclaboussures de saccharose, les souris souffrant de maux de dos chroniques ont présenté un temps de toilettage et un nombre de toilettage inférieurs. Cependant, le temps avant le début du toilettage a été considérablement augmenté.
La longueur de foulée entre les souris souffrant de maux de dos chroniques et les souris naïves était significativement différente. La chose la plus importante à retenir lorsque vous tentez cette procédure est que vous visez les ligaments autour de la colonne vertébrale, et non le muscle. Le modèle du mal de dos chronique fournit un outil fiable pour évaluer une variété de nouvelles recherches, pharmacologiques et autres thérapies potentielles.
