وبالاستفادة من Z-REX ، يمكن للباحثين استجواب كيفية تغيير استجابات الإشارات الفردية استجابة لرابط تفاعلي معين يتعامل مع بروتين معين مهم في الظروف الفسيولوجية القريبة في يرقات الزرد. الطرق التقليدية مثل الجزيئات الصغيرة التفاعلية للجرعة السائبة التي تسبب الأهداف والسمية ولا تعطي أي سيطرة على خصوصية هدف اليجند. يمكن ل Z-REX ربط ارتباط هدف ليجند معين بنمط ظاهري محدد بدقة مكانية زمانية عالية.
لقد أظهرنا مؤخرا كيف أن المستقلب التفاعلي HNE ، وهو هدف ومسار مرتبط اكتشفه Z-REX ، يمكن من تطوير مثبطات كيناز دقيقة خاصة بالنظائر ضد سرطانات الثدي الثلاثية السلبية. ابدأ بمحاذاة الأجنة في أخاديد صفيحة حقن مملوءة بمحلول ملح هانك المتوازن الطازج بنسبة 10٪ أو HBSS. اغمر طرف الإبرة في الوسط ، وإذا لزم الأمر ، ضع نبضات الحقن لإزالة فقاعات الهواء في الطرف لحقن الجنين ، اخترق كيس المشيم والصفار بحركة واحدة وقم بتطبيق نبضة حقن.
بعد حقن الأجنة الأخرى ، اشطفها في طبق بتري جديد يحتوي على وسائط HBSS جديدة باستخدام زجاجة بخ. تجمع الأجنة غير المحقونة في طبق آخر. لإجراء تحليل علاج Z-REX ، ابدأ بتوزيع الأجنة المحقونة في أطباق 10 سم.
في غرفة مظلمة ذات ضوء أحمر ، استبدل الوسط ب 30 ملليلتر من 10٪ HBSS مع أو بدون ميكرومولار واحد من مسبار REX. احتضان الأجنة عند 28.5 درجة مئوية في الظلام. في 30 ساعة بعد الإخصاب ، استبدل الوسائط في الظلام.
بعد تكرار الحضانة واستبدال الوسائط مرتين ، قم بتعريض الأجنة للضوء من مصباح الأشعة فوق البنفسجية الذي تم تسخينه مسبقا والذي يحوم كل 30 ثانية. لإجراء فحص النمط الظاهري ، قم بإزالة الأجنة غير المخصبة أو الميتة من اللوحة التي تحتوي على الأجنة المخدرة. باستخدام ملقط حاد ، قم بإزالة مشيمية الأجنة.
قم بتركيب الأجنة على صفيحة أغوار 2٪ محضرة بوسط HBSS بنسبة 10٪ وراقبها تحت المجهر المجسم. استخدم ImageJ لحساب عدد العدلات والبلاعم لكل سمكة. حدد التحديد اليدوي وقم بوضع دائرة حول السمكة بأكملها ، ثم حدد الخيار البحث عن الحد الأقصى لحساب الخلايا الفلورية في هذه الدراسة ، أظهرت الأجنة المعالجة ب Z-REX فقدانا للعدلات والبلاعم.
كان هذا التأثير غائبا في المجموعات غير المعالجة. لم يتم تشغيل مسار إشارات موت الخلايا المبرمج في مجموعة Halo-P2A-Keap1 مما أدى إلى مستويات البلاعم والعدلات دون تغيير. كما لوحظت نتائج مماثلة في متحور Halo-TEV-Keap1 الذي لم يستجب ل HNE.
أظهرت تحليلات تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمية في الوقت الفعلي انخفاضا في تنظيم الجينات المرتبطة بالمناعة وتنظيم الجينات المضادة للأكسدة بعد Z-REX. أظهر تلطيخ التألق المناعي أن P2A-split-construct يحتوي على علامات HA أكثر مرتين من TeV-fusion-build ، مما يدل على مستويات تعبير مماثلة. كانت مستويات التعبير للنوع البري والنوع الطافر Halo-TeV-Keap1 متشابهة أيضا.
في خط مراسل العدلات المعدلة وراثيا المعالجة ب Z-REX ، لوحظ أيضا التموضع المشترك للعدلات والكاسباز النشط 3. الشيء الأكثر أهمية هو إعداد مستنداتك بشكل صحيح. سيؤدي الحد إلى تحسين نتائجك حقا.
لقد اعتمدنا Z-REX ، وهي فكرة لمنصة فحص الأدوية المعروفة باسم Localis-REX. لم تتمكن أي تقنية أخرى حتى الآن من تحقيق مثل هذا الربط المحلي المحدد والتفاعلي أو رسم خرائط الهدف. لقد ساعدنا على تطوير الأدوية المرشحة للكهرباء نحو علاج سرطان الثدي.
نظرا للأهمية المتزايدة للإشارات الموضعية عبر العديد من المجالات ، والسرطان ، وعلم المناعة ، والشيخوخة ، وما إلى ذلك ، فإن Z-Rex ، الأداة الوحيدة القادرة على رسم خرائط الأحداث الموجهة لليجند التفاعلي المحلي ، تعد بمساعدة العديد من المجالات.
