يركز بحثنا بشكل أساسي على آليات استقبال البرد لأحداث المرحلة الثالثة من الديدان الخيطية لخشب الصنوبر ، ومعالجة كيفية مقاومة الديدان الخيطية لخشب الصنوبر في مقاومة الإجهاد في درجات الحرارة المنخفضة عند 20 تحت الصفر تقريبا. التحدي التجريبي الحالي هو وقت الجفاف ، وهو أمر بالغ الأهمية في تحديد معدل بقاء الأحداث المشتتة في المرحلة الثالثة من الجراب الزيلي. ننصح أنه كلما طالت مدة الوقت ، كان التركيز أفضل.
لقد أثبتنا أن دخول المرحلة الثالثة من الأحداث المشتتة من الجراب الزاحفي إلى التشفير يمكنهم من تحمل البيئات ذات درجات الحرارة المنخفضة الشديدة ، مما يسلط الضوء على آلية البقاء الرئيسية في الظروف القاسية. يعالج بروتوكولنا الفجوة البحثية من خلال إحداث التشفير في الديدان الخيطية من خشب الصنوبر وإحيائها بنجاح من الناحية المعمارية. إنه يتيح إجراء دراسات خاضعة للرقابة لآليات بقائها على قيد الحياة وتطبيقاتها الإضافية.
بروتوكولنا بسيط وموثوق به للحصول على دعم فني قوي للغاية للوقوف على آليات مقاومة الإجهاد للديدان الخيطية لخشب الصنوبر ، مما يجعله أكثر سهولة وكفاءة مقارنة بالتقنيات الأخرى. ابدأ بتقطيع جذوع الأشجار المستديرة المجمعة من Pinus massoniana إلى شرائح بسمك 0.5 إلى سنتيمتر واحد باستخدام منشار. تقليم الشرائح إلى شرائح صغيرة طولها من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات.
ضع الشرائط الخشبية الصغيرة في أكياس محكمة الغلق وقم بتخزين الأكياس في المختبر لاستخدامها مرة أخرى. قم بتوصيل أنبوب مطاطي بالطرف الضيق لقمع زجاجي طويل العنق بقطر تقريبي يبلغ 15 سم. قم بتأمين الأنبوب المطاطي باستخدام pinchcock وضع القمع المجمع على حامل قمع.
لف الشرائط الخشبية الصغيرة بالكامل في طبقة واحدة من المناديل الورقية. ضع الشرائط الخشبية الملفوفة في القمع وأضف الماء المقطر حتى تغمر جميع الشرائط الخشبية ، ثم حرر القرصة ببطء في الجزء السفلي من القمع واترك 2000 إلى 5،000 ميكرولتر من الخليط يتسرب إلى طبق بتري قطره خمسة سنتيمترات للفحص المجهري وتحديد المورفولوجية. راقب الخليط للتعرف على J3 Bursaphelenchus xylophilus من خلال ملاحظة ميزات مثل الأنماط ، وبصيلات المريء المتوسطة ، وقطرات الدهون ، وأشكال الذيل الشبيهة بالأصابع.
باستخدام ماصة سعة 10 ميكرولتر، استنشق 10 ميكرولترات من السائل مع ديدان خيطية واحدة في كل مرة لنقل J3 Bursaphelenchus xylophilus الفردي إلى شريحة. أخيرا ، قم بتعقيم الشرائط الخشبية المتبقية والمواد الخشبية المصابة بعد استخراج J3 Bursaphelenchus xylophilus لمنع المزيد من التلوث. للبدء ، استخرج عينات من J3 Bursaphelenchus xylophilus من Pinus massoniana ، ثم قم بإعداد محلول مائي من كلوريد البوتاسيوم بنسبة 8٪ للتنظيم التناضحي.
باستخدام ماصة ، أضف 10 ميكرولتر من المحلول المائي كلوريد البوتاسيوم بنسبة 8٪ إلى الشريحة التي تحتوي على خليط J3 Bursaphelenchus xylophilus. ضع الشريحة على مرحلة المجهر واترك الماء يتبخر بشكل طبيعي. راقب عملية الجفاف J3 Bursaphelenchus xylophilus تحت المجهر.
راقب العلامات مثل تجعد الجسم وتجميعه. عندما يتبخر الماء تماما وتترسب بلورات كلوريد البوتاسيوم ، لاحظ أن الديدان الخيطية توقف الحركة وتدخل داء الكريبتوبيوس. ضع الكريبتوبيوتيك J3 Bursaphelenchus xylophilus في بيئة درجة حرارة ثابتة تبلغ 20 درجة مئوية تحت الصفر لمدة 24 ساعة.
بعد 24 ساعة ، استخدم ماصة لإضافة ما يقرب من 300 ميكرولتر من الماء المقطر حول الأحداث التي خضعت للمعالجة بدرجة حرارة منخفضة. راقب عملية الإماهة J3 Bursaphelenchus xylophilus تحت المجهر. راقب العلامات مثل تمدد الجسم واستئناف الحركة.
